幼魚和養(yǎng)成階段斜帶石斑魚對(duì)飼料中脂肪的需要量

董曉慧 楊俊江 譚北平楊奇慧 遲淑艷 劉泓宇（廣東海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，水產(chǎn)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料實(shí)驗(yàn)室，湛江524025）

幼魚和養(yǎng)成階段斜帶石斑魚對(duì)飼料中脂肪的需要量

董曉慧 楊俊江 譚北平?楊奇慧 遲淑艷 劉泓宇
（廣東海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，水產(chǎn)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料實(shí)驗(yàn)室，湛江524025）

摘 要：本試驗(yàn)旨在探討2個(gè)生長(zhǎng)階段（幼魚和養(yǎng)成階段）斜帶石斑魚對(duì)飼料中脂肪的需要量。以魚油調(diào)整飼料脂肪水平，配制5種脂肪水平（7．07%、9．92%、12．92%、15．95%和19．04%）的等氮飼料，分別投喂體重為9．1 g（幼魚階段）的斜帶石斑魚8周和體重為102．6 g（養(yǎng)成階段）的斜帶石斑魚10周。同一生長(zhǎng)階段，每種飼料設(shè)3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)幼魚階段放養(yǎng)25尾魚，養(yǎng)成階段放養(yǎng)20尾魚。結(jié)果表明：1）隨著飼料脂肪水平的升高，幼魚和養(yǎng)成階段石斑魚的增重率（WGR）、特定生長(zhǎng)率（SGR）、蛋白質(zhì)效率（PER）、肥滿度（CF）和臟體比（VSI）均隨著飼料脂肪水平的升高呈先上升后下降趨勢(shì)，飼料系數(shù)（FCR）則呈相反的變化趨勢(shì)，上述指標(biāo)均在飼料脂肪水平為12．92%時(shí)獲得極值。2）隨著飼料脂肪水平的升高，幼魚和養(yǎng)成階段石斑魚的全魚粗蛋白質(zhì)含量逐漸下降，全魚和肌肉粗脂肪含量逐漸上升，全魚和肌肉水分含量無顯著變化（P＞0．05），全魚和肌肉其他常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分含量無規(guī)律性變化。3）隨著飼料脂肪水平的升高，幼魚和養(yǎng)成階段石斑魚的血漿總蛋白（TP）和低密度脂蛋白（LDLC）含量呈逐漸下降趨勢(shì)，血漿高密度脂蛋白（HDLC）含量呈逐漸升高趨勢(shì)。幼魚和養(yǎng)成階段石斑魚的血漿甘油三酯（TG）和總膽固醇（CHOL）含量與飼料脂肪水平呈線性或曲線關(guān)系。4）隨著飼料脂肪水平的升高，幼魚和養(yǎng)成階段石斑魚的肝臟肝脂酶（HL）、脂蛋白脂酶（LPL）、蘋果酸脫氫酶（MDH）活性均逐漸下降，而肝臟乳酸脫氫酶（LDH）活性則逐漸上升。5）隨著飼料脂肪水平的升高，幼魚階段肝臟酸性磷酸酶（ACP）活性無顯著變化（P＞0．05），養(yǎng)成階段肝臟ACP活性逐漸下降，幼魚和養(yǎng)成階段肝臟超氧化物歧化酶（SOD）活性先升高后降低。幼魚和養(yǎng)成階段石斑魚肝臟堿性磷酸酶（AKP）和溶菌酶（LZM）活性與飼料脂肪水平呈正相關(guān)關(guān)系。6）隨飼料脂肪水平的升高，幼魚和養(yǎng)成階段石斑魚的胃腸道胃蛋白酶和淀粉酶活性逐漸下降，胃腸道脂肪酶活性逐漸上升。綜上，在本試驗(yàn)條件下，飼料中適宜水平的脂肪可以改善幼魚和養(yǎng)成階段斜帶石斑魚的生長(zhǎng)性能，且對(duì)體成分、生化指標(biāo)和消化代謝酶活性有一定影響；以SGR、FCR和PER為評(píng)價(jià)指標(biāo)，幼魚和養(yǎng)成階段的斜帶石斑魚對(duì)飼料中脂肪的需要量均在11%～13%內(nèi)。

關(guān)鍵詞：斜帶石斑魚；脂肪；生長(zhǎng)性能；生化指標(biāo)；消化酶

斜帶石斑魚（Epinephelus coioides）屬于鱸形目（Perciformes）科（Serranidae）石斑魚屬（Epi? nephelus），分布于我國(guó)東南沿海的熱帶、亞熱帶暖水海域［1］，具有生長(zhǎng)快、肉質(zhì)鮮美和經(jīng)濟(jì)價(jià)值高等優(yōu)點(diǎn)［2］，已成為我國(guó)廣東、海南、福建沿海海水養(yǎng)殖的名貴種類之一。但目前石斑魚養(yǎng)殖還主要以投喂冰鮮魚為主，配合飼料普及率低下，其主要原因是石斑魚營(yíng)養(yǎng)需要研究基礎(chǔ)薄弱。因此，開展斜帶石斑魚營(yíng)養(yǎng)需要研究進(jìn)而開發(fā)精準(zhǔn)的人工配合飼料已成為斜帶石斑魚集約化養(yǎng)殖可持續(xù)健康發(fā)展的迫切需要。

