蒙藥材懸鉤子木黃酮類(lèi)成分的研究

朝木日麗格阿拉坦敖日格樂(lè)吉日木巴圖張　屏包保全*.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)蒙醫(yī)藥研究院，內(nèi)蒙古　呼和浩特　000; .內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，內(nèi)蒙古　呼和浩特　000

蒙藥材懸鉤子木黃酮類(lèi)成分的研究

朝木日麗格1阿拉坦敖日格樂(lè)1吉日木巴圖1張屏2包保全2*
1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)蒙醫(yī)藥研究院，內(nèi)蒙古呼和浩特010110; 2.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，內(nèi)蒙古呼和浩特010110

【摘要】目的:研究庫(kù)葉懸鉤子正丁醇層的化學(xué)成分.方法:采用反相HPLC分離純化，通過(guò)核磁共振分析鑒定其化學(xué)結(jié)構(gòu).結(jié)果:從庫(kù)頁(yè)懸鉤子正丁醇層分離得到槲皮素－3－O－β－D－吡喃葡萄糖醛酸甲酯( I)、山柰酚－3－O－β－D－吡喃葡萄糖醛酸甲酯( II)、槲皮素( III)、槲皮素－3－O－β－D－吡喃葡萄糖醛酸丁酯( IV) 4個(gè)化合物.結(jié)論:以上化合物均首次從該種植物中分離得到.

【關(guān)鍵詞】蒙藥材;懸鉤子木;正丁醇層;黃酮

蒙藥材懸鉤子木為薔薇科懸鉤子屬植物庫(kù)葉懸鉤子( Rubus sachalinensis Leveille)的去皮去心干燥莖枝，具有促熟疫、清除騷熱、止咳、調(diào)元之功效[1]，是蒙醫(yī)基礎(chǔ)方四味土木香散組方藥材之一，但其化學(xué)成分和生物活性未見(jiàn)報(bào)導(dǎo).為探索該植物的有效活性成分，對(duì)庫(kù)葉懸鉤子的乙醇提取物正丁醇萃取部位進(jìn)行化學(xué)成分分離研究，薄層結(jié)果顯示正丁醇部位含有黃酮類(lèi)化合物，通過(guò)進(jìn)一步的色譜分離，鑒定4個(gè)化合物，分別為:槲皮素－3－O－β－D－吡喃葡萄糖醛酸甲酯( I)、山柰酚－3－O－β－D－吡喃葡萄糖醛酸甲酯( II)、槲皮素( III)、槲皮素－3－O－β－D－吡喃葡萄糖醛酸丁酯( IV).

1　儀器與材料

1. 1植物來(lái)源蒙藥材懸鉤子木采自?xún)?nèi)蒙古通遼市扎旗罕山自然保護(hù)區(qū)，由內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院包保全教授鑒定為薔薇科懸鉤子屬庫(kù)頁(yè)懸鉤子( R. Sachalinensis Leveille)，除去外皮，切段，曬干.

1. 2儀器半制備HPLC: Shim－pack PRC－ODS、制備柱250mm ( 20mm，15μm )、YMC－pack ODS A 250mm ( 10mm，5μm)、SHIMADZU RID－10A檢測(cè)器、LC－6AD泵、CTO－20A柱溫箱、C－R8A積分儀;高效液相色譜儀: Inertsil ODS－SP柱250mm ( 4. 6mm，5μm)、SHMADZU RID－20A檢測(cè)器、SIL－20A自動(dòng)進(jìn)樣器、LC－20AT泵、CTO－10AS柱溫箱、CBM－20A控制器) ;核磁共振儀( BRUKER公司AVANCE－600) ; EYELAN－1100旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海愛(ài)郎儀器有限公司) ;電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器有限公司) ; HP－20大孔樹(shù)脂; Sephadex LH－20羥丙基葡聚糖凝膠.

