高膽固醇血癥低密度脂蛋白受體基因XspI位點多態(tài)性與內脂素的相關性

霍麗靜　張明明　謝　霞　趙　培　宋光耀

(河北省人民醫(yī)院檢驗科，河北　石家莊　050051)

?

高膽固醇血癥低密度脂蛋白受體基因XspI位點多態(tài)性與內脂素的相關性

霍麗靜張明明謝霞趙培宋光耀

(河北省人民醫(yī)院檢驗科，河北石家莊050051)

摘要〔〕目的探索高膽固醇血癥低密度脂蛋白受體(LDL-R)基因XspI位點多態(tài)性與內脂素的相關性。方法應用聚合酶鏈技術-限制性片段長度多態(tài)性技術檢測LDL-R基因第2外顯子XspI位點基因多態(tài)性，將224例高膽固醇血癥患者按照基因型分為三組：X+X+組；X+X-組；X-X-組。同時應用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血清內脂素的水平。結果①高膽固醇血癥組與正常對照組相比，腰圍、體重指數(shù)(BMI)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C),氧化低密度脂蛋白(oxLDL)、內脂素明顯升高(P<0.05)。②X+X+組體重、腰圍、BMI、LDL、oxLDL較X-X-組和 X+X-組明顯升高(P<0.05)。③血清內脂素水平在X-X-組 、X+X-組、X+X+組中依次升高(P<0.05)。④血清內脂素與體重、腰圍、BMI、總膽固醇(TC)、LDL-C、oxLDL呈正相關(r分別為0.226、0.277、0.272、0.332、0.348、0.372，P<0.05)。結論①高膽固醇血癥組較正常對照組體重、腰圍、BMI 、oxLDL、內脂素升高。②LDL-R基因 XspI X+X+基因型組體重、腰圍、BMI均高于X-X-組和X-X+組。③血清內脂素水平與LDL-R基因多態(tài)性有關，X+X+組內脂素水平最高。④內脂素與血清TC、LDL-C、oxLDL水平呈正相關。

關鍵詞〔〕高膽固醇血癥；基因多態(tài)性；脂肪細胞因子；氧化低密度脂蛋白；內脂素

高膽固醇血癥與心腦血管和代謝性疾病關系密切，已成為研究的熱點〔1〕。血清總膽固醇(TC)水平受多種因素影響，研究發(fā)現(xiàn)低密度脂蛋白受體(LDL-R)在血漿膽固醇的動態(tài)平衡中起著關鍵性的作用，其功能缺陷可以導致高膽固醇血癥〔2〕。LDL-R基因的XspI酶切位點位于LDL-R 基因的第2外顯子，第97位堿基發(fā)生C→T 突變，產生1個XspI酶識別位點。該突變位點位于配體結合域內，該區(qū)域發(fā)生突變可導致結合轉運低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)的功能下降，使LDL-C清除障礙，在體內蓄積，導致血清中TC水平升高〔3〕。內脂素是內臟組織而非皮下脂肪組織分泌的一種新的脂肪細胞因子，其血漿濃度與內臟脂肪含量密切相關。而目前關于LDL-R基因多態(tài)性與內脂素水平關系的研究未見報道。

1對象與方法

1.1研究對象選取我院體檢中心2010年12月至2011年12月健康查體人群中224例高膽固醇血癥患者，診斷參考2007年“中國成人血脂異常防治指南”中臨床分型標準〔4〕。 同時收集健康對照組120例作正常對照，兩組人群年齡〔(51.2±10.2)歲，(50.8±9.92)歲〕匹配。根據(jù)LDL-R基因第2外顯子XspI位點基因多態(tài)性將受試者按照基因型分為三組：X+X+組18例；X+X-組45例；X-X-組161例。

1.2研究方法一般指標：測量身高、體重、腰圍和血壓，計算體重指數(shù)(BMI)。血脂測定：健康體檢人群過夜空腹12 h，次日清晨抽取肘靜脈血，留取4 ml,置于促凝管中，分離血清，待測血脂；另取4 ml置于(EDTA)抗凝管中，置于-80℃低溫冰箱中保存，用于提取DNA。TC、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)采用氧化酶法測定，LDL-C計算得出。數(shù)據(jù)均由全自動生化分析儀測得，試劑盒由Beckman生物技術公司提供。氧化低密度脂蛋白(oxLDL)與內脂素的測定：酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢測oxLDL與內脂素。oxLDL 試劑盒由美國RB公司提供，板內、板間變異系數(shù)均<10%；最小可測人oxLDL達0.5 μg/dl。內脂素試劑盒由美國RB公司提供，最小可測人內脂素達3 ng/ml；板內、板間變異系數(shù)均<10%。

