Rb、p16和cyclinD1基因在早期胃癌組織中的表達及臨床意義

劉衛(wèi)梅

（河南省焦作市第二人民醫(yī)院 病理科，河南 焦作 454001）

胃癌是我國常見的惡性腫瘤之一，是嚴重威脅人類健康的惡性腫瘤，近年發(fā)病率呈上升趨勢。Rb、p16和cyclinD1三者屬于CDK4/cyclinD1/p16/Rb途經(jīng)，它的異常與腫瘤的產(chǎn)生及進展相關。通過對正常胃黏膜組織、胃黏膜異常增生和胃癌早期Rb、p16和cyclinD1表達的研究，探討三者在胃癌發(fā)生中的相互聯(lián)系及其作用。

1 資料與方法

1.1 資料

選取早期胃癌22例、增生異常23例和正常胃黏膜15例，標本均為本院2011年1月‐2012年7月手術切除標本，早期胃癌均為管狀腺癌（組織學類型），所有切除標本均用10%甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋、切片（4 μm厚），免疫組織化學試劑盒、抗體和顯色劑均購于武漢博士德生物有限公司。

1.2 方法

應用免疫組織化學S-P法檢測Rb、p16和cyclinD1基因在22例早期胃癌、23例異型增生以和15例正常胃黏膜組織中的表達。免疫組化S-P法：切片常規(guī)脫蠟、水洗和電磁爐抗原熱修復，依次按說明步驟進行操作。cyclinD1抗體稀釋度為1∶75；Rb抗體稀釋度為1∶50；p16抗體稀釋度為1∶100，用已知明確陽性的組織切片做陽性對照，陰性對照用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline,PBS）替代一抗。

1.3 結果判定

棕黃色顆粒均勻一致定位于細胞核或細胞漿內為陽性；細胞核或細胞漿無棕黃色顆粒的為陰性；陽性細胞數(shù)小于20%為（+），即弱陽性；陽性細胞數(shù)在20%～50%為（++），即陽性；陽性細胞數(shù)大于50%為（+++），即強陽性。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 11.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)處理。計數(shù)資料用百分比（%）表示，行χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

p16陽性定位于細胞漿和細胞核，cyclinD1及Rb陽性定位于細胞核；cyclinD1低表達于正常胃黏膜中。cyclinD1在胃癌早期、異型增生和正常胃黏膜中的過表達率分別為40.9%（9/22）、30.4%（7/23）和0%（0/15），cyclinD1在胃癌早期中與正常胃黏膜過表達率相比存在表達過度（P＜0.05）；Rb在胃癌早期、增生異常和正常胃黏膜中的陽性表達率分別為63.6%（14/22）、82.6%（19/23）和100%（15/15），Rb在胃癌早期中與正常胃黏膜陽性表達率相比表達下降（P＜0.05）；p16在胃癌早期、增生異常及正常胃黏膜中的陽性表達率分別為59.1%（14/22）、82.6%（19/23）和100.0%（15/15），p16在胃癌早期與正常胃黏膜陽性表達率相比表達減低（P＜0.05）。cyclinD1、Rb和p16在胃癌早期與異型增生、異型增生與正常黏膜之間的差別均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。在胃腺癌早期中，9例cyclinD1表達過度的標本中Rb表達全部為（+），其中有3例p16表達（-）；10例Rb表達（-）標本中cyclinD1全部為（-），無過度表達，其中有6例p16（-）；胃早期腺癌22例患者中有16例存在上述cyclinD1、Rb和p16三種基因的異常。

3 討論

cyclinD1基因位于11q13,CDK4和CDK6激酶通過其蛋白結合并激活，Rb被磷酸化，E2F的抑制影響被Rb消除，并且DNA的合成開啟，使細胞從G1期過度到S期，細胞失去控制的增值及生長，cyclinD1的過度表達在很多惡性腫瘤中都存在，比如乳腺癌[1]、頭頸部鱗癌[2]和食管鱗癌[3]等；CDK4/CDK6的抑制因子是P16，它定位于9p21，在腫瘤增殖的調控中，CDK4/CDK6被cyclinD1和p16蛋白競爭結合，起到負性調控作用，一起協(xié)助對腫瘤增殖周期的調控，CpG島的甲基化異常是P16失活的原因[4]，p16表達缺失在肝癌等許多腫瘤中都存在；視網(wǎng)膜母細胞瘤易感基因，即Rb基因，長約180 kb，基因定位在13q14.2和q14.3，表達于人類各種組織之中，110 kD蛋白為其編碼的蛋白產(chǎn)物，其蛋白產(chǎn)物抑制細胞的生成，這種正常的產(chǎn)物的缺少或缺失，會引起腫瘤細胞失去控制的生長、增殖。Rb基因突變、丟失和重排的變化很早就被發(fā)現(xiàn)，并且它是第一個被確定的抑癌基因。筆者探討應用免疫組織化學S-P法檢測正常胃黏膜15例，異型增生23例，胃腺癌早期癌22例標本中p16，Rb及cyclinD1三者的表達情況，結果表明cyclinD1胃腺癌早期與正常胃黏膜過表達率相比存在差異（過度表達）（P＜0.05）；p16及Rb胃腺癌早期與正常胃黏膜陽性表達率存在差異（表達降低）（P＜0.05）；異型增生中存在3種基因的異常；但與正常胃黏膜相比，陽性表達率差異不明顯（P＞0.05）。以上結果表明Rb、p16及cyclinD1的異常在胃腺癌的早期發(fā)生中起到異常重要的作用，是胃腺癌早期發(fā)生的根本緣由。在本身表達缺失和cyclinD1過度表達都可能引起Rb抑癌基因功能喪失，兩者中有其一非正常就具有同樣的結果，無需同時存在兩者非正常，Ralhan等[5]的研究與此大致相同。這充分說明了在胃管狀腺癌的早期發(fā)生及進展過程中一般都存在CDK4/cyclinD1/p16/Rb途徑的非正常，此途徑在胃癌早期的發(fā)生過程中起異常重要的作用。

[1]Weinstat-Saslow D,Merino MJ,Manrow RE,et al.Overexpression of cyclin D mRNA distinguishes invasive and in situ breast carcinomas from nun-malignant lesions[J].Nat Med,1995,1(12):1257-1260.

[2]Xing EP,Nie Y,Wang LD,et al.Aberrant methylation of p16INK4a and delelion of p15INK4b are frequent events in human esophageal cancer in Linxian,China[J].Carcinogenesis,1999,20(1):77-84.

[3]Liew CT,Li HM,Lo KW,et al.High frequency of p16INK4A gene alterations in hepatocellular caminoma[J].Oncogene,l999,18(3):789-795.

[4]Shinohara M,Aoki T,Sato S,et al.Cell cycle-regulated factors in esophageal cancer[J].Dis Esophagus,2002,15(2):149-154.

[5]Ralhan R,Mathew R,Arora S.Frequent alterations in the expression of tumor suppress or genes p16INK4A and pRb in esophageal squamous cell carcinoma in the Indian population [J].J Cancer Res Clin Oncol,2000,126(11):655-660.