食管鱗癌組織中巨噬細(xì)胞移動抑制因子、金屬蛋白酶-9和血管內(nèi)皮生長因子的表達(dá)意義

趙光磊　譚　輝　田茂松　潘鐵成

(黔南州中醫(yī)醫(yī)院普胸外科，貴州　都勻　558000)

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食管鱗癌組織中巨噬細(xì)胞移動抑制因子、金屬蛋白酶-9和血管內(nèi)皮生長因子的表達(dá)意義

趙光磊譚輝田茂松潘鐵成1

(黔南州中醫(yī)醫(yī)院普胸外科，貴州都勻558000)

摘要〔〕目的探討食管鱗癌組織中巨噬細(xì)胞移動抑制因子(MIF)、基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-9和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)表達(dá)情況及臨床意義。方法選擇自2008年9月至2012年7月62例資料完整的食管鱗癌患者的病理切片，另選取相同病理癌變旁邊正常組織作為對照組，采用EliVisionTM免疫組織化學(xué)法檢測MIF、MMP-9和VEGF在食管鱗癌組織中的表達(dá)，與食管鱗癌臨床參數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，并分析三者之間的相關(guān)性。結(jié)果食管鱗癌組織中MIF、MMP-9及VEGF的陽性表達(dá)率明顯高于對照組(P<0.05)。MIF、MMP-9及VEGF在食管鱗癌組織中的表達(dá)與分化程度、淋巴道轉(zhuǎn)移、病理分期(cTNM)及浸潤深度有關(guān)(P<0.05)。MIF與MMP-9及VEGF在食管鱗癌組織中的表達(dá)均呈正相關(guān)(P均<0.05)。結(jié)論MIF、MMP-9和VEGF在食管鱗癌組織中高表達(dá)，并且三個因子之間具有顯著的線性關(guān)系，可以通過檢測三個因子的表達(dá)來診斷食管鱗癌。

關(guān)鍵詞〔〕食管鱗癌組織；巨噬細(xì)胞移動抑制因子；基質(zhì)金屬蛋白酶-9；血管內(nèi)皮生長因子

1武漢同濟(jì)醫(yī)院普胸外科

第一作者：趙光磊(1960-)，男，副主任醫(yī)師，主要從事食管疾病研究。

超過95%的食管癌是鱗癌〔1〕,發(fā)病率較高，主要致死原因是復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移〔2〕。早期診斷比較困難，大多數(shù)就診患者已經(jīng)處于中晚期，早期治療食管癌后生存率高達(dá)90～100%，中晚期患者5年的生存率則低于10%〔3〕。目前臨床主要的治療方法是化療、手術(shù)切除等，但是療效均不能滿足患者的要求，從分子水平尋找食管鱗癌的有關(guān)治療蛋白已經(jīng)成為醫(yī)學(xué)熱點。研究發(fā)現(xiàn)，食管鱗癌是一種多因素疾病，其發(fā)生發(fā)展的過程中涉及多種腫瘤相關(guān)蛋白〔4〕。本研究通過檢測患者食管癌組織中巨噬細(xì)胞移動抑制因子(MIF)、基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-9和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的表達(dá)情況，探索這些因素對食管鱗癌的臨床意義。

1資料與方法

1.1一般資料選擇2008年9月至2012年7月我院與同濟(jì)醫(yī)院共同收治的62例食管鱗癌患者，且資料完全，所有患者治療前均經(jīng)超聲內(nèi)鏡、胸腹部CT及病理切片檢查確診為食管鱗癌，治療前未經(jīng)過任何治療。其中男39例，女23例；年齡51～69〔平均(60.47±2.15)〕歲。實驗前由兩名高資歷醫(yī)師對全部病理的切片復(fù)查。另外選取相同病理癌變旁邊正常組織(距離腫瘤邊緣約5 cm)標(biāo)本62例作為對照組。

