血漿hsa-miR-30a與高血壓左室肥厚患者預(yù)后的關(guān)系

潘偉 趙娟 羅韶金 楊澤福 黃景文

臨床研究

血漿hsa-miR-30a與高血壓左室肥厚患者預(yù)后的關(guān)系

潘偉 趙娟 羅韶金 楊澤福 黃景文

目的 探討血漿hsa-miR-30a與高血壓左室肥厚（LVH）患者預(yù)后的關(guān)系。方法 隨機入選118例高血壓LVH患者，分為預(yù)后良好組（n=82）和預(yù)后不良組（n=36）。用real-time PCR法檢測血漿hsamiR-30a的含量。研究預(yù)后不良的高血壓LVH患者血漿hsa-miR-30a的變化。用Logistic回歸研究血漿hsamiR-30a是否是高血壓LVH患者預(yù)后不良的獨立預(yù)測因子。結(jié)果 與預(yù)后良好組比較，預(yù)后不良組高血壓LVH患者血漿hsa-miR-30a升高［（20.87±4.36）2-Δct*104比（11.24±2.15）2-Δct*104，P＜0.05］。血漿hsa-miR-30a升高是高血壓LVH患者預(yù)后不良的獨立預(yù)測因子（OR=2.57，P＜0.05）。結(jié)論 血漿hsa-miR-30a升高對高血壓LVH患者預(yù)后不良有預(yù)測價值。

左心室肥厚； 高血壓； miR-30a； 預(yù)后

左心室肥厚（left ventricular hypertrophy，LVH）是心血管疾病事件鏈中的中期階段，作為一種重要的無癥狀器官損害指標(biāo)，可預(yù)測高血壓患者心血管死亡的發(fā)生[1-3]。本研究探討血漿hsa-miR-30a與高血壓左室肥厚患者預(yù)后的關(guān)系。

1 對象與方法

1.1 研究對象 2014年1月至2015年6月118例高血壓LVH住院患者。LVH患者入選標(biāo)準(zhǔn)：超聲心動圖示室間隔厚度（IVSd）和（或）左室后壁厚度（LVPWd）≥1.2cm，EF＞40%。門診隨訪結(jié)合電話隨訪6個月時LVH患者發(fā)生心衰、死亡、急性冠脈綜合征（ACS）和卒中與否。剔除標(biāo)準(zhǔn)：收縮性心力衰竭、腫瘤、急性期感染、BNP＞400 ng/L、帕金森病、特發(fā)性肺纖維化、休克、肝硬化等近期應(yīng)用過干擾素、苯巴比妥。所有入選患者均經(jīng)過醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)并簽署知情同意書。

1.2 方法 所有入選患者完善一般臨床資料，次日空腹采血，空腹時EDTA抗凝管收集全血，獲取血漿，檢測hsa-miR-30a。血尿酸、甘油三酯、總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇、血糖等采用檢驗科全自動生化分析儀檢測，由專人質(zhì)控。心臟超聲檢查由富有經(jīng)驗的超聲醫(yī)師完成，并測定IVSd、LVPWd。用EDTA抗凝管收集3 ml全血，室溫放置1～2 h。1600 g，4℃，離心15 min，獲取上層的血漿。12 000 g，4℃，15 min離心，獲取上清放在-80℃保存。取 300μl血漿加入1.2 ml TRIzolRLS Reagent溶液及2μl人工合成的 celmiR-39（1 nM）作為內(nèi)參，迅速震蕩搖勻30 s，再加入200μl氯仿，強烈震蕩20 s后靜置3 min。室溫，14 000 g離心10 min，獲取上層水層。加入10μl SiO2吸附液，混勻，14 000 g離心5 min。棄上清，加入75%乙醇400μl，14 000 g離心5 min。棄上清，風(fēng)干5 min，加入25 μlDEPC水溶解。10mm dNTP、RNase inhibitor、miR-30a逆轉(zhuǎn)錄引物、celmiR-39逆轉(zhuǎn)錄引物、5x buffer、M-MLV加入上溶液中，混勻后42℃孵育60 min→85℃孵育10 min。采用SYBR Green PCR Master Mix進行qRT-PCR，反應(yīng)參數(shù)：95℃，5 min→95℃，15 s→65℃，15 s→72℃，32 s，40 cycles。引物序列：hsa-miR-30a FP：5′ACACTCCAGCTGGGTGTAAACATCCTCGACTG；cel-miR-39：5′ACACTCCAGCTGGGTCACCGGGTGTAAATCAGCT；miRNA_RP：5′CTCAACTGGTGTCGTGGA。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 使用PASW Statistics 18.0統(tǒng)計軟件分析。計量資料以±s表示，是否正態(tài)分布用Shapiro-Wilk檢驗。兩組正態(tài)分布計量資料組間比較使用Student′s t檢驗；計數(shù)資料統(tǒng)計使用卡方檢驗。采用Logistic回歸研究血漿hsa-miR-30a是否是LVH患者預(yù)后不良的獨立預(yù)測因子。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般資料比較 按LVH患者6個月時是否發(fā)生心衰、ACS、卒中及死亡分為預(yù)后不良組和預(yù)后良好組。將不發(fā)生心衰、ACS、卒中及死亡定義為預(yù)后良好組（n=82），將發(fā)生心衰、ACS、卒中及死亡定義為預(yù)后不良組（n=36）。預(yù)后良好組和預(yù)后不良組間年齡、血壓、血糖、總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、血肌酐等臨床基線資料比較未見統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。