海水魚類對(duì)蛋白質(zhì)需要量高，而在資源日益短缺的今天，魚粉等優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)原料價(jià)格高昂，為節(jié)約養(yǎng)殖成本，養(yǎng)殖者希望飼料蛋白質(zhì)能更有效地轉(zhuǎn)化為魚體蛋白質(zhì)，而不是用于能量代謝；魚類的生理特點(diǎn)決定了其對(duì)飼料碳水化合物的利用能力有限，但卻能很好地利用脂肪，因此飼料脂肪常作為魚類重要的能量來源［3］。若飼料中脂肪含量低，水產(chǎn)動(dòng)物生長(zhǎng)緩慢，添加適量的脂肪則可有效促進(jìn)生長(zhǎng)，還能起到節(jié)約蛋白質(zhì)的作用［4－5］；同時(shí)，脂肪對(duì)維持魚類健康、繁殖和體色，改善飼料的適口性和外觀性狀，增加飼料的商品價(jià)值，提高飼料的利用效率等也具有重要的作用［6－7］。

石斑魚因體重和種類的不同，對(duì)脂肪的需要量差異較大。前人的研究表明，以魚油或混合油等為脂肪源，初重為4～40 g的石斑魚幼魚對(duì)飼料中脂肪的需要量在3%～15%［8－14］。

陸生動(dòng)物生產(chǎn)普遍采用階段飼養(yǎng)方式，其營(yíng)養(yǎng)需要研究也是按不同養(yǎng)殖階段進(jìn)行的，但水產(chǎn)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)研究絕大多數(shù)是以幼魚（蝦）為主。研究動(dòng)物不同生長(zhǎng)階段的營(yíng)養(yǎng)需求可遵循其生長(zhǎng)發(fā)育規(guī)律更科學(xué)精準(zhǔn)的配制飼料，提高飼料效率。因此，本試驗(yàn)以初重分別為9．1（幼魚階段）和102．6 g（養(yǎng)成階段，按上市體重的40%計(jì)，石斑魚250 g左右即可上市）的斜帶石斑魚為對(duì)象，通過研究不同脂肪水平飼料對(duì)斜帶石斑魚生長(zhǎng)性能、體成分、生化指標(biāo)和消化代謝酶活性等的影響，確定幼魚和養(yǎng)成階段斜帶石斑魚對(duì)飼料中脂肪的需要量，為研制石斑魚精準(zhǔn)高效配合飼料提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1　材料與方法

1．1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼料制作

在基礎(chǔ)飼料中分別添加0、3%、6%、9%、12%的魚油，配制5種不同脂肪水平（7．07%、9．92%、12．92%、15．95%和19．04%）的等氮飼料，分別記為L(zhǎng)1、L2、L3、L4和L5組，試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。所有原料粉碎后過40目篩，按配方比例稱取各種原料進(jìn)行混合，少量組分采用逐級(jí)擴(kuò)大法混合，然后加入魚油和大豆卵磷脂，將油脂微粒搓散后，放入V型立式混合機(jī)中混合均勻，緩慢加入所配飼料重量30%～40%的水后再次混勻，用F－26型雙螺桿擠條機(jī)（華南理工大學(xué)研制）加工成直徑為3和4 mm的顆粒飼料，風(fēng)干至水分含量10%左右，用封口袋分裝后于－20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1．2 試驗(yàn)魚及飼養(yǎng)管理

1．2．1 試驗(yàn)魚的來源及馴化

幼魚階段石斑魚購(gòu)自海南省文昌市煙墩區(qū)某石斑魚苗場(chǎng)，養(yǎng)成階段石斑魚購(gòu)自湛江雷州市覃斗鎮(zhèn)某石斑魚養(yǎng)殖場(chǎng)。試驗(yàn)魚運(yùn)回基地后，投喂商品料（中山統(tǒng)一企業(yè)有限公司產(chǎn)品，粗蛋白質(zhì)含量46%）1周，再投喂L1組飼料1周，使之逐漸適應(yīng)養(yǎng)殖環(huán)境和飼料。

