甘草炮制條件對(duì)18α-Gly和18β-Gly含量及比例的影響

趙燕燕，李楊，劉麗艷，柳亞飛，高博

(1.河北大學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心，河北保定　071000；2.河北大學(xué)化學(xué)與環(huán)境科學(xué)學(xué)院，河北保定　071002；

3.河北大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院，河北保定　071000)

甘草炮制條件對(duì)18α-Gly和18β-Gly含量及比例的影響

趙燕燕1,2，李楊2，劉麗艷1，柳亞飛2，高博3

(1.河北大學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心，河北保定071000；2.河北大學(xué)化學(xué)與環(huán)境科學(xué)學(xué)院，河北保定071002；

3.河北大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院，河北保定071000)

摘要：研究甘草在炮制過(guò)程中不同炮制條件對(duì)甘草中主成分差向異構(gòu)體18α-甘草酸(18α-Gly)和18β-甘草酸(18β-Gly)及雜質(zhì)含量和比例關(guān)系變化的影響及其變化規(guī)律.采用Durashell -C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以0.01 mol/L高氯酸銨(氨水調(diào)節(jié)pH至8.20)-甲醇(體積比為48∶52)為流動(dòng)相，流速0.80 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm，柱溫50 ℃，進(jìn)樣量10 μL.觀察炮制時(shí)間、炮制溫度對(duì)甘草飲片中主成分和雜質(zhì)的含量及對(duì)甘草酸2個(gè)差向異構(gòu)體比例的影響.經(jīng)炮制后的甘草主成分總含量較甘草飲片均有所下降，炮制時(shí)間的延長(zhǎng)會(huì)使甘草飲片主成分的損失量逐漸增加，但對(duì)甘草飲片中主成分異構(gòu)體18α-Gly和18β-Gly的比例關(guān)系無(wú)影響.當(dāng)炮制溫度小于90 ℃時(shí)，炮制溫度和炮制時(shí)間對(duì)甘草飲片中的主成分異構(gòu)體(18α-Gly和18β-Gly)和雜質(zhì)含量的影響不明顯；當(dāng)炮制溫度達(dá)到140 ℃后，炮制時(shí)間的延長(zhǎng)會(huì)使18α-Gly和18β-Gly分解，主成分含量顯著降低.甘草的主成分和雜質(zhì)對(duì)各炮制因素具有一定敏感性，可考慮作為炮制程度的一個(gè)輔助質(zhì)量指標(biāo)引入甘草質(zhì)量控制體系.

關(guān)鍵詞：甘草；炮制條件；甘草酸；差向異構(gòu)體；變化規(guī)律

DOI：10.3969/j.issn.1000-1565.2015.02.006

中圖分類號(hào)：O657.7；R9

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：志碼：A

文章編號(hào)：編號(hào)：1000-1565(2015)02-0138-09

收稿日期:2014-09-20

基金項(xiàng)目：河北省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(H2013201203)；河北大學(xué)醫(yī)學(xué)學(xué)科專項(xiàng)建設(shè)資金資助項(xiàng)目(2014A1003)

Abstract:To study the effects and change rule of licorice processing conditions on the content and proportion of the principal component isomer 18α-glycyrrhizic acid(18α-Gly) and 18β-glycyrrhizic acid (18β-Gly)，and on the content of impurity during processing. The assay was carried out on a Durashell-C18 column(250 mm×4.6 mm，5 μm) with 0.01 mol/L ammonium perchlorate(the pH value was adjusted to 8.20 with ammonia)-methanol(the volume ratio is 48∶52) as mobile phase at a flow rate of 0.80 mL/min，and the detection wavelength was set at 254 nm. The column temperature was 50 ℃ and the injection volume was 10 μL. Effects of processing time，processing temperature on the content of principal component and impurity，and on the proportion of principal component isomer were observed. Compared with licorice pieces，the total content of principal component were declined after processing. The loss of the principal component in licorice pieces were gradually increased with the extended processing time. But the proportion of principal component isomer 18α-Gly，18β-Gly remained constant. When processing temperature below 90 ℃，the effects of processing time，processing temperature on the content of the principal component and impurity in licorice pieces was not obvious. When heated to 140 ℃，the degradation of 18α-Gly，18β-Gly occurred with the extended processing time，and the content of principal component decreased significantly. The proportion of the principal component in licorice pieces was not affected by the processing time and the processing temperature. The principal component and impurity in licorice pieces were sensitive to each processing factor，which could be part of the scientific evidences for completing quality control system of licorice.

