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    高效液相色譜法在抗生素類藥物分析中的應(yīng)用

    2016-01-28 15:15:53潘若凡哈爾濱市譽(yù)衡藥業(yè)股份有限公司
    科學(xué)中國(guó)人 2016年35期
    關(guān)鍵詞:檢測(cè)器頭孢色譜法

    潘若凡哈爾濱市譽(yù)衡藥業(yè)股份有限公司

    高效液相色譜法在抗生素類藥物分析中的應(yīng)用

    潘若凡
    哈爾濱市譽(yù)衡藥業(yè)股份有限公司

    目的:探討高效液相色譜法在抗生素類藥物分析中的應(yīng)用。方法:對(duì)高效液相色譜法在頭孢他美酯含量、有關(guān)物質(zhì)、聚合物及體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)和生物等效性研究的應(yīng)用情況進(jìn)行綜述,并對(duì)未來發(fā)展趨勢(shì)進(jìn)行探討。結(jié)果:高效液相色譜法廣泛應(yīng)用于頭孢他美酯藥物分析工藝研究、質(zhì)量控制過程、體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)、生物等效性研究中。結(jié)論:隨著新型固定相、檢測(cè)器的研究以及聯(lián)用技術(shù)的發(fā)展,高效液相色譜法在抗生素類藥物分析中的應(yīng)用前景廣闊。

    高效液相色譜法;抗生素;藥物分析

    高效液相色譜法是藥物分析中常用的一種色譜分析方法,它采用規(guī)則均勻的顆粒(通常直徑在10μm以下)作為固定相,通過高壓輸液泵輸送流動(dòng)相,利用樣品中不同的組分被流動(dòng)相攜帶移動(dòng)的速度不同從而被分離檢出。高效液相色譜法自1985年被收錄于《中國(guó)藥典》后,經(jīng)過三十年的發(fā)展,在藥品檢驗(yàn)過程中的作用日益顯著,已成為藥品檢驗(yàn)中最為重要的分析方法[1]。本文以頭孢他美酯為研究對(duì)象探討高效液相色譜法在抗生素類藥物分析中的應(yīng)用情況,并對(duì)未來發(fā)展趨勢(shì)進(jìn)行探討?,F(xiàn)報(bào)道如下:

    1.高效液相色譜法在頭孢他美酯藥物分析中的應(yīng)用

    與經(jīng)典色譜分析方法相比分析耗時(shí)短,分離效率大為高。隨著高靈敏檢測(cè)器的開發(fā)和廣泛應(yīng)用,檢測(cè)靈敏度大為提高,為實(shí)現(xiàn)藥品的快速、高效、準(zhǔn)確的質(zhì)量控制奠定了基礎(chǔ)。高效液相色譜法廣泛應(yīng)用于頭孢他美酯藥物分析工藝研究、質(zhì)量控制過程、體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)、生物等效性研究中。

    1.1 含量、有關(guān)物質(zhì)

    頭孢他美酯是以3-乙酰氧基-7-氨基頭孢烷酸為原料,與氨噻肟乙酰氯經(jīng)過縮合后,再水解得到頭孢他美,頭孢他美與特戊酸溴甲酯發(fā)生酯化反應(yīng)生成頭孢他美酯[2]。生產(chǎn)合成工藝較為繁瑣,反應(yīng)過程受到反應(yīng)溫度、酸堿度、時(shí)間影響,導(dǎo)致底物的分解、副反應(yīng)的發(fā)生,致使所得產(chǎn)品的含量、雜質(zhì)種類、聚合物情況復(fù)雜。《中國(guó)藥典》中鹽酸頭孢他美酯采用等度洗脫法進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢查,王建[3]等學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)改用梯度洗脫法,采用極性更大的流動(dòng)相洗脫2 min后逐步調(diào)整不同極性的流動(dòng)相比例,至乙腈-甲醇-水-磷酸鹽緩沖液(540‥142.5‥250‥22.5)維持15 min,大量在《中國(guó)藥典》條件下不能出峰的極性小的雜質(zhì)得到充分的洗脫和檢出。此外進(jìn)行檢測(cè)對(duì)鹽酸頭孢他美酯,7-ADCA、頭孢他美酸、AE活性酯等合成過程中的中間產(chǎn)物,酸堿破壞、氧化破壞、高溫等分解產(chǎn)物等雜質(zhì)在233nm波長(zhǎng)處均有相似的紫外吸收,使用二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè)靈敏度更高。

    1.2 聚合物的測(cè)定

    采用分子排阻色譜法對(duì)頭孢他美酯中的高分子量聚合物進(jìn)行檢查,根據(jù)高分子量聚合物的分子量大小選擇不同孔徑的葡聚糖凝膠色譜柱,藥物分子量較小,隨流動(dòng)相進(jìn)入色譜柱后進(jìn)入滯留于固定相表面的孔穴中,在色譜柱中所走的途徑較長(zhǎng),保留時(shí)間也較長(zhǎng)。聚合物分子空間尺寸較大、隨流動(dòng)相進(jìn)入色譜柱后不會(huì)進(jìn)入固定相表面的孔穴中而直接通過色譜柱,保留時(shí)間短。采用高效液相色譜法,能夠?qū)崿F(xiàn)體積不同的分子的分離和測(cè)定。