1．2．2 飼養(yǎng)管理

養(yǎng)殖試驗(yàn)在廣東海洋大學(xué)東海島海洋生物研究基地室內(nèi)海水養(yǎng)殖系統(tǒng)中進(jìn)行。挑選規(guī)格一致（幼魚階段初重9．1 g，養(yǎng)成階段初重102．6 g）、體格健壯的斜帶石斑魚隨機(jī)分配。根據(jù)試驗(yàn)設(shè)計(jì)，共分為6個(gè)組，每組3個(gè)重復(fù)，以重復(fù)為單位放養(yǎng)于容積為1 000 L的玻璃鋼養(yǎng)殖桶內(nèi)。幼魚階段每桶放養(yǎng)25尾魚，投喂直徑為3 mm的飼料，試驗(yàn)期8周；養(yǎng)成階段每桶放養(yǎng)20尾魚，投喂直徑為4 mm的飼料，試驗(yàn)期10周。每天08：30和16：30各投喂1次，投喂完1 h后用虹吸法吸取殘餌。

試驗(yàn)期間每天觀察攝食情況、記錄死亡數(shù)。每2 d清洗養(yǎng)殖桶1次；試驗(yàn)期間不間斷充氣，水溫28．5～31．5℃，pH 7．5～8．0，鹽度26～30，氨氮和亞硝酸鹽濃度≤0．5 mg／L，溶氧濃度≥6 mg／L。

1．3 樣品采集及分析方法

1．3．1 樣品采集

試驗(yàn)結(jié)束石斑魚饑餓24 h后取樣。各桶石斑魚用丁香酚麻醉后稱重、計(jì)數(shù)。每桶隨機(jī)取5尾魚測(cè)量體重、體長(zhǎng)，計(jì)算肥滿度，然后于－20℃冰箱保存，用于全魚常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分分析。幼魚階段每桶再隨機(jī)取7尾魚，養(yǎng)成階段每桶再隨機(jī)取5尾魚，尾靜脈采血，血樣放入1．5 mL抗凝管中，室溫下靜置4 h后，4℃下3 500×g離心10 min，收集血漿放入－80℃冰箱保存，用于生化指標(biāo)測(cè)定。將取血后的石斑魚分離內(nèi)臟，分別稱每尾魚的內(nèi)臟團(tuán)和肝臟重量，計(jì)算肝體比和臟體比；然后分離背部肌肉，于－80℃冰箱保存，用于肌肉常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分分析。最后每桶再隨機(jī)取3尾魚，分離肝臟、胃、前腸，－80℃冰箱保存，備測(cè)代謝酶、免疫酶和消化酶活性。

表1　試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets（DM basis）　%

1．3．2 分析方法

試驗(yàn)飼料、全魚、肌肉的常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分測(cè)定采用AOAC（1995）［15］方法進(jìn)行。其中，水分含量的測(cè)定采用105℃烘干恒重法；粗蛋白質(zhì)含量的測(cè)定采用凱氏定氮法；粗脂肪含量的測(cè)定采用索氏抽提法；粗灰分含量的測(cè)定采用箱式電阻爐550℃灼燒法。

血漿生化指標(biāo)采用全自動(dòng)生化分析儀（Hita?chi 7020型，日本）測(cè)定。

代謝酶［肝脂酶（HL）、脂蛋白脂酶（LPL）、蘋果酸脫氫酶（MDH）、乳酸脫氫酶（LDH）］、消化酶（胃蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶）以及免疫酶中的堿性磷酸酶（AKP）、酸性磷酸酶（ACP）、超氧化物歧化酶（SOD）活性采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒測(cè)定，相應(yīng)操作參照說明書進(jìn)行；免疫酶中的溶菌酶（LZM）活性測(cè)定方法參照Ellis等［16］的方法。

1．4 計(jì)算公式

存活率（SR，%）＝100×終末尾數(shù)／初始尾數(shù)；

增重率（WGR，%）＝100×［末均重（g）－初均重（g）］／初均重（g）；

飼料系數(shù)（FCR）＝攝食飼料總重（g）／［末總重（g）－初總重（g）］；

特定生長(zhǎng)率（SGR，%／d）＝100×［ln末均重（g）－ln初均重（g）］／飼養(yǎng)天數(shù)（d）；

蛋白質(zhì)效率（PER，%）＝100×增重（g／尾）／

蛋白質(zhì)攝入量（g／尾）；

肥滿度（CF，%）＝100×體重（g）體長(zhǎng)（cm）3；

肝體比（HSI，%）＝100×

肝臟重（g）／體重（g）；

臟體比（VSI，%）＝100×內(nèi)臟團(tuán)重（g）／體重（g）。

1．5 統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）表示。用SPSS 17．0對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析（one?way ANOVA），當(dāng)有顯著差異（P＜0．05）時(shí)，進(jìn)行Duncan氏法多重比較。