Effects of licorice processing conditions on content and proportion of

18α-glycyrrhizic acid and 18β-glycyrrhizic acid

ZHAO Yanyan1,2，LI Yang2，LIU Liyan1，LIU Yafei2， GAO Bo3

(1.Experimental Center of Medicine，Hebei University，Baoding 071000，China；2.College of Chemistry and

Environmental Science，Hebei University，Baoding 071002，China；3.College of Clinical Medicine，

Hebei University，Baoding 071000，China)

第一作者:趙燕燕(1960-)，女，天津人，河北大學(xué)教授，博士，主要從事藥學(xué)以及將現(xiàn)代分離技術(shù)用于臨床、藥學(xué)、食品、環(huán)境等方面的研究工作.E-mail：zhaoyany606@tom.com

Key words: licorice；processing conditions；glycyrrhizic acid；isomer；change rule

甘草在中國(guó)產(chǎn)區(qū)遼闊，產(chǎn)量巨大，具有多種藥理作用[1-3]，主要以飲片形式出口并應(yīng)用于臨床.中藥炮制是中國(guó)人民在數(shù)千年的醫(yī)療實(shí)踐中不斷總結(jié)、改進(jìn)、發(fā)展形成的一套傳統(tǒng)制藥技術(shù)，和中藥復(fù)方一起構(gòu)成了中國(guó)醫(yī)藥學(xué)的2大鮮明特色.中藥炮制品作為中藥的重要組成部分，廣泛應(yīng)用于醫(yī)院、藥房以及制劑生產(chǎn)中.但目前中藥炮制工藝參數(shù)缺乏統(tǒng)一的量化標(biāo)準(zhǔn)，造成各地制法不一，導(dǎo)致所含化學(xué)成分的性質(zhì)和含量產(chǎn)生不同程度的改變，使藥理作用與毒性、臨床療效也會(huì)隨之發(fā)生變化，直接影響中醫(yī)臨床用藥的安全性和有效性[4-5].

甘草酸2個(gè)差向異構(gòu)體雖然在自然界、制劑中或在體內(nèi)很難發(fā)生差向異構(gòu)化，但在一定的化學(xué)條件下能發(fā)生構(gòu)型的改變，李立威等[6]將18β-甘草酸鹽經(jīng)堿液處理后再酸化轉(zhuǎn)化為18α-甘草酸，Ignatov等[7]將18β-甘草酸與甲醇在鹽酸酸性條件下作用，再經(jīng)苯甲酯化，其產(chǎn)物經(jīng)分離后在堿性條件下水解可得18α-甘草酸.二者構(gòu)型發(fā)生異構(gòu)化后，在理化性質(zhì)、藥效學(xué)、藥動(dòng)學(xué)及不良反應(yīng)等方面均產(chǎn)生顯著差異[8-9]，可能會(huì)影響藥物的作用性質(zhì)、作用強(qiáng)度和安全性，以及治療效果或與其他藥物的相互作用[10].2010版《中國(guó)藥典》規(guī)定，按干燥品計(jì)算，甘草藥材中甘草酸的含量不得低于2.0%，但炮制對(duì)甘草酸含量及18α-Gly與18β-Gly比例有何影響，藥典中未做明確規(guī)定.目前， 國(guó)內(nèi)外相關(guān)領(lǐng)域在中藥甘草的炮制方面沒(méi)有完整系統(tǒng)的研究[5,11-12]，使得甘草的炮制工藝缺乏準(zhǔn)則，難以控制其質(zhì)量和用量.現(xiàn)有檢測(cè)方法[13-14]均以甘草酸單體總含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，而對(duì)甘草酸提取物中18α-Gly和18β-Gly的準(zhǔn)確定量分析，以及炮制方法對(duì)18α-Gly和18β-Gly異構(gòu)體比例的影響等方面的研究，尚未見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，造成產(chǎn)品內(nèi)在質(zhì)量控制的缺失，有待進(jìn)一步研究.本實(shí)驗(yàn)以18α-Gly 和18β-Gly的含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用RP-HPLC法，同時(shí)對(duì)甘草飲片中主成分18α-Gly和18β-Gly及雜質(zhì)進(jìn)行了含量測(cè)定，并對(duì)甘草飲片和不同條件下的炮制品進(jìn)行比較，考察炮制時(shí)間和炮制溫度對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品混合物和甘草飲片中主成分和雜質(zhì)的含量，以及對(duì)18α-Gly與18β-Gly比例變化的影響，為甘草質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定和炮制工藝規(guī)范化提供依據(jù).

