背部保健推拿對亞急性衰老家兔免疫功能的調(diào)節(jié)作用

張　欣　劉明軍　楊寄渝　吳　萌　李　亞　尚　坤

(長春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林　長春　130117)

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背部保健推拿對亞急性衰老家兔免疫功能的調(diào)節(jié)作用

張欣劉明軍楊寄渝吳萌李亞尚坤

(長春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林長春130117)

摘要〔〕目的探討在亞急性衰老家兔模型足太陽膀胱經(jīng)背部循行部位上開展保健推拿對其胸腺指數(shù)、血清NGF含量和局部皮膚CD80表達的影響。方法將18只家兔隨機平均分為空白組、模型組和推拿組，采用腹腔注射D-半乳糖的方法造模，觀察各組動物胸腺指數(shù)、血清NGF含量和局部皮膚CD80表達的變化。結(jié)果模型組與空白組比較，實驗家兔的胸腺指數(shù)、血清NGF含量均有顯著差異(P<0.01，P<0.05)，推拿局部皮膚CD80表達的陽性細胞數(shù)和表達強度均較低(P<0.05；P<0.01)。推拿組與模型組比較，實驗家兔的胸腺指數(shù)有所提高(P<0.05)，血清NGF含量呈現(xiàn)顯著差異(P<0.01)，推拿局部皮膚CD80表達的陽性細胞數(shù)和表達強度均有所提高(P<0.05，P<0.01)。結(jié)論腹腔注射D-半乳糖的方法能夠制造亞急性衰老家兔模型；在足太陽膀胱經(jīng)背部循行部位上開展保健推拿能夠有效提高亞急性衰老家兔的免疫功能。

關(guān)鍵詞〔〕推拿；衰老；免疫調(diào)節(jié)

第一作者：張欣(1976-)，男，博士，在站博士后，副教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事中醫(yī)手法治未病的臨床與機制研究。

推拿療法是中醫(yī)傳統(tǒng)養(yǎng)生保健與治療疾病的方法之一，具有疏通經(jīng)絡(luò)、平衡陰陽、激發(fā)衛(wèi)氣、溫陽補虛等作用。課題組以保健推拿為主要干預(yù)手段，探討推拿療法對亞急性衰老家兔免疫功能的調(diào)節(jié)作用與機制。

1材料與方法

1.1實驗動物與分組純種新西蘭大耳家兔18只，兔齡4個月，體重(1 940±190)g，均由長春中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供。按照隨機數(shù)字表法平均分為空白組、模型組、推拿組。

1.2實驗藥品與儀器D-半乳糖(成都溶海生物技術(shù)有限公司)；CD80一抗(武漢博士德生物工程有限公司)；推拿手法測定儀(TAP-Ⅱ型，上海益聯(lián)醫(yī)學(xué)發(fā)展有限公司)；光學(xué)顯微鏡及圖像分析系統(tǒng)(德國Leica公司)。

1.3實驗方法

1.3.1動物模型的制備以0.9%的生理鹽水配制1.25%的D-半乳糖溶液，按照50 mg·kg-1·d-1的標(biāo)準(zhǔn)計算相應(yīng)的D-半乳糖注射劑量，1次/d，連續(xù)腹腔注射6 w〔1〕?？瞻捉M注射等量生理鹽水。

1.3.2動物模型的處理模型組、推拿組家兔每天給予腹腔注射造模，空白組家兔每天給予腹腔注射等量生理鹽水，各組不做其他處理。推拿組家兔造模結(jié)束后第2天開始推拿治療，推拿時家兔不固定以避免驚嚇。

1.3.3推拿方法(1)推拿部位：選擇家兔足太陽膀胱經(jīng)的背部循行路線，從肺俞穴至腎俞穴(穴位選取按《實驗針灸學(xué)》〔2〕定位)。(2)推拿方法：①按揉法：操作者以雙手拇指指腹為著力點，在家兔背部脊柱兩側(cè)由頭頸部至尾部施以按揉法，手法力量經(jīng)推拿手法測試儀測定約為0.5 kg，操作時間5 min；②推法：操作者以雙手拇指指腹為著力點，在家兔背部脊柱兩側(cè)由頭頸部至尾部施以推法，手法力量經(jīng)推拿手法測試儀測定約為0.5 kg，操作時間5 min；③捏脊法：操作者以雙手拇指、食指指端夾持家兔背部皮毛及皮下組織，由尾部至頭頸部施以捏脊法，反復(fù)操作10次。以上操作1次/d，15 min/次，連續(xù)3 w。