2　結(jié) 果

2．1 飼料脂肪水平對(duì)斜帶石斑魚生長(zhǎng)性能和形態(tài)學(xué)指標(biāo)的影響

由表2可知，幼魚階段，SR隨著飼料脂肪水平的升高先上升后下降，以L3組最高，顯著高于L4和L5組（P＜0．05）；養(yǎng)成階段，SR不受飼料脂肪水平的影響（P＞0．05）。隨著飼料脂肪水平的升高，2個(gè)階段斜帶石斑魚的WGR、SGR和PER均呈上升后下降的趨勢(shì)，其中幼魚階段L3組的WGR、SGR顯著高于L1、L4和L5組（P＜0．05），PER顯著高于L1、L2和L5組（P＜0．05）；養(yǎng)成階段L3組的WGR、SGR顯著高于其他各組（P＜0．05），PER顯著高于L1、L4和L5組（P＜0．05）。2個(gè)階段斜帶石斑魚的FCR變化趨勢(shì)同PER相反，隨著飼料脂肪水平的升高呈先下降后升高的趨勢(shì)，具體表現(xiàn)為幼魚階段L3組顯著低于L1、L2 和L5組（P＜0．05），養(yǎng)成階段L3組顯著低于L1、L5組（P＜0．05）。以SGR為評(píng)價(jià)指標(biāo)，通過二次曲線模型擬合得出，幼魚階段、養(yǎng)成階段斜帶石斑魚對(duì)飼料中脂肪的需要量分別為11．73%（圖1）和12．57%（圖2）。分別以FCR和PER為評(píng)價(jià)指標(biāo)，則斜帶石斑魚對(duì)飼料中脂肪的需要量為：幼魚階段，11．84%（YFCR＝0．005 7X2＋0．135X＋2．031，R2＝0．842）、12．01%（YPER＝0．006 7X2＋0．161X＋0．771，R2＝0．813）；養(yǎng)成階段，11．98%（YFCR＝0．003 3X2＋0．079X＋1．648，R2＝0．881）、11．91%（YPER＝0．005 7X2＋0．136＋0．931，R2＝0．825）。

隨著飼料脂肪水平的升高，2個(gè)階段斜帶石斑魚的CF均逐漸上升，最高值出現(xiàn)在L3組，然后下降，幼魚階段表現(xiàn)為L(zhǎng)3、L4組顯著高于L1、L5組（P＜0．05），養(yǎng)成階段表現(xiàn)為L(zhǎng)3組顯著高于L1組（P＜0．05）；2個(gè)階段斜帶石斑魚的HSI逐漸上升，L5組顯著高于L1組（P＜0．05）；2個(gè)階段斜帶石斑魚的VSI呈先上升后下降的趨勢(shì)，幼魚階段最高值出現(xiàn)在L3組，養(yǎng)成階段最高值出現(xiàn)在L4組。

表2　飼料脂肪水平對(duì)斜帶石斑魚生長(zhǎng)性能和形態(tài)學(xué)指標(biāo)的影響Table 2 Effects of dietary lipid level on growth performance and morphological indexes of orange?spotted grouper

圖1　飼料脂肪水平與幼魚階段斜帶石斑魚特定生長(zhǎng)率的關(guān)系Fig．1 Relationship between dietary lipid level and SGR of orange?spotted grouper in juvenile stage

圖2　飼料脂肪水平與養(yǎng)成階段斜帶石斑魚特定生長(zhǎng)率的關(guān)系Fig．2 Relationship between dietary lipid level and SGR of orange?spotted grouper in grow out stage

2．2 飼料脂肪水平對(duì)斜帶石斑魚全魚及肌肉常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分的影響

由表3可知，隨著飼料脂肪水平的升高，2個(gè)階段全魚粗蛋白質(zhì)含量均逐漸下降，幼魚階段表現(xiàn)為L(zhǎng)1組顯著高于其他各組（P＜0．05），L2、L3組顯著高于L4、L5組（P＜0．05）；養(yǎng)成階段表現(xiàn)為L(zhǎng)1組顯著高于其他各組（P＜0．05），L2、L3、L4組顯著高于L5組（P＜0．05）。隨著飼料脂肪水平的升高，幼魚階段全魚粗脂肪含量逐漸上升，表現(xiàn)為L(zhǎng)5組顯著高于其他各組（P＜0．05），L2、L3、L4組顯著高于L1組（P＜0．05）；養(yǎng)成階段全魚粗脂肪含量升高后穩(wěn)定，表現(xiàn)為L(zhǎng)3、L4、L5組顯著高于L1、L2組（P＜0．05），L2組顯著高于L1組（P＜0．05）。全魚粗灰分含量，幼魚階段具體表現(xiàn)為L(zhǎng)1組顯著高于L2、L4、L5組（P＜0．05），L3組顯著高于L5組（P＜0．05）；養(yǎng)成階段具體表現(xiàn)為L(zhǎng)1組顯著高于L3、L4、L5組（P＜0．05）。2個(gè)階段全魚水分含量均不受飼料脂肪水平的顯著影響（P＞0．05）。