1實(shí)驗(yàn)部分

1.1　儀器與試劑

LC-10ATvp高效液相色譜儀(日本島津公司)、SPD-M10Avp二極管陣列檢測(cè)器(DAD)、CLASS-VP工作站；AUW120D十萬(wàn)分之一電子分析天平(日本島津公司)；超純化水機(jī)(重慶頤洋企業(yè)發(fā)展有限公司)； DELTA-320型酸度計(jì)(梅特勒-托利多儀器有限公司)；KQ5200E型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；SK-1快速混勻器(常州國(guó)華電器有限公司)； TGL-16G型臺(tái)式離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)、RT-9型中藥粉碎機(jī)(浙江省縉云縣超力機(jī)械廠)孔徑0.45 mm標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)篩(浙江上虞市道墟張興紗篩廠).

18α-Gly標(biāo)準(zhǔn)品(批號(hào)：10B001S，ALPS制藥)、18β-Gly標(biāo)準(zhǔn)品(批號(hào)：05C11S，ALPS制藥)、雜質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品(批號(hào)：10B002S，ALPS制藥)、雜質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品(批號(hào)：10B003S，ALPS制藥)、甘草原藥材和甘草飲片來(lái)源于安國(guó)中藥材市場(chǎng)(經(jīng)我校生藥學(xué)教研室專家鑒定，產(chǎn)地：甘肅，批號(hào)：20121229)、煉蜜、高氯酸銨(分析純).甲醇(色譜純，天津市康科德科技有限公司).水為二次去離子水.

1.2　色譜條件

色譜柱Durashell -C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動(dòng)相為0.01 mol/L高氯酸銨(氨水調(diào)節(jié)pH至8.20)-甲醇(體積比為48∶52)，流速0.80 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm，柱溫50 ℃，進(jìn)樣量10 μL.

1.3　方法學(xué)考察

1.3.1線性關(guān)系和檢出限

精密吸取18α-Gly、18β-Gly、雜質(zhì)A和雜質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液各1 mL，分別置于10 mL容量瓶中，用流動(dòng)相定容至刻度，搖勻，得質(zhì)量濃度為100 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)品溶液，用流動(dòng)相逐級(jí)稀釋成一系列質(zhì)量濃度不同的溶液(100.0，50.0，25.0，10.0，5.0，1.0，0.5，0.1 μg/mL)，按照“1.2”項(xiàng)下色譜條件上機(jī)分析，記錄色譜圖，以進(jìn)樣質(zhì)量濃度(X)(μg/mL)對(duì)峰面積(Y)作圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線.按3倍信噪比計(jì)算檢出限.

1.3.2精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性和回收率

量取標(biāo)準(zhǔn)品溶液，按照“1.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析，連續(xù)進(jìn)樣6次，以峰面積為指標(biāo)計(jì)算18α-Gly、18β-Gly、雜質(zhì)A、雜質(zhì)B 4個(gè)化合物的RSD(n=6)，考察方法的精密度.取同一批次的甘草飲片溶液6份，按“1.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析，以峰面積值為指標(biāo)計(jì)算4個(gè)化合物的RSD(n=6)，考察方法的重復(fù)性.取同一批次的甘草飲片溶液，按照“1.2”項(xiàng)下色譜條件上機(jī)分析，分別在0，1，3，5，7，10 d時(shí)進(jìn)行測(cè)定，以峰面積為指標(biāo)計(jì)算4個(gè)化合物的RSD(n=6)，考察甘草飲片的穩(wěn)定性.精密量取甘草飲片溶液、蜜炙甘草溶液各9份，每份10 mL，按甘草飲片溶液、蜜炙甘草溶液中各待測(cè)濃度的80%，100%，120%分別加入18α-Gly、18β-Gly、雜質(zhì)A和雜質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品各3份，按“1.2”項(xiàng)下色譜條件上機(jī)分析，記錄色譜圖，考察方法的加樣回收率(n=3).

1.4　標(biāo)準(zhǔn)品溶液制備

1.4.1標(biāo)準(zhǔn)品溶液

精密稱定18α-Gly、18β-Gly、雜質(zhì)A和雜質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品適量，分別置于10 mL容量瓶中，體積分?jǐn)?shù)為50%甲醇溶解、定容，分別配制成質(zhì)量濃度為1 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液，于4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆?