1.3統(tǒng)計學處理應用SPSS13.0軟件行方差分析及χ2檢驗。

2結果

2.1高膽固醇血癥受試者PCR-RFLP分析結果X+X+組體重、腰圍、BMI較X-X-組和 X+X-組明顯升高(P<0.05)。血清TC、LDL-C、oxLDL、內脂素水平在X-X-組 、X+X-組、X+X+組中依次升高(P<0.05)。見表1。

組別n年齡(歲)體重(kg)腰圍(cm)BMI(kg/m2)TC(mmol/L)TG(mmol/L)HDL-C(mmol/L)LDL-C(mmol/L)oxLDL(μg/dl)內脂素(ng/ml)X+X+組1848.0±10.1579.17±14.181)2)94.33±11.401)2)28.84±3.331)2)8.49±0.391)2)0.67±0.161.58±0.266.61±0.561)2)72.68±9.181)2)37.71±15.681)2)X+X-組4550.92±7.4767.42±6.6088.67±6.8725.16±1.897.38±0.471)0.77±0.211.56±0.205.60±0.451)34.29±16.981)30.50±9.841)X-X-組16152.18±10.4666.38±10.1285.44±8.1824.94±2.576.96±0.610.75±0.221.73±0.354.89±0.6415.34±16.8420.91±7.27F值1.7274.4953.8816.49520.5850.481.75926.18437.37716.293P值<0.05<0.05<0.05<0.05<0.05>0.05>0.05<0.05<0.05<0.05

與X-X-組比較：1)P<0.05；與X+X-組比較：2)P<0.05

第一作者：霍麗靜(1979-)，女，主管檢驗師，碩士，主要從事脂代謝疾病研究。

2.2兩組一般指標及血脂測定高膽固醇血癥組與正常對照組相比，腰圍〔(87.1±8.4)cm，(83.7±7.8)cm〕、BMI〔(25.1±2.7)kg/m2，(23.9±2.7)kg/m2〕明顯升高；LDL-C〔(5.4±0.5)mmol/L,(2.6±0.6)mmol/L〕、oxLDL〔(32.5±14.1)μg/dl，(12.3±8.6)μg/dl〕、內脂素〔(27.93±8.46)ng/ml，(17.18±7.63)ng/ml〕、TC〔(7.2±0.5)mmol/L，(4.3±0.8)mmol/L〕明顯升高(P<0.05)。TG〔(0.7±0.2)mmol/L，(1.1±0.3)mmol/L〕、HDL-C水平〔(1.6±0.2)mmol/L，(1.3±0.3)mmol/L〕無明顯差異(P>0.05)。

2.3相關性分析血清內脂素與體重、腰圍、BMI、TC、LDL-C、oxLDL呈正相關(r=0.226、0.277、0.272、0.332、0.348、0.372，P<0.05)。

2.4多元線性回歸分析以內脂素水平因應變量，年齡、體重、腰圍、BMI、TC、LDL-C、oxLDL為自變量，進行多元逐步回歸分析，最后oxLDL、LDL-C進入方程?；貧w方程為：y=0.118(oxLDL)+2.877(LDL-C)-2.550(P<0.05)。見表2。

表2內脂素為因變量的多元線性回歸分析

變量回歸系數(shù)標準誤標準化系數(shù)t值P值常務量-2.5510.725--0.2380.813oxLDL0.1180.0470.2722.5000.014LDL-C2.8771.3690.2282.1010.039

3討論

高膽固醇血癥是導致動脈粥樣硬化的重要原因，是心腦血管疾病的重要危險因子。血清膽固醇的水平與遺傳及環(huán)境因素均有關，本研究發(fā)現(xiàn)LDL-R基因第2外顯子XspI位點存在基因多態(tài)性，其多態(tài)性變化是中國人高膽固醇血癥產生的原因之一，可以作為高膽固醇血癥理想的篩查指標〔5〕。有研究證實〔6〕oxLDL、內脂素水平與血脂異常密切相關，而高膽固醇血癥患者不同基因型血清oxLDL、內脂素水平的變化目前尚無人報道。本結果顯示，隨著膽固醇水平的升高，oxLDL濃度也隨之升高，這與Hachani等〔7〕的研究結果一致，提示高膽固醇血癥常伴血漿ox-LDL水平增高。目前越來越多的證據(jù)表明血漿oxLDL水平與急性冠脈綜合征的嚴重程度呈正相關〔8〕。研究認為高膽固醇血癥導致體內自由基代謝平衡失調，LDL-C極易被自由基、脂質過氧化物修飾，引起內皮損傷和泡沫細胞的形成，從而加快了AS的發(fā)生〔9,10〕。本研究結果說明LDL-R基因第2外顯子XspI位點的多態(tài)性與oxLDL及膽固醇水平有密切關系。