隨著飼料脂肪水平的升高，幼魚階段肌肉粗蛋白質(zhì)含量表現(xiàn)為L(zhǎng)1組顯著高于L2、L4、L5組（P＜0．05），L5組顯著高于L2、L3、L4組（P＜0．05），L2、L3組顯著高于L4組（P＜0．05）；養(yǎng)成階段肌肉粗蛋白質(zhì)含量表現(xiàn)為L(zhǎng)5組顯著高于L1、L2、L3組（P＜0．05）。隨著飼料脂肪水平的升高，2個(gè)階段全魚粗脂肪含量均逐漸上升，幼魚階段表現(xiàn)為L(zhǎng)5組顯著高于L1、L2、L3組（P＜0．05），L3、L4組顯著高于L1組（P＜0．05）；養(yǎng)成階段表現(xiàn)為L(zhǎng)5組顯著高于L1、L2組（P＜0．05）。幼魚階段肌肉粗灰分含量隨著飼料脂肪水平的升高呈逐漸升高的趨勢(shì)，L5組顯著高于L1、L2組（P＜0．05），但與L3、L4組差異不顯著（P＞0．05）；養(yǎng)成階段肌肉粗灰分含量隨著飼料脂肪水平的升高呈逐漸下降的趨勢(shì)，L1和L2組無顯著差異（P＞0．05），但均顯著高于L4、L5組（P＜0．05）。2個(gè)階段肌肉水分含量不受飼料脂肪水平的顯著影響（P＞0．05）。

表3　飼料脂肪水平對(duì)斜帶石斑魚全魚和肌肉常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分的影響Table 3 Effects of dietary lipid level on common nutritional components in whole body and muscle of orange?spotted grouper

2．3 飼料脂肪水平對(duì)斜帶石斑魚血漿生化指標(biāo)的影響

由表4可知，隨著飼料脂肪水平的升高，2個(gè)階段血漿總蛋白（TP）含量呈逐漸下降趨勢(shì)，均表現(xiàn)為L(zhǎng)1組顯著高于L4、L5組（P＜0．05）。幼魚階段血漿葡萄糖（GLU）含量表現(xiàn)為L(zhǎng)5組顯著高于其他4組（P＜0．05）；養(yǎng)成階段血漿GLU含量隨著飼料脂肪水平的升高先上升后穩(wěn)定，L4、L5組顯著高于L1組（P＜0．05）。2個(gè)階段血漿高密度脂蛋白（HDLC）含量隨著飼料脂肪水平的升高均呈逐漸升高趨勢(shì)，幼魚階段表現(xiàn)為L(zhǎng)1、L2組顯著低于L5組（P＜0．05）；養(yǎng)成階段表現(xiàn)為L(zhǎng)1、L2組顯著低于其他3組（P＜0．05），L3組顯著低于L4、L5組（P＜0．05）。2個(gè)階段血漿低密度脂蛋白（LD?LC）含量隨著飼料脂肪水平的升高均呈逐漸下降趨勢(shì)，幼魚階段表現(xiàn)為L(zhǎng)2組顯著高于L4、L5組（P＜0．05）；養(yǎng)成階段表現(xiàn)為L(zhǎng)1組顯著高于其他4組（P＜0．05），L2、L3和L4組顯著高于L5組（P＜0．05）。

數(shù)學(xué)模型擬合分析表明，幼魚和養(yǎng)成階段斜帶石斑魚的血漿甘油三酯（TG）和總膽固醇（CHOL）含量與飼料脂肪水平呈線性或曲線關(guān)系（幼魚階段：YTG＝0．065X＋1．230，R2＝0．850，YCHOL＝0．046X＋2．372，R2＝0．801；養(yǎng)成階段：YTG＝0．025X2－0．470X＋4．521，R2＝0．990，YCHOL＝0．132X＋2．086，R2＝0．916）。

表4　飼料脂肪水平對(duì)斜帶石斑魚血漿生化指標(biāo)的影響Table 4 Effects of dietary lipid level on plasma biochemical indices of orange?spotted grouper

2．4 飼料脂肪水平對(duì)斜帶石斑魚肝臟代謝酶活性的影響

由表5可知，隨著飼料脂肪水平的升高，2個(gè)階段肝臟HL、LPL和MDH活性均逐漸下降，而肝臟LDH活性則逐漸上升。其中，幼魚階段肝臟HL活性表現(xiàn)為L(zhǎng)1、L2組顯著高于其他3組（P＜0．05）；養(yǎng)成階段肝臟HL活性表現(xiàn)為L(zhǎng)1、L2、L3組顯著高于L4、L5組（P＜0．05）。幼魚階段肝臟LPL活性表現(xiàn)為L(zhǎng)1、L2組顯著高于其他3組（P＜ 0．05）；養(yǎng)成階段肝臟LPL活性表現(xiàn)為L(zhǎng)1組顯著高于L3、L4、L5組（P＜0．05）。幼魚階段L1組肝臟MDH活性顯著高于L4、L5組（P＜0．05）；養(yǎng)成階段L1組肝臟MDH活性顯著高于其他4組（P＜0．05），L2組顯著高于L3、L4、L5組（P＜0．05）。幼魚階段前4組肝臟LDH活性無顯著差異（P＞0．05），但顯著低于L5組（P＜0．05）；養(yǎng)成階段L1、L2組肝臟LDH活性與L3組無顯著差異（P＞0．05），但顯著低于L4、L5組（P＜0．05）。