精密量取適量標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液于10 mL容量瓶中，體積分?jǐn)?shù)為50%甲醇溶液定容，作為標(biāo)準(zhǔn)品溶液.分別精密量取各標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液適量，置于同一容量瓶中，用流動(dòng)相定容，搖勻，得混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液.

1.4.2標(biāo)準(zhǔn)品混合物

精密稱定18α-Gly、18β-Gly、雜質(zhì)A和雜質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品適量，其中18α-Gly和18β-Gly的質(zhì)量比為1∶15，將4種物質(zhì)混合均勻，得標(biāo)準(zhǔn)品混合物.

1.5　樣品處理

1.5.1標(biāo)準(zhǔn)品混合物

精密稱定標(biāo)準(zhǔn)品混合物適量，分別置于稱量瓶中，分別在不同溫度(40，60，90，140 ℃)下烘制不同的時(shí)間(0.25，0.5，1，2，4 h)，待標(biāo)準(zhǔn)品混合物冷卻至室溫后，精密稱定等量的炮制后的粉末20份，分別置于25 mL容量瓶中，加入流動(dòng)相溶解，冷卻至室溫后，用流動(dòng)相定容至刻度，搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)品混合物儲(chǔ)備液，于4 ℃冰箱中保存.

精密量取標(biāo)準(zhǔn)品混合物儲(chǔ)備液適量，分別置于10 mL容量瓶中，流動(dòng)相定容，搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)品混合物溶液(質(zhì)量濃度為50 μg/mL).

1.5.2甘草飲片

根據(jù)2010版《中國(guó)藥典》(一部)(附錄Ⅱ D)中蜜炙法所記載的悶潤(rùn)方法對(duì)甘草飲片進(jìn)行悶潤(rùn)，即先將煉蜜加適量沸水(質(zhì)量分?jǐn)?shù)約10%)稀釋后，加入甘草飲片拌勻(每100 kg甘草飲片用煉蜜25 kg)，悶透.單層鋪于搪瓷盤(pán)中，分別在不同溫度下炮制不同時(shí)間，取出，用中藥粉碎機(jī)粉碎，過(guò)孔徑0.45 mm篩.

取甘草飲片粉末0.15 g，以及相當(dāng)于0.15 g甘草飲片的蜜炙甘草粉末，分別置于25 mL容量瓶中，精密加入25 mL流動(dòng)相，稱定質(zhì)量，超聲處理40 min[15]，冷卻至室溫，再稱質(zhì)量，補(bǔ)足損失質(zhì)量.搖勻、離心，取上清液，用0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，作為甘草飲片溶液和蜜炙甘草溶液.

2結(jié)果

2.1　專屬性實(shí)驗(yàn)色譜

分別量取混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液、甘草飲片溶液、甘草飲片中加入混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液、蜜炙甘草溶液、以及蜜炙甘草中加入混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液.按照“1.2”項(xiàng)下色譜條件上機(jī)分析，專屬性實(shí)驗(yàn)色譜圖見(jiàn)圖1.

1.雜質(zhì)A；2. 18α-甘草酸；3. 18β-甘草酸；4.雜質(zhì)B.a.混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液；b.甘草飲片溶液；c.甘草飲片中加入混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液；d.蜜炙甘草溶液；e.蜜炙甘草中加入混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液　圖1　專屬性實(shí)驗(yàn)色譜　Fig.1　HPLC chromatograms of specificity tests

2.2　主成分異構(gòu)體及其與雜質(zhì)同時(shí)分離檢測(cè)

2.2.1線性關(guān)系和檢出限

對(duì)18α-Gly、18β-Gly、雜質(zhì)A和雜質(zhì)B的線性關(guān)系及檢出限的考查結(jié)果表明，18α-Gly、18β-Gly、雜質(zhì)A和雜質(zhì)B的線性回歸方程為Y=7.069×103X+4.668×103(r=0.999 9)、Y=7.736×103X-4.030×103(r=0.999 9)、Y=1.413×104X-6.727×103(r=0.999 9)和Y=1.202×104X-5.002×103(r=0.999 9).待測(cè)物質(zhì)量濃度在1.00~1.00×102μg/mL內(nèi)線性關(guān)系均良好，檢出限分別為0.30，0.30，0.25，0.25 μg/mL.