1.2方法采用EliVisionTM免疫組織化學(xué)法檢測MIF、MMP-9和VEGF。EliVisionTM試劑盒、二硝基聯(lián)苯胺顯色液、兔抗人MIF單克隆抗體、兔抗人MMP-9單克隆抗體及兔抗人VEGF多克隆抗體均由北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司提供。先將切片脫蠟和水化后，采用微波EliVisionTM法，使用微波修復(fù)組織抗原，使用10%羊血清封閉，加入一抗，4℃過夜，加入二抗，室溫孵育10 min，每個步驟間使用磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗，連續(xù)三次，使用二硝基聯(lián)苯胺顯色后脫水、封片。使用PBS緩沖液代替一抗作為陰性對照，用蘇木素復(fù)染，鏡下觀察。

1.3結(jié)果判定MIF陽性主要在細(xì)胞核中表達(dá)，MMP-9陽性和VEGF陽性主要在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)，陽性標(biāo)準(zhǔn)為在鏡下觀察到各種抗體在細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒。每張切片隨機觀察5個高倍視野(×400)，陽性細(xì)胞數(shù)<5%(-)；5%～25%為(+)；26%～50%為()；>50%為()，其中+～表示陽性表達(dá)遞增。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗，相關(guān)分析采用Spearman等級相關(guān)分析法。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1MIF、MMP-9及VEGF在食管鱗癌組織中的表達(dá)及與臨床參數(shù)之間的關(guān)系食管鱗癌組織中MIF、MMP-9及VEGF的陽性表達(dá)率(51例，52例，50例)均明顯高于對照組(3例，6例，5例)(P<0.05)。MIF、MMP-9及VEGF在食管鱗癌組織中的表達(dá)與分化程度、淋巴道轉(zhuǎn)移、病理分期(cTNM)及浸潤深度有關(guān)(P<0.05)，而與性別、年齡及腫瘤部位無關(guān)系(P>0.05)。見表1。

2.2MIF、MMP-9及VEGF在食管鱗癌組織中的相關(guān)性MIF與MMP-9及VEGF在食管鱗癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)(r=2.575,3.032;P均<0.05)。MMP-9與VEGF在食管鱗癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)(r=2.863,P<0.05)。

表1MIF、MMP-9及VEGF在食管鱗癌組織中的表達(dá)及與臨床參數(shù)之間的關(guān)系(n)

臨床參數(shù)nMIF陽性χ2值P值MMP-9陽性χ2值P值VEGF陽性χ2值P值性別 男39330.113>0.05340.234>0.05320.312>0.05 女23181818年齡(歲) <5022170.361>0.05190.564>0.05180.723>0.05 ≥5040343332腫瘤部位 上段1081.576>0.0592.132>0.0582.122>0.05 中段27222.048>0.05221.859>0.05221.948>0.05 下段25210.481>0.05211.675>0.05201.439>0.05分化程度 高分化13118.485<0.05124.623<0.05118.883<0.05 中分化302410.394<0.05253.242<0.052612.247<0.05 低分化191619.332<0.05159.375<0.051310.616<0.05淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 無1789.926<0.05109.747<0.05914.784<0.05 有45434241cTNM Ⅰ+Ⅱ期36278.132<0.05306.525<0.052610.335<0.05 Ⅲ+Ⅳ期26242224浸潤深度 淺24168.772<0.051511.170<0.05189.672<0.05 深38353732

3討論

食管鱗癌治療后容易復(fù)發(fā)，且預(yù)后效果不好，主要的原因是惡性腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移，并生成新的血管，新的血管又為腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移提供充足的營養(yǎng)和氧氣，相互促進(jìn)，形成一個惡性循環(huán)〔5〕。有研究〔6〕提出腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的三階段學(xué)說：第一階段：黏附，腫瘤細(xì)胞與原發(fā)瘤和粘連基底膜分離，開始侵襲；第二階段：降解，腫瘤細(xì)胞浸潤生長；第三階段：移動，生命力頑強的腫瘤細(xì)胞在靶器官內(nèi)不斷增生生成繼發(fā)瘤體。