表5　飼料脂肪水平對(duì)斜帶石斑魚肝臟代謝酶活性的影響Table 5 Effects of dietary lipid level on metabolism enzyme activities in liver of orange?spotted grouper

2．5 飼料脂肪水平對(duì)斜帶石斑魚肝臟免疫酶活性的影響

由表6可知，幼魚階段肝臟ACP活性各組之間均無顯著差異（P＞0．05）；養(yǎng)成階段肝臟ACP活性隨著飼料脂肪水平的升高逐漸下降，L1組顯著高于L3、L4、L5組（P＜0．05），L2、L3組顯著高于L5組（P＜0．05）。幼魚階段肝臟SOD活性表現(xiàn)為L(zhǎng)1、L2組顯著低于其他3組（P＜0．05）；養(yǎng)成階段肝臟SOD活性表現(xiàn)為L(zhǎng)1組顯著低于L3、L4、L5組（P＜0．05）。

數(shù)學(xué)模型擬合表明，幼魚和養(yǎng)成階段斜帶石斑魚肝臟AKP活性與飼料脂肪水平呈正相關(guān)關(guān)系（幼魚階段：YAKP＝0．702X＋5．364，R2＝0．893；養(yǎng)成階段：YAKP＝0．183X＋9．196，R2＝0．882）；幼魚和養(yǎng)成階段斜帶石斑魚肝臟LZM活性同樣與飼料脂肪水平呈正相關(guān)關(guān)系（幼魚階段：YLZM＝4．279X＋83．453，R2＝0．849；養(yǎng)成階段：YLZM＝5．497X＋115．144，R2＝0．837）。以肝臟SOD活性為評(píng)價(jià)指標(biāo)，幼魚和養(yǎng)成階段斜帶石斑魚對(duì)飼料中脂肪的需要量分別為16．57%（幼魚階段：YSOD＝0．101X2＋3．346X＋41．774，R2＝0．975）、14．74%（養(yǎng)成階段：YSOD＝0．290X2＋8．535X＋17．012，R2＝0．879）。

表6　飼料脂肪水平對(duì)斜帶石斑魚肝臟免疫酶活性的影響Table 6 Effects of dietary lipid level on immune enzyme activities in liver of orange?spotted grouper

2．6 飼料脂肪水平對(duì)斜帶石斑魚胃腸道消化酶活性的影響

由表7可知，隨著飼料脂肪水平的升高，2個(gè)階段斜帶石斑魚的胃腸道胃蛋白酶和淀粉酶活性逐漸下降，胃腸道脂肪酶活性逐漸上升。其中，幼魚階段L3、L4組胃蛋白酶活性顯著低于L1、L2組（P＜0．05），顯著高于L5組（P＜0．05）；養(yǎng)成階段L2、L3組胃蛋白酶活性顯著低于L1組（P＜0．05），顯著高于L4、L5組（P＜0．05）。幼魚階段L1組淀粉酶活性顯著高于L4、L5組（P＜0．05）；養(yǎng)成階段L1、L2組淀粉酶活性顯著高于L3、L4、L5組（P＜0．05），L1組還顯著高于L2組（P＜0．05）。幼魚階段脂肪酶活性表現(xiàn)為L(zhǎng)3、L4組顯著高于L1、L2組（P＜0．05），顯著低于L5組（P＜0．05）；養(yǎng)成階段脂肪酶活性表現(xiàn)為L(zhǎng)1、L2、L3組顯著低于L4、L5組（P＜0．05），L3組顯著高于L1組（P＜0．05），L5組顯著高于L4組（P＜0．05）。

3　討 論

紅姑魚（Sciaenops ocellatus）幼魚和吉富羅非魚（Oreochromis niloticus）幼魚SR隨著飼料脂肪水平的升高而下降，作者認(rèn)為飼料脂肪水平過高導(dǎo)致的肝功能損害是引起死亡的直接原因［17－18］。這與本試驗(yàn)中幼魚階段斜帶石斑魚得出的結(jié)果一致。有研究表明，飼料脂肪水平對(duì)1齡團(tuán)頭魴（Megalobrama amblycephala）（初重50．37 g）的SR無顯著影響［19］，與本試驗(yàn)養(yǎng)成階段斜帶石斑魚得出的結(jié)果類似，與上述幼魚結(jié)果不同的原因可能是隨著魚體重量的增加，對(duì)脂肪的需要量增加，需要量與飼料中較高的脂肪水平接近，或大體重的魚對(duì)脂肪的耐受力增強(qiáng)，因此飼料脂肪水平對(duì)SR的影響不顯著。