2.2.2方法學(xué)考察

對(duì)精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性和回收率方法學(xué)考察結(jié)果表明，18α-Gly、18β-Gly、雜質(zhì)A和雜質(zhì)B色譜峰峰面積的RSD值均小于1.85%，甘草飲片溶液在10 d內(nèi)檢測(cè)穩(wěn)定性良好，2010版《中國(guó)藥典》規(guī)定，高效液相色譜法RSD應(yīng)小于2%，考察結(jié)果符合藥典要求，加樣回收率見(jiàn)表1.

表1　甘草飲片中主成分及雜質(zhì)的加樣回收率(n=3)

2.3　不同炮制條件下的含量測(cè)定

取標(biāo)準(zhǔn)品溶液，按照“1.2”項(xiàng)下色譜條件上機(jī)分析，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的25%.分別取標(biāo)準(zhǔn)品混合物和甘草飲片，按“1.5”項(xiàng)下方法進(jìn)行炮制，按照“1.2”項(xiàng)下色譜條件上機(jī)分析，記錄色譜圖至主峰保留時(shí)間的3倍，分別計(jì)算幾種待測(cè)成分的含量.在不同炮制條件下，標(biāo)準(zhǔn)品混合物和甘草飲片中各成分百分含量見(jiàn)表2.

表2　在不同炮制條件下標(biāo)準(zhǔn)品混合物和甘草飲片中各成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)(n=3)

續(xù)表2

在標(biāo)準(zhǔn)品混合物和甘草飲片中，實(shí)驗(yàn)測(cè)得的18α-Gly與18β-Gly的質(zhì)量比分別為1∶15和1∶7.

2.4　炮制條件對(duì)各成分含量及18α-Gly、18β-Gly比例的影響

2.4.1炮制時(shí)間對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品混合物和甘草飲片中各成分含量及18α-Gly和18β-Gly比例關(guān)系的影響

同一溫度不同時(shí)間點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)品混合物和甘草飲片中18α-Gly和18β-Gly質(zhì)量分?jǐn)?shù)與比例關(guān)系分別見(jiàn)圖2a、圖2b，其他雜質(zhì)(雜質(zhì)A、雜質(zhì)B及其他雜質(zhì))質(zhì)量分?jǐn)?shù)見(jiàn)表2.標(biāo)準(zhǔn)品混合物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在相同溫度點(diǎn)，隨著炮制時(shí)間的延長(zhǎng)，18α-Gly和18β-Gly的含量逐漸降低，雜質(zhì)A和雜質(zhì)B含量逐漸升高.當(dāng)炮制溫度小于90 ℃時(shí)，在同一溫度點(diǎn)，炮制時(shí)間對(duì)18α-Gly和18β-Gly、雜質(zhì)A和雜質(zhì)B含量的影響不明顯；隨著炮制時(shí)間的延長(zhǎng)，18α-Gly和18β-Gly的損失量，以及雜質(zhì)A和雜質(zhì)B的增加量基本相同，僅在2.85%左右，沒(méi)有其他雜質(zhì)生成.當(dāng)炮制溫度達(dá)到140 ℃后，隨著炮制時(shí)間的延長(zhǎng)，加速18α-Gly和18β-Gly分解，含量顯著降低至20%以上；雜質(zhì)A和雜質(zhì)B的含量基本保持不變，其他雜質(zhì)的生成量隨之增加.

甘草飲片中甘草酸主成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.94%，經(jīng)炮制后的樣品主成分總含量較炮制前均有所降低.同一溫度點(diǎn)，隨著炮制時(shí)間的延長(zhǎng)，甘草酸主成分異構(gòu)體總含量逐漸減少，雜質(zhì)A和雜質(zhì)B的百分總含量逐漸增加.與炮制時(shí)間對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品混合物的影響相似，當(dāng)炮制溫度小于90 ℃時(shí)，在同一溫度點(diǎn)，炮制時(shí)間對(duì)甘草飲片中的主成分異構(gòu)體(18α-Gly和18β-Gly)和雜質(zhì)A、雜質(zhì)B含量的影響不明顯；當(dāng)炮制溫度達(dá)到140 ℃后，炮制時(shí)間的延長(zhǎng)會(huì)使18α-Gly和18β-Gly分解加快，主成分含量顯著降低.