2　提取分離

取庫(kù)葉懸鉤子干燥莖枝5. 05kg粉碎，用95%乙醇回流提取1次，75%乙醇回流提取3次，每次2h;減壓回收乙醇溶劑，得浸膏924g，以上浸膏加水懸浮，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇等溶劑等比萃取，回收溶劑，得正丁醇提取物224g;取正丁醇提取物經(jīng)過(guò)HP－20柱，依次用水、40%乙醇、55%乙醇、70%乙醇、85%乙醇、95%乙醇洗脫，得到6個(gè)洗脫部分;回收洗脫乙醇溶劑，得浸膏分別為90. 6g、121. 7g、48. 2g、4. 3g、3. 2g、3. 6g; 40%乙醇浸膏、55%乙醇浸膏分別取2g，加甲醇溶解，經(jīng)LH－20柱甲醇洗脫，每5ml為一個(gè)流分，點(diǎn)薄層硅膠板，顯色，合并相同斑點(diǎn)，回收甲醇，經(jīng)反相HPLC分離，從40%乙醇流分中分離得到化合物I ( 23mg)、II ( 10. 7mg)、III ( 3mg) ;從55%乙醇流分中分離得到化合物IV ( 10. 93mg).

3　化合物結(jié)構(gòu)解析

Compound 1黃色無(wú)定型粉末.1H－NMR給出黃酮母核上的氫信號(hào)信號(hào)，δ: 6. 18 ( 1H，s)、6. 36 ( 1H，s)、7. 57 ( 2H，d，8. 4)、6. 82 ( 1H，dd，8. 4)，判斷是黃酮類(lèi)化合物，δ: 5. 21 ( 1H，d，7. 8)、3. 47 ( 1H，t，9. 0)、3. 51 ( 1H，t，9. 0)、3. 56 ( 1H，t，9. 0)、3. 76 ( 1H，dd，9. 6)為糖上氫信號(hào)，δ5. 21 ( 1H，d，7. 8)表明β糖端基氫信號(hào)連在黃酮母核三位上，δ3. 63 ( 3H，s)給出氧甲基氫信號(hào);13C－NMR給出2個(gè)羰基碳信號(hào)δ: 179. 2和170. 7，糖端基碳信號(hào)δ: 104. 8和糖鏈上的其他碳信號(hào)75. 3、77. 0、72. 7、77. 3、170. 7，δ: 52. 8為氧甲基碳信號(hào)，故鑒定為槲皮素－3－O－β－D－吡喃葡萄糖醛酸甲酯( quercetin－3－O－β－D－glucuronide methylester).分子式為C22H20O13.其波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[2]中槲皮素－3－O－β－D－吡喃葡萄糖醛酸甲酯，基本一致.

quercetin－3－O－β－D－glucuronide methylester

Compound 2黃色無(wú)定型粉末，鹽酸－鎂粉反應(yīng)呈陽(yáng)性.1H－NMR給出黃酮母核上的氫信號(hào)δ: 7. 92 ( 2H，d，8. 4)、6. 76 ( 2H，d，8. 4)、6. 10 ( 1H，s)、6. 29 ( 1H，s)，糖端基氫信號(hào)δ: 5. 13 ( 1H，d，7. 2).13C－NMR給出2個(gè)羰基碳信號(hào)δ: 179. 2、179. 2，黃酮母核上的碳信號(hào)δ: 159. 4、135. 3、163. 0、100. 2、158. 6、95. 0、161. 6、105. 4、122. 5、132. 3、116. 0、161. 6糖端基碳信號(hào)δ: 104. 8和糖上的其它碳信號(hào)δ: 75. 3、77. 0、72. 7、77. 3、170. 5，故鑒定為山柰酚－3－O－β－D－吡喃葡萄糖醛酸甲酯( kaempferol－3－O－β－D－glucuronide methylester).該化合物結(jié)構(gòu)式為C22H20O12，其波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[3]中與山柰酚－3－O－β－D－吡喃葡萄糖醛酸甲酯基本一致.