MIF主要由活化的T細(xì)胞產(chǎn)生，最初被認(rèn)為是固有性免疫的重要調(diào)節(jié)因子，不僅可以促進(jìn)惡性腫瘤的發(fā)生，還可以抑制單核/巨噬細(xì)胞移動，從而影響正常細(xì)胞的分裂〔7〕。MIF可以通過調(diào)控腫瘤細(xì)胞分泌白介素及組織生長因子等促血管生長因子，從而調(diào)控新的血管生成過程，另外還可以誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞分泌金屬蛋白酶，從而降解腫瘤組織的細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜〔8〕。MIF還可以通過抑制抑癌p53基因直接促進(jìn)腫瘤的形成，激活絲裂原活化蛋白激酶，加之促進(jìn)血管生成的方式促進(jìn)腫瘤的增殖和轉(zhuǎn)移，還可以通過提高低氧介導(dǎo)缺氧誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子的穩(wěn)定性為腫瘤營造低氧環(huán)境，以利于腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移〔9〕。本研究提示MIF可能在食管鱗癌的發(fā)展過程中促進(jìn)細(xì)胞增殖，調(diào)節(jié)細(xì)胞周期，促進(jìn)腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移，是食管鱗癌發(fā)病中一種重要的調(diào)節(jié)蛋白〔10〕。MMP-9在MMPs家族中分子量最大，主要由結(jié)締組織細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、粒細(xì)胞及巨噬細(xì)胞等合成并分泌〔9〕。MMP-9在腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移中起重要作用：①通過降解細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜的完整性，從而使腫瘤與原發(fā)瘤體分離；②激活促絲裂原素活性或促細(xì)胞存活能力來發(fā)揮作用；③MMP-9可以降低腫瘤細(xì)胞間的黏附性，從而使腫瘤細(xì)胞容易從原發(fā)瘤體分離，提高腫瘤細(xì)胞的浸潤和轉(zhuǎn)移能力，最終導(dǎo)致惡性腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移〔8〕。本文提示MMP-9參與了食管鱗癌的發(fā)生過程。MMP-9被激活后，可以通過降解細(xì)胞外基質(zhì)及破壞腫瘤的基底膜，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞沿著壞死的細(xì)胞外基質(zhì)向周圍組織浸潤，從而促進(jìn)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移〔1〕。

VEGF是作用最強的血管生長因子，基因位于6號染色體的P12-P21區(qū)，可以編碼4種不同的VEGF蛋白，與VEGF受體結(jié)合發(fā)揮作用〔4〕，并且是一種特異性血管內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂素，對于腫瘤血管的生成起著重要作用〔11〕。它有利于腫瘤的浸潤及轉(zhuǎn)移，VEGF還可以通過降解血管內(nèi)皮細(xì)胞基質(zhì)，減弱血管屏障的作用，增加對新生血管基底膜的損傷，使大量的癌細(xì)胞通過組織滲透進(jìn)入血液，以達(dá)到癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移〔8〕。本研究證實VEGF利于腫瘤血管新生成，因為VEGF直接參與內(nèi)皮細(xì)胞的分裂增殖，促進(jìn)腫瘤心血管的生成，增加血管的通透性，從而有利于纖維蛋白原的外滲。

綜上所述，MIF可以通過激活有絲分裂原活化蛋白激酶途徑誘導(dǎo)MMP-9的產(chǎn)生，并在腫瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移中起作用，同時MIF還可能上調(diào)VEGF的表達(dá)，為腫瘤細(xì)胞提供養(yǎng)分，三者聯(lián)合檢測，可以有助于臨床上對食管鱗癌的診斷及治療。

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〔2015-03-16修回〕

(編輯袁左鳴)

中圖分類號〔〕R73〔

文獻(xiàn)標(biāo)識碼〕A〔

文章編號〕1005-9202(2015)24-7096-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.24.058