同一溫度點(diǎn)，炮制時(shí)間對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品混合物和甘草飲片中主成分異構(gòu)體18α-Gly和18β-Gly的比例關(guān)系無(wú)影響.

a　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　b　圖2　同一溫度不同時(shí)間點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)品混合物(a)和甘草飲片(b)中18α-Gly和18β-Gly質(zhì)量分?jǐn)?shù)與比例關(guān)系　Fig.2　Mass fraction and proportion of 18α-Gly and 18β-Gly in mixture of standard substances and licorice pieces under different time at the same temperature

2.4.2炮制溫度對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品混合物和甘草飲片中各成分含量及18α-Gly和18β-Gly比例關(guān)系的影響

同一時(shí)間不同溫度點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)品混合物和甘草飲片中18α-Gly和18β-Gly質(zhì)量分?jǐn)?shù)與比例關(guān)系分別見(jiàn)圖3a、圖3b，其他雜質(zhì)(雜質(zhì)A、雜質(zhì)B及其他雜質(zhì))質(zhì)量分?jǐn)?shù)見(jiàn)表2.標(biāo)準(zhǔn)品混合物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在同一時(shí)間點(diǎn)，隨著炮制溫度的升高，18α-Gly和18β-Gly的含量逐漸降低，雜質(zhì)A和雜質(zhì)B含量逐漸升高.當(dāng)炮制溫度小于90 ℃時(shí)，隨著炮制溫度的升高，18α-Gly和18β-Gly的損失量和雜質(zhì)A、雜質(zhì)B的增加量?jī)H在3.27%左右，沒(méi)有其他雜質(zhì)生成，說(shuō)明炮制溫度對(duì)含量變化影響不明顯；當(dāng)炮制溫度達(dá)到140 ℃后，18α-Gly和18β-Gly的含量顯著降低，雜質(zhì)A和雜質(zhì)B含量升高，并有其他雜質(zhì)的生成.

a　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　b　圖3　同一時(shí)間不同溫度點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)品混合物(a)和甘草飲片(b)中18α-Gly和18β-Gly質(zhì)量分?jǐn)?shù)與比例關(guān)系　Fig.3　Mass fraction and proportion of 18α-Gly and 18β-Gly in mixture of standard substances and licorice pieces at different temperature under the same time

甘草飲片實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在同一時(shí)間點(diǎn)，隨著炮制溫度的升高，甘草飲片主成分的含量逐漸降低，當(dāng)炮制溫度達(dá)到140 ℃后，18α-Gly和18β-Gly的含量降低更加顯著，與炮制溫度對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品混合物的影響相似.

同一時(shí)間點(diǎn)，炮制溫度對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品混合物和甘草飲片中主成分異構(gòu)體18α-Gly和18β-Gly的比例關(guān)系無(wú)影響.

3討論

1)為了使測(cè)定結(jié)果能更準(zhǔn)確地反映炮制因素對(duì)其成分含量變化的影響，課題組在實(shí)驗(yàn)中選用了同一批次、同一產(chǎn)地的甘草飲片，并用18α-Gly、18β-Gly、雜質(zhì)A和雜質(zhì)B的混合標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行同步的模擬實(shí)驗(yàn).研究結(jié)果表明，甘草在炮制過(guò)程中，炮制時(shí)間的延長(zhǎng)和炮制溫度的升高均會(huì)導(dǎo)致甘草飲片中主成分異構(gòu)體18α-Gly和18β-Gly的部分分解，其總含量較甘草飲片有所降低.但炮制過(guò)程中未發(fā)現(xiàn)主成分異構(gòu)體的構(gòu)型轉(zhuǎn)變，同時(shí)，不影響二者的比例關(guān)系.對(duì)于生成的其他雜質(zhì)，在臨床應(yīng)用中是否會(huì)使其藥效發(fā)生改變或引起毒性反應(yīng)，還需要做進(jìn)一步的研究.

2)甘草飲片相對(duì)于原藥材，要經(jīng)過(guò)洗、晾、曬、潤(rùn)、切等炮制過(guò)程，使18α-Gly和18β-Gly含量有所降低.因此對(duì)于甘草以原藥材入藥的，收獲后，不可暴曬；炮制過(guò)程中不可溫度過(guò)高或時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，以免有效成分過(guò)度丟失.采用烘制法炮制時(shí)，烘制溫度60 ℃，烘制時(shí)間1~2 h較為適宜.該炮制條件克服了傳統(tǒng)方法中火候難以控制、質(zhì)量穩(wěn)定性差、勞動(dòng)強(qiáng)度大等缺點(diǎn)，具有便于操作、溫度和時(shí)間可控，外觀性狀和內(nèi)部質(zhì)量較好，質(zhì)量穩(wěn)定性好、便于貯存等優(yōu)勢(shì)，同時(shí)無(wú)污染，適于工業(yè)化生產(chǎn)，效率較高、經(jīng)濟(jì)環(huán)保.

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