kaempferol－3－O－β－D－glucuronide methylester

Compound 3黃色結(jié)晶，鹽酸鎂粉反應(yīng)呈陽(yáng)性，1HNMR給出黃酮類(lèi)化合物槲皮素母核上的氫信號(hào)δ: 6. 08 ( 1H，d，1. 8)、6. 29 ( 1H，d，1. 8)、7. 64 ( 1H，d，8. 4)、6. 78 ( 1H，d，8. 4)、7. 53 ( 1H，d，8. 4).13C－NMR給出槲皮素的碳信號(hào)δ: 146. 2、137. 2、177. 3、162. 7、99. 2、165. 7、94. 4、158. 2、104. 4、124. 1、115. 9、147. 9、146. 2、117. 6、121. 6、故鑒定為槲皮素( quercetin)，該化合物化學(xué)結(jié)構(gòu)式為C15H10O7，以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[3]基本一致.

quercetin

Position　　δH　　δC　Position　　δH　　δC6　 6.08 ( 1H，d，1.8)99.2　 4'　146.2 7 165.7　 5'　 6.78 ( 1H，d，8.4) 117.6 8　 6.29 ( 1H，d，1.8) 94.4　 6'　 7.53 ( 1H，d，8.4) 121.6 9 158.2.

Compound 4棕黃色粉末.1H－NMR給出黃酮母核上的氫信號(hào)δ: 6. 10 ( 1H，d，1. 8)、6. 28 ( 1H，d，1. 8)、7. 51 ( 2H，d，8. 4)、6. 83 ( 1H，d，8. 4)，糖端基氫信號(hào)δ: 5. 17 ( 1H，d，9. 0)和糖上的其它氫信號(hào)δ: 3. 53 ( 1H，dd，6. 0，12. 0)、3. 46 ( 1H，dd，1. 8，12. 0)、3. 58 ( 1H，dd，6. 0，12. 0)、3. 64 ( 1H，d，9. 0)，亞甲基氫信號(hào)δ: 4. 05 ( 2H，dd，1. 8，12. 0)、1. 48 ( 2H，d，8. 4)、1. 23 ( 2H，dd，8. 4)，甲基氫信號(hào)δ: 0. 73 ( 3H，d，8. 4)，故鑒定為槲皮素－3－O－β－D－吡喃葡萄糖醛酸丁酯( quercetin－3－O－β－D－glucuronide butylester).該化合物化學(xué)結(jié)構(gòu)式為C25H26O13，其波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[4]中槲皮素－3 －O－β－D－吡喃葡萄糖醛酸丁酯，基本一致.

quercetin－3－O－β－D－glucuronide butyleste

4　結(jié)果與討論

從庫(kù)頁(yè)懸鉤子正丁醇層分離得到4個(gè)黃酮類(lèi)化合物，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定分別為槲皮素－3－O－β－D－吡喃葡萄糖醛酸甲酯( I)、山柰酚－3－O－β－D－吡喃葡萄糖醛酸甲酯( II)、槲皮素( III)、槲皮素－3－O－β－D－吡喃葡萄糖醛酸丁酯( IV)，以上化合物均首次從本種植物庫(kù)頁(yè)懸鉤子中分離得到.庫(kù)頁(yè)懸鉤子臨床應(yīng)用歷史悠久，資源豐富，是一個(gè)極具開(kāi)發(fā)潛力的蒙藥材.以上研究為蒙藥材懸鉤子木生物活性、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究提供了科學(xué)依據(jù).

參考文獻(xiàn)

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收稿日期:( 2014. 11. 19)

通信作者:包保全( 1969－)，博士，教授，主要從事蒙藥活性物質(zhì)基礎(chǔ)及資源研究.E－mail baobaoquan@ aliyun. com

作者簡(jiǎn)介:朝木日麗格( 1987－)，碩士，助理館員，從事蒙醫(yī)藥文獻(xiàn)研究.E－mail cmrlg2006@163. com

基金項(xiàng)目:內(nèi)蒙古自治區(qū)自然科學(xué)基金項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào)2011ZD13).

【文章編號(hào)】1007－8517 ( 2015) 04－0019－02

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【中圖分類(lèi)號(hào)】R284. 1