2.2 兩組患者血漿has-miR-30a水平比較 與預(yù)后良好組比較，預(yù)后不良組患者血漿has-miR-30a升高［（20.87±4.36）2-Δct×104比（11.24±2.15）2-Δct× 104，P＜0.05］。

2.3 血漿hsa-miR-30a與高血壓LVH患者預(yù)后的關(guān)系 將hsa-miR-30a作為自變量，高血壓LVH患者預(yù)后為因變量（近期預(yù)后不良y=1，預(yù)后良好y= 0），Logistic回歸顯示，hsa-miR-30a是高血壓LVH患者預(yù)后不良的獨立預(yù)測因子（OR=2.57，P＜0.05）。

3 討論

在發(fā)達(dá)國家，1%～2%的成人患心力衰竭，而在70歲以上人群，該比例高達(dá)10%以上[4]。20世紀(jì)90年代前，60%～70%的心力衰竭患者在確診5年內(nèi)死亡。因心力衰竭住院的患者耗費了大量的醫(yī)療資源，患者生活質(zhì)量嚴(yán)重下降。目前人類對心力衰竭發(fā)病機制的認(rèn)識正不斷深入，從20世紀(jì)40～60年代的心腎學(xué)說到70～80年代血流動力學(xué)說，再到90年代以來的心臟重構(gòu)（cardiac remodeling）學(xué)說。

在各種病理刺激下，心臟出現(xiàn)實質(zhì)和間質(zhì)的結(jié)構(gòu)改變，如心肌細(xì)胞肥厚、心臟間質(zhì)纖維化等，稱為心臟重構(gòu)[5]。心臟重構(gòu)是心力衰竭發(fā)生發(fā)展的基本機制。心肌肥厚是心臟重構(gòu)的重要環(huán)節(jié)。高血壓所致的心肌肥厚常表現(xiàn)為LVH。對高血壓LVH的干預(yù)能延緩高血壓患者心力衰竭的發(fā)生[6]。近年來，經(jīng)過利尿劑、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑（ACEI）、β受體阻滯劑、醛固酮受體阻滯劑等藥物優(yōu)化治療和心臟再同步化治療（cardiacresynchronizationtherapy，CRT）等器械治療的綜合治療后，心衰患者預(yù)后較前有所改善，住院率減少了30%～50%，但仍不容樂觀[7]，故對心力衰竭的早期識別與干預(yù)顯得尤為重要。

MicroRNAs（miRNA）是一類在生物進化過程中高度保守的非編碼微小RNA，通過降解目的mRNA或抑制其翻譯，調(diào)節(jié)目的基因表達(dá)，進而影響細(xì)胞或生物個體的生理病理狀態(tài)[8]。檢測外周血miRNA作為疾病標(biāo)志物的研究不斷報道[9-11]。2008年Mitchell等[12]首次報道m(xù)iRNAs在人的血漿中非常穩(wěn)定，這是因為血漿中的miRNA被包在“exosomes”中。Exosomes是50～90 nm的小微粒，在血漿中非常豐富。臨床上，活體心臟標(biāo)本獲得困難。通過研究患者外周血漿miRNA水平可以獲取心臟疾病病理生理過程的信息。我們的前期研究[13]顯示，LVH患者h(yuǎn)sa-miR-30a升高。我們試圖探討血漿hsa-miR-30a與高血壓LVH患者預(yù)后的關(guān)系。