表7　飼料脂肪水平對(duì)斜帶石斑魚胃腸道消化酶活性的影響Table 7 Effects of dietary lipid level on gastrointestinal digestive enzyme activities of orange?spotted grouper

飼料蛋白質(zhì)水平相同時(shí)，在魚類飼料中適量添加脂肪可有更好的生長(zhǎng)表現(xiàn)，這一現(xiàn)象稱為“蛋白質(zhì)節(jié)約效應(yīng)”［20］。在本試驗(yàn)中，L2、L3組的WGR、SGR和PER均高于L1組，進(jìn)一步證明了這一點(diǎn)。斑點(diǎn)叉尾（Ictalurus punctatus）［21］、虹鱒（Oncorhynchus mykiss）［22］、白姑魚（Argyrosomus regius）［23］、石首魚（Atractoscion nobilis）［24］和黑鯛（Hephaestus fuliginosu）［25］也獲得了相同的試驗(yàn)結(jié)果。本試驗(yàn)中，隨著飼料脂肪水平的升高，L4、L5組的生長(zhǎng)性能開始下降，說明飼料中添加超過需要量的脂肪可導(dǎo)致魚類生長(zhǎng)性能的下降，在草魚（Ctenopharyngodon idella）［4］、許氏平（Sebastes schlegeli）［26］、齒鯛（Dentex dentex）［27］、異育銀鯽（Carassius auratus gibelio）和長(zhǎng)尾（Leiocassis longirostris gunther）［28］的試驗(yàn)中也有相同的結(jié)果。本試驗(yàn)中，隨著飼料脂肪水平的升高，PER呈先上升后降低的趨勢(shì)，與牙鲆（Paralichthys oliva?ceus）［20］、白姑魚［23］和紅鰭東方鲀（Takifugu ru?bripes）［29］的研究結(jié)果一致，可能是適當(dāng)提高飼料脂肪水平可增加飼料中可利用的能量，使蛋白質(zhì)分解供能部分降低，進(jìn)而提高了蛋白質(zhì)的沉積率。但也有研究表明PER與飼料脂肪水平呈一定的正相關(guān)［30－31］，出現(xiàn)該結(jié)果的原因可能是試驗(yàn)中選取的脂肪水平不高，未超過試驗(yàn)對(duì)象的脂肪需要量有關(guān)。以SGR、FCR和PER為評(píng)價(jià)指標(biāo)，2個(gè)階段斜帶石斑魚對(duì)飼料中脂肪的需要量均在11%～13%內(nèi)，所得到的結(jié)果接近，說明這3個(gè)指標(biāo)均可作為斜帶石斑魚脂肪需要量的判據(jù)；此外，從本試驗(yàn)看，幼魚階段斜帶石斑魚與養(yǎng)成階段斜帶石斑魚對(duì)飼料中脂肪的需要量接近。如果再進(jìn)行斜帶石斑魚不同養(yǎng)殖階段營(yíng)養(yǎng)需要研究時(shí)，可將養(yǎng)成階段的體重提高，以進(jìn)一步觀察不同生長(zhǎng)階段營(yíng)養(yǎng)需要參數(shù)的變化規(guī)律，以便更好的指導(dǎo)生產(chǎn)實(shí)踐。

魚類形態(tài)學(xué)指標(biāo)與飼料脂肪水平密切相關(guān)。研究表明，團(tuán)頭魴HSI隨飼料脂肪水平的升高而顯著升高［19］；黑線鱈（Melanogrammus aeglefi?nus）［32］和異育銀鯽［33］的VSI與飼料脂肪水平呈正相關(guān)；尖吻鱸（Lates calcarzfer）的HSI和VSI隨飼料脂肪水平的升高而升高［34］。此外，在寶石鱸（Scortum barcoo）［3］、梭魚（Chelon haematochei?lus）［30］、軍曹魚（Rachycentron canadum）［35］、藍(lán)鰭金槍魚（Thunnus orientalis）［36］、厚唇弱棘（Hep? haestus fuliginosus）［37］的研究中也有類似結(jié)果。在本試驗(yàn)中，斜帶石斑魚的HSI和VSI與飼料脂肪水平呈正相關(guān)，與上述研究的結(jié)果基本一致。出現(xiàn)該結(jié)果的原因可能是魚類缺乏皮下脂肪層，主要的脂肪蓄積部位是腹腔腸系膜和肝臟［38］，因此，當(dāng)飼料脂肪水平升高時(shí)，這2個(gè)組織中沉積大量的脂肪而導(dǎo)致HSI和VSI的上升。部分研究表明魚類的CF隨著飼料脂肪水平的升高呈先上升后下降的趨勢(shì)［3，39－40］，在本研究中2個(gè)階段斜帶石斑魚的CF變化趨勢(shì)與上述結(jié)果類似。然而，團(tuán)頭魴［41］、（Elopichthys bambusa）［42］、黑鯛［43］和錦鯉（Cyprinus caypio）［44］的試驗(yàn)結(jié)果則表明CF不受飼料脂肪水平的影響。CF受魚類體重和體長(zhǎng)共同影響，脂肪可促進(jìn)魚類的生長(zhǎng)，但是其體重和體長(zhǎng)的增長(zhǎng)速度不同；此外，魚種不同，其蓄積脂肪能力的不同也是CF結(jié)果不同的重要影響因素［38］。