    1.3 體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)和生物等效性研究

    目前臨床上廣泛采用高效液相色譜法進(jìn)行血藥濃度監(jiān)測(cè)以及藥物體內(nèi)代謝產(chǎn)物的含量測(cè)定,用于體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)和生物等效性研究。林茵[4]等學(xué)者選取健康的志愿者16例,所有實(shí)驗(yàn)者禁食12h后于次日清晨空腹口服鹽酸頭孢他美酯0.5g,分別于用藥前及用藥后定時(shí)抽取靜脈血約3ml,分離血清,精密量取待測(cè)血漿0.2ml,加入6%的高氯溶液0.2ml,振蕩后離心,取上清液作為供試品溶液,注入高效液相色譜儀,通過測(cè)定服藥后不同時(shí)間段內(nèi)的血漿中頭孢他美酯活性物的含量分析藥物體內(nèi)代謝過程及時(shí)間,為臨床合理用藥提供數(shù)據(jù)支持。

    2.HPLC及其聯(lián)用技術(shù)在藥物分析中的應(yīng)用

    隨著研究的深入,高效液相色譜儀的輸液泵、色譜柱、檢測(cè)器均有了新的發(fā)展,特別是檢測(cè)器的發(fā)展,隨著各個(gè)部件的改進(jìn),方法的靈敏度不斷提升。如:小角度激光散射檢測(cè)器(LALLSPD)可以用于多糖、蛋白質(zhì)類高聚物的高分子質(zhì)量物質(zhì)及分布的快速檢測(cè),且不需要標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照。與此同時(shí)多種聯(lián)用技術(shù)的發(fā)展為高效液相色譜法在藥物分析中的應(yīng)用帶來了新的生機(jī)。如高效液相色譜-熱噴霧-質(zhì)譜聯(lián)用,用于同一樣品溶液中不同組分的同步分離和測(cè)定,極大的提高了檢驗(yàn)效率,樣品量及流動(dòng)相的消耗大大下降;高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用和高效液相色譜-核磁共振聯(lián)用在藥物雜質(zhì)檢測(cè)中,能夠?qū)?zhǔn)分子離子進(jìn)行多級(jí)裂解,從而提供化合物的相對(duì)分子量以及豐富的碎片信息[5],實(shí)現(xiàn)結(jié)構(gòu)信息的準(zhǔn)確分析,且分離檢驗(yàn)過程中不受流動(dòng)相中的緩沖鹽溶液的干擾。特別是在雜質(zhì)研究和藥物動(dòng)力學(xué)研究階段,通常雜質(zhì)含量以及血藥、尿液等體液樣本中藥物濃度很低,分析難度大且干擾多,液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)能夠快速準(zhǔn)確地測(cè)定藥物分析中的痕量物質(zhì)[6]。在體內(nèi)藥物代謝過程臨床用藥監(jiān)測(cè)的研究中有著廣闊的發(fā)展前景,監(jiān)測(cè)血藥濃度的同時(shí)對(duì)其相關(guān)的代謝產(chǎn)物進(jìn)行確證,操作簡(jiǎn)便快捷,靈敏度高。

    3.討論

    抗生素的發(fā)現(xiàn)和使用開啟了人類對(duì)抗感染的新篇章,挽救了無數(shù)人的生命。天然抗生素的種類較少且均已產(chǎn)生了耐藥性,人工合成的抗生素已成為主導(dǎo)。每年有數(shù)以萬計(jì)的患者死于與之相關(guān)的藥源性疾病,藥品的安全性逐漸引起人們的重視。這些不良反應(yīng)一方面與藥物本身的藥理活性有關(guān),更主要的是藥品中所存在的毒性雜質(zhì)密切相關(guān)。抗生素的分離、分析是藥物分析中較困難的領(lǐng)域。微生物法、分光光度法、化學(xué)方法所需時(shí)間較長(zhǎng)、專一性較差,正逐漸被取代。采用高效液相色譜法進(jìn)行抗生素類藥物分析具有快速、簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確的特點(diǎn),隨著今后各種新型固定相、檢測(cè)器的研究和開發(fā),聯(lián)用技術(shù)的不斷發(fā)展,使該方法抗生素類藥物分析中的應(yīng)用不斷加大。

    [1]孫會(huì)敏,田頌九.高效液相色譜法簡(jiǎn)介及其在藥品檢驗(yàn)中的應(yīng)用[J].藥學(xué)研究,2011,30(1):38-42.

    [2]唐曉光.頭孢他美酯的合成研究[J].赤峰學(xué)院學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2012(12):47-48.

    [3]王建,王丹丹,洪利婭.HPLC法測(cè)定鹽酸頭孢他美酯中的有關(guān)物質(zhì)和聚合物[J].藥物分析雜志,2015(2):295-300.

    [4]林茵,覃逢超,伍俊妍.頭孢他美酯藥物的體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)研究[J].中國(guó)醫(yī)藥指南,2012(25):469-470.

    [5]高佳,程曉昆,等.液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)的應(yīng)用與發(fā)展[J].當(dāng)代化工研究,2016(5):86-87.

    [6]王磊君,李鋼,鄭賽晶,等.高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)同時(shí)測(cè)定人體尿液中11種代謝物[J].分析化學(xué),2015(1):121-126.

    潘若凡(1987-),女,漢,吉林長(zhǎng)春人,碩士研究生,職稱:中級(jí)(工程師),作者單位:哈爾濱市譽(yù)衡藥業(yè)股份有限公司,研究方向:藥品檢驗(yàn)。

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