評估LVH的傳統(tǒng)檢測手段有超聲心動圖（ultrasonic cardiogram，UCG）測量、心電圖（electrocar－diogram，ECG）描記和心臟磁共振成像（MRI）。ECG診斷LVH的敏感性較低，但具有低消耗和實用性強的特點。ECG測量LVH的常用指標(biāo)有Sokolow-lyon指數(shù)（SV1+RV5）、RavL電壓和cornell電壓-時間乘積。Sokolow-lyon指數(shù)＞3.5 mV、改良的Sokolow-lyon指數(shù)（最大S波+最大R波）＞3.5 mV、RavL＞1.1 mV、cornell電壓-時間乘積＞244 mV×ms檢出的LVH是心血管事件的獨立預(yù)測因子[14]。UCG診斷LVH比ECG更敏感，且可更精確量化評估LVH[15]。但UCG測量LVH時與操作者切面的選擇有關(guān)，主觀性較強。MRI亦可以評估LVH，但費用較高。因而我們試圖篩選出一種更優(yōu)勢（方便、檢測費用相對低廉、客觀性強、更精確）的評價LVH的檢測方法。本研究結(jié)果顯示，預(yù)后不良組高血壓LVH患者血漿hsamiR-30a升高。那么，血漿hsa-miR-30a在高血壓LVH患者預(yù)后預(yù)測中的價值如何呢，有待進一步臨床證實。我們進一步的Logistic回歸分析表明，血漿hsa-miR-30a上調(diào)（OR=2.57，P<0.05）是高血壓LVH患者預(yù)后不良的獨立預(yù)測因子。

研究[16]表明，治療引發(fā)的LVH降低與心血管疾病風(fēng)險顯著降低相關(guān)。治療后UCG、ECG和MRI所獲得的反映LVH的臨床參數(shù)發(fā)生改變的時間均在6個月以上，降低了其指導(dǎo)臨床治療的實用性，增加了醫(yī)療花費和時間成本[17]。需要尋找一種經(jīng)干預(yù)后發(fā)生改變時間較快的指標(biāo)。既然血漿hsamiR-30a上調(diào)是高血壓LVH患者預(yù)后不良的獨立預(yù)測因子，那么，治療引起的血漿hsa-miR-30a改變是否能預(yù)測高血壓LVH患者的臨床預(yù)后，能否作為一種更方便、檢測費用相對低廉、客觀性強、更精確且能對干預(yù)早期反應(yīng)的評價LVH的檢測方法，需要進一步的臨床研究證實。

［1］de Gregorio C，Andò G，Cannavò S，et al.Cardiovascular outcomes and conventional risk factors in non-diabetic adult patients with GH deficiency：A long-term retrospective cohort study.Eur J Intern Med，2015，26：813-818.

［2］PLoS One Staff.Correction：The Human Myotrophin Variant Attenuates MicroRNA-Let-7 Binding Ability but Not Risk of Left Ventricular Hypertrophy in Human Essential Hypertension.PLoS One，2016，11：e0146735.

［3］Lin CY，Chung FP，Lin YJ，et al.Intramural Reentrant Ventricular Tachycardia in a Patient with Severe Hypertensive Left Ventricular Hypertrophy.Korean Circ J，2015，45：526-530.

［4］Mosterd A，Hoes AW.Clinical epidemiology of heart failure.

Heart，2007，93：1137-1146.

［5］Madanieh R，Mathew S，Shah P，et al.Cardiac Magnetic Resonance Imaging Might Complement Two-Dimensional Echocardiography in the Detection of a Reversible Nonischemic Cardiomyopathy.Clin Med Insights Case Rep，2015，8：109-114.

［6］Garg S，de Lemos JA，Ayers C，et al.Association of a 4-Tiered Classification of LV Hypertrophy With Adverse CV Outcomes in the General Population.JACC Cardiovasc Imaging，2015，8：1034-1041.