1.3.4觀察指標(biāo)(1)實驗動物胸腺指數(shù)；(2)實驗動物血清中神經(jīng)生長因子(NGF)含量；(3)實驗動物局部皮膚CD80表達含量。

1.3.5檢測方法(1)推拿治療結(jié)束后第2天，將各組家兔處死，剝離胸腺并稱量濕重，按以下公式計算胸腺指數(shù)〔3〕：胸腺指數(shù)=胸腺重量(mg)/體重(g)。(2)推拿治療結(jié)束后第2天，將各組家兔處死，取耳緣靜脈血5 ml，室溫凝固2 h，離心1 500 r/min×15 min，收集血清，以ELISE法測定NGF含量。(3)推拿治療結(jié)束后第2天，將各組家兔處死，取背部施術(shù)部位皮膚，切片染色，置于40倍物鏡下觀察，拍照，采用Leica計算機圖像分析系統(tǒng)對染色陽性細胞個數(shù)和灰度值進行定量分析。

1.4統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS11.0軟件行t檢驗。

2結(jié)果

2.1各組胸腺指數(shù)和血清NGF含量的比較見表1。

2.2各組局部皮膚CD80表達的比較見表2。

組別胸腺指數(shù)(mg/g)血清NGF(pg/ml)空白組3.23±0.535.42±1.77模型組2.12±0.511)6.74±1.921)推拿組2.90±0.812)5.39±1.332)

與空白組比較：1)P<0.01；與模型組比較：2)P<0.05

組別陽性細胞數(shù)(個)灰度值空白組88.57±6.12171.36±3.74模型組61.68±6.742)180.28±4.461)推拿組82.27±6.554)176.44±6.423)

與空白組比較：1)P<0.05，2)P<0.01；與模型組比較：3)P<0.05，4)P<0.01

3討論

機體衰老的重要標(biāo)志之一是機體免疫功能的下降，從而容易罹患各種疾病〔4〕。推拿療法是中醫(yī)傳統(tǒng)養(yǎng)生保健方法之一，現(xiàn)代大量的臨床研究均有所證明〔5～8〕。胸腺是機體重要免疫器官，是淋巴細胞分化、成熟和產(chǎn)生免疫應(yīng)答的場所，在免疫功能低下時胸腺萎縮，體積變小。因此胸腺系數(shù)是衡量機體免疫功能的重要指標(biāo)〔9,10〕。血清NGF原本是神經(jīng)系統(tǒng)最重要的生物活性因子之一，但是近年來的研究表明，血清NGF還具有調(diào)節(jié)免疫及炎癥網(wǎng)絡(luò)方面的作用，并被認為是連接免疫系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)的紐帶〔11〕。CD80是在B細胞、樹突細胞(DC)等發(fā)現(xiàn)的抗原分子，屬于免疫球蛋白超家族成員，在自身免疫監(jiān)控、體液免疫應(yīng)答及移植反應(yīng)中發(fā)揮重要作用〔12〕。

這些研究指標(biāo)均能夠有效反映機體免疫功能的變化狀況。本研究結(jié)果表明推拿療法能夠有效提高亞急性衰老家兔的免疫功能。

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〔2014-12-19修回〕

(編輯袁左鳴)

The regulation effects of back Tuina on the immune functions of sub-acutly aging rabbit

ZHANG Xin,LIU Ming-Jun,YANG Ji-Yu,etal.

Changchun University of Traditional Chinese Medicine,Changchun 130117,Jilin,China

【Abstract】ObjectiveTo observe the regulation effects of back Tuina on the immune functions of sub-acutly aging rabbit.Methods18 rabbits were randomly divided into control,model and Tuina groups．The indexes of thymus,the expressions of NGF and CD80 were observed．ResultsThe indexes of thymus and content of NGF had significant differences between model and control groups(P<0.05),the expression of CD80 of model group was lower than that of control group(P<0.05).The indexes of thymus and content of NGF had significant differences between Tuina and model groups(P<0.05),the expression of CD80 of Tuina group was higher than that of model group(P<0.05).ConclusionsBack Tuina therapy along bladder meridian of foot Taiyang could promote the immune function of sub-acutly aging rabbit.

【Key words】Tuina;Aging;Immune

通訊作者：尚坤(1978-)，女，副教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事中醫(yī)藥治療心腦血管疾病的臨床與機制研究。

基金項目：國家自然科學(xué)基金項目(81273867)；吉林省科技廳基金項目(20130101137JC)；吉林省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)計劃項目(201310199024)

中圖分類號〔〕R244.1〔

文獻標(biāo)識碼〕A〔

文章編號〕1005-9202(2015)24-6969-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.24.002