川貝母組培快繁實(shí)用技術(shù)

李 旦，謝忠利，孫舉聰，古 旭，向建英

（西南林業(yè)大學(xué)云南生物多樣性研究院，云南昆明 650224）

川貝母（Fritillaria cirrhosa）又名卷葉貝母，為百合科（Liliaceae）貝母屬（Fritillaria）植物，生長(zhǎng)于海拔3 200～4 500m高寒地區(qū)，土壤比較濕潤(rùn)的向陽(yáng)山坡，主產(chǎn)于西藏南部至東部、云南西北部和四川西部。

川貝母以其地下鱗莖入藥，是中醫(yī)學(xué)常用的一味重要藥用植物，因其良好的醫(yī)療效果，其市場(chǎng)需求量很大。但川貝母分布區(qū)廣，種源多樣，差異較大，隨著中藥產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展，各種傳統(tǒng)單方和復(fù)方中藥對(duì)川貝母的需求量逐年增大，而產(chǎn)業(yè)發(fā)展之初，幾乎都是使用野生的川貝母資源，巨大的商業(yè)利益刺激下，林農(nóng)戶到野外天然環(huán)境中去采挖野生川貝母，造成川貝母生境的極大破壞，使得川貝母的供求矛盾加劇，野生資源已面臨枯竭。

川貝母的人工擴(kuò)繁有2種擴(kuò)繁方式，第一種為有性繁殖，人工種植野生川貝母需生長(zhǎng)3～4年才能收獲，生長(zhǎng)周期長(zhǎng)，生產(chǎn)成本高，且川貝母種子繁殖系數(shù)低，發(fā)芽困難，嚴(yán)重制約人工栽培的發(fā)展，難以滿足市場(chǎng)需求。第二種方式為無(wú)性繁殖，即川貝母的組培快繁技術(shù)，無(wú)性繁殖的方式可以縮短生長(zhǎng)周期，降低成本，是市場(chǎng)化經(jīng)營(yíng)的發(fā)展趨勢(shì)。

1 外植體的選擇

植物材料取材部位和時(shí)期不同，組織培養(yǎng)的結(jié)果也不一樣。川貝母組培快繁常選用川貝母新鮮鱗莖為外植體材料。

采集川貝母鱗莖的時(shí)間與再生小鱗莖的頻率及數(shù)量也有密切的關(guān)系。出苗盛期采集的川貝母鱗莖誘導(dǎo)再生小鱗莖的頻率為48.3%，開(kāi)花盛期采集的川貝母鱗莖誘導(dǎo)再生小鱗莖的再生頻率為15.9%。同時(shí)，出苗期的川貝母鱗莖培養(yǎng)2個(gè)周期后再生的小鱗莖數(shù)量上為原接種數(shù)的12.3倍。

2 無(wú)菌體系的建立

將川貝母鱗莖洗去表面泥土，用流動(dòng)的水沖洗20min后，濾紙擦干，轉(zhuǎn)移至超凈工作臺(tái)或無(wú)菌環(huán)境中；將鱗莖置于75%乙醇消毒30s，再用0.1%的升汞溶液浸泡8min，浸泡同時(shí)均勻的搖動(dòng)，使鱗莖充分接觸升汞溶液，然后，用無(wú)菌水沖洗3～5次，每次2min，滅菌好的鱗莖用解剖刀切割成0.5cm大小的塊，接種于添加激素的MS培養(yǎng)基中，進(jìn)行培養(yǎng)。

3 培養(yǎng)基和激素的選擇

選擇合適培養(yǎng)基是組織培養(yǎng)的重要環(huán)節(jié)，川貝母使用鱗莖為外植體進(jìn)行組織擴(kuò)繁的最佳培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，在增殖和生根階段使用1/2MS培養(yǎng)基。

川貝母的鱗莖誘導(dǎo)啟動(dòng)培養(yǎng)常用的激素有NAA、KT和BA。生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素配合使用時(shí)，川貝母外植體直接再生成小鱗莖；而當(dāng)僅用生長(zhǎng)素類激素時(shí)，常常是先形成愈傷組織，而后轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基上形成小鱗莖。

在生產(chǎn)上，可使用MS基本培養(yǎng)基，添加NAA 2.0mg/L和BA 0.5mg/L，附加蔗糖30 g/L，瓊脂6 g/L，調(diào)節(jié)pH為 5.8，誘導(dǎo)川貝母鱗莖分化出不定芽；使用1/2MS基本培養(yǎng)基，添加NAA 1.0mg/L進(jìn)行不定芽的增殖培養(yǎng)；成苗時(shí)，選用MS為基本培養(yǎng)基，添加1：1的細(xì)胞生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素即可；最后使用1/2MS基本培養(yǎng)基，0.1～0.3mg/L的NAA進(jìn)行生根培養(yǎng)。從外植體誘導(dǎo)至最終生根，整個(gè)世代約2～3個(gè)月，不定芽的增殖周期為25d，增殖系數(shù)約為4.5。

4 培養(yǎng)條件

溫度和光照對(duì)組培苗的生長(zhǎng)相當(dāng)重要，影響細(xì)胞增殖和器官分化。川貝母組織培養(yǎng)光照強(qiáng)度2 200lx，光照12h，暗培養(yǎng)12h。一般均采用20℃±1℃的散射光培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度較其他植物低。

5 展望

川貝母組培快繁技術(shù)大大縮短了育種周期，本技術(shù)的應(yīng)用可以減輕對(duì)野生資源的過(guò)度依賴，從而更好地保護(hù)川貝母的野生資源；緩解川貝母資源緊缺問(wèn)題；防止假冒替代品的現(xiàn)象；充分有效地利用川貝資源；還能通過(guò)組培快繁技術(shù)實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化、規(guī)?；?、工廠化，更好地造福于人類。這也將大力促進(jìn)地方經(jīng)濟(jì)發(fā)展，幫助調(diào)整農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)，增加農(nóng)民和地方財(cái)政收入；提高農(nóng)業(yè)科技含量和農(nóng)民素質(zhì)，推動(dòng)現(xiàn)代農(nóng)業(yè)的發(fā)展；還有利于培植龍頭企業(yè)，推進(jìn)農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)化經(jīng)營(yíng)；對(duì)實(shí)現(xiàn)農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展，推進(jìn)社會(huì)主義新農(nóng)村建設(shè)有著重要的意義。

[1] 王躍華，江明殊，何詩(shī)虹，等.川貝母組培苗快速繁殖研究[J].四川師范大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2013，36（6）：941-944.

[2] 江明殊.高有效組分川貝母的組織培養(yǎng)與質(zhì)量研究[D].四川：四川師范大學(xué)，2015.

[3] 郭偉珍，林艷，曹軍合.平枝栒子的組培快繁技術(shù)[J].林業(yè)實(shí)用技術(shù)，2006，（10）：46.