［7］D′Elia N，D′hooge J，Marwick TH.Association Between Myocardial Mechanics and Ischemic LV Remodeling.JACC Cardiovasc Imaging，2015，8：1430-1443.

［8］Mooney C，Raoof R，El-Naggar H，et al.High Throughput qPCR Expression Profiling of Circulating MicroRNAs Reveals Minimal Sex-and Sample Timing-Related Variation in Plasma of Healthy Volunteers.PLoS One，2015，10：e0145316.

［9］Van Giau V，An SS.Emergence of exosomal miRNAs as a diagnostic biomarker forAlzheimer′s disease.J NeurolSci，2016，360：141-152.

［10］Merhi B，Bayliss G，Gohh RY.Role for urinary biomarkers in diagnosis of acute rejection in the transplanted kidney.World J Transplant，2015，5：251-260.

［11］Shalaby T，Grotzer MA.Tumor-Associated CSF MicroRNAs for the Prediction and Evaluation of CNS Malignancies.Int J Mol Sci，2015，16：29103-29119.

［12］ MitchellPS，Parkin RK， Kroh EM，etal.Circulating microRNAs as stable blood-based markers for cancer detection. Proc Natl Acad Sci USA，2008，105：10513-10518.

［13］Pan W，Zhong Y，Cheng CF，et al.MiR-30-regulated autophagy mediates angiotensin Ⅱ -induced myocardial hypertrophy.PLoS One，2013，8：e53950.

［14］Xu CF，Tan ES，F(xiàn)eng L，et al.Electrocardiographic Criteria for Left Ventricular Hypertrophy in Asians Differs from Criteria Derived from Western Populations-Community-based Data from an Asian Population.Ann Acad Med Singapore，2015，44：274-283.

［15］Grigoriadi NE，Vasilets LM，Tuev AV，et al.The prediction of atrial fibrillation in patients with arterial hypertension.Vestn Ross Akad Med Nauk，2013，11：26-29.

［16］Diederichsen SZ，Pareek M，Nielsen ML，et al.Impact of fasting glucose on electrocardiographic left ventricular hypertrophy in an elderly general population.Blood Press，2015，24：164-173.

［17］Nakayama M，Nakano H，Tsuboi N，et al.The effect of angiotensin receptor blockade ARB on the regression of left ventricular hypertrophy in hemodialysis patients：comparison between patients with D allele and non-D allele ACE gene polymorphism.Clin Nephrol，2005，64：358-363.

Relation of hsa-miR-30a and prognosis in hypertension patients with left ventricular hypertrophy

PAN Wei＊，ZHAO Juan，LUO Shao-jin，et al.＊Cardiovascular Department，Nanhai Hospital Affiliated to Southern Medical University，F(xiàn)oshan 528200，China

PAN Wei，E-mail：weipan1977@163.com

Objective To investigate the predictive value of prognosis in hypertension patients with left ventricular hypertrophy and hsa-miR-30a.Methods118 hypertension patients with left ventricular hypertrophy, divided into good prognosis group（n=82）and poor prognosis group（n=36），were randomly selected.The patients were detected the plasma hsa-miR-30a by real-time PCR.Whether plasma hsa-miR-30a could be independent predictor of left ventricular hypertrophy patients with poor prognosis or not was analyzed by Logistic regression.ResultsCompared with good prognosis group，plasma hsa-miR-30a increased in poor prognosis group［（11.24± 2.15）2-Δct*104vs（20.87±4.36）2-Δct*104，P＜0.05］.The plasma hsa-miR-30a was independent predictor of left ventricular hypertrophy patients with poor prognosis（OR=2.57，P＜0.05）.ConclusionThe plasma hsa-miR-30a has predictive value for left ventricular hypertrophy patients with poor prognosis.

Left ventricular hypertrophy； Hypertension； MicroRNA-30a； Prognosis

2014年廣東省醫(yī)學(xué)科研基金立項（項目編號：A2014712）

528200 廣東省佛山市，南方醫(yī)科大學(xué)附屬南海醫(yī)院心內(nèi)科（潘偉、羅韶金、楊澤福、黃景文），超聲科（趙娟）

潘偉，E-mail：weipan1977@163.com

10.3969/j.issn.1672－5301.2016.04.012

R544.1

A

1672-5301（2016）04-0334-03

2015-12-30）