內脂素是Fukuhara等〔11〕發(fā)現(xiàn)的一種新的脂肪因子，由473個氨基酸組成，其分子量為52 kD。它在血漿中表達但主要存在于肝臟、骨骼肌及血漿骨髓中，在脂肪組織中也發(fā)現(xiàn)其表達。由PBEF1編碼的內脂素的mRNA表達在肥胖的發(fā)展過程中會增加，且其血漿水平與內臟脂肪量顯著相關。研究表明內臟脂肪堆積較皮下脂肪堆積具有更大的危險性，因此體脂的分布比體脂的總量顯得更為重要〔12〕。Fukuhara等〔11〕的研究表明，內脂素的血漿水平和組織表達與內臟脂肪數(shù)量呈正相關而與皮下脂肪無關，提示內脂素對于了解內臟脂肪和皮下脂肪不同生物學特性及其對于肥胖的不同影響具有重要意義。Taskesen等〔13〕也得到類似結果，這與本研究推斷內脂素與X+等位基因及X+X+基因型存在相關性。但具體機制有待進一步研究。

參考文獻4

1Haase A,Goldberg AC.Identification of people with heterozygous familial hypercholesterolemia〔J〕.Curr Opin Lipidol,2012;23(4):282-9.

2Chahil JK,Lye SH,Bagali PG,etal.A novel pathogenic variant of the LDLR gene in the Asian population and its clinical correlation with familial hypercholesterolemia〔J〕.Mol Biol Rep,2012;39(7):7831-8.

3張明明，霍麗靜，孫海娟，等.高膽固醇血癥患者LDL-R基因XspI位點多態(tài)性與血清IL-6的關系及意義〔J〕.臨床檢驗雜志，2011;29(8):596-8.

4中國成人血脂異常防治指南制定聯(lián)合委員會.中國成人血脂異常防治指南〔J〕.中華心血管雜志,2007;35(5):390-409.

5張明明，宋光耀，張新,等.LDL受體基因第四外顯子XSP1位點多態(tài)性與高膽固醇血癥的相關性研究〔J〕.中華內分泌代謝雜志，2009;25(1):49-51.

6Holvoet P,Mertens A,Verhamme P,etal.Irculating oxidized LDL is a usefulmarker for identifying patientswith coronary artery disease〔J〕.Arterioscler Thromb Vasc Biol,2001;21(5):844-8.

7Hachani R,Dab H,Sakly M,etal.Chemical sympathectomy induces arterial accumulation of native and oxidized LDL in hypercholesterolemic rats〔J〕.Auton Neurosci,2012;166(1-2):15-21.

8Zhang YC,Wei JJ,Wang F,etal.Elevated levels of oxidized low-density lipoprotein correlate positively with C-reactive protein in patients with acute coronary syndrome〔J〕.Cell Biochem Biophys,2012;62(2):365-72.

9Li YJ,Chen Y,You Y,etal.Effects of shenlian extracts on atherosclerosis by inhibition of the inflammatory response〔J〕.J Tradit Chin Med,2011;31(4):344-8.

10Iqbal J,Queiroz J,Li Y,etal.Increased intestinal lipid absorption caused by ire1β deficiency contributes to hyperlipidemia and atherosclerosis in apolipoprotein e-deficient mice〔J〕.Circ Res,2012;110(12):1575-84.

11Fukuhara A,Matsuda M,Nishizawa M,etal.Visfatin:a protein secreted by visceral fat that mimics the effects of insulin〔J〕.Science,2005;307(5708):426-30.

12Ersoy C,Sadikoglu G,Orhan H,etal.Body fat distribution has no effect on serum visfatin levels in healthy female subjects〔J〕.Cytokine,2010;49(3):275-8.

〔2014-06-17修回〕

(編輯安冉冉/曹夢園)

通訊作者：宋光耀(1958-)，男，博士，主任醫(yī)師，博士生導師，主要從事內分泌代謝疾病研究。

中圖分類號〔〕R394.3〔

文獻標識碼〕A〔

文章編號〕1005-9202(2015)24-7137-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.24.078