隨著飼料脂肪水平的升高，斜帶石斑魚全魚和肌肉粗脂肪含量逐漸上升。在長(zhǎng)吻幼魚的研究中，其全魚粗脂肪含量隨著飼料脂肪水平的升高而增加［45］，這與本試驗(yàn)結(jié)果一致。異育銀鯽全魚粗脂肪含量與飼料脂肪水平呈正相關(guān)，水分含量則呈相反的趨勢(shì)［33］。團(tuán)頭魴［19］、軍曹魚［35］、黑線鱈［32］、尖吻鱸［34］、奧尼羅非魚［39］、雜交條紋鱸（Morone chrysops×M．saxatilis）［46］的試驗(yàn)結(jié)果也表明魚體脂肪含量與飼料脂肪水平呈正相關(guān)；本試驗(yàn)中飼料脂肪水平升高降低了魚體和肌肉中蛋白質(zhì)的比例，這與軍曹魚［35］、春鯉（Cyprinus longi?pectoralis）［47］和籃子魚（Siganus rivulatus）［48］的研究結(jié)果類似；而石首魚［24］、許氏平

［26］和大菱鲆（Psetta maxima）［49］的研究結(jié)果則表明沒有顯著影響。Shearer等［50］研究認(rèn)為魚類的體成分受內(nèi)源因素（規(guī)格、性別等）和外源因素（飼料、環(huán)境等）的共同影響，魚體粗蛋白質(zhì)和粗灰分含量與魚類的生長(zhǎng)階段（內(nèi)源因素）有關(guān)，而魚體粗脂肪含量主要受外源因素的影響。

準(zhǔn)確掌握魚類的血液生化指標(biāo)的變化規(guī)律有利于了解魚類健康狀況及對(duì)飼料營(yíng)養(yǎng)水平和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值進(jìn)行評(píng)估［51］。鏡鯉（Cyprinus specularis）血清TP、TG、CHOL和GLU含量隨著飼料脂肪水平的升高而升高［52］，與本試驗(yàn)結(jié)果一致；相似的研究還有吉富羅非魚［53］、大西洋鱈（Gadus morhua）［54］和胭脂魚（Myxocyprinus asiaticus）［55］。魚類血漿脂蛋白在肝臟脂肪轉(zhuǎn)運(yùn)中發(fā)揮著重要作用。脂蛋白與肝臟脂肪結(jié)合后隨血液運(yùn)出肝臟，從而使肝臟和血液中脂肪代謝維持平衡狀態(tài)［56］。在本試驗(yàn)中，隨著飼料脂肪水平的升高，血漿HDLC含量逐漸升高，LDLC含量逐漸下降；與奧尼羅非魚［39］研究結(jié)果相同，與厚唇弱棘

HL和LPL是魚類肝臟中參與脂肪降解的2種關(guān)鍵酶，HL作為配體促進(jìn)LDLC和乳糜微粒殘粒進(jìn)入肝細(xì)胞，并直接參與HDLC逆轉(zhuǎn)運(yùn)和HDLC殘粒的分解［58］。LPL能夠水解富含TG的脂蛋白，產(chǎn)生游離脂肪酸［59］。本試驗(yàn)中斜帶石斑魚肝臟HL和LPL活性隨著飼料脂肪水平升高而下降，說明飼料中脂肪水平過高使得魚體脂肪分解代謝減弱。肝臟MDH活性的高低影響體內(nèi)脂肪的合成［60］。在本試驗(yàn)中，肝臟MDH活性逐漸下降，這與胭脂魚［55］和塞內(nèi)加爾鰨（Solea senega?lensis）［61］的研究結(jié)果一致，說明飼料脂肪水平的升高在一定程度上抑制了斜帶石斑魚體內(nèi)脂肪的合成代謝。

脂肪所提供的必需脂肪酸對(duì)于維持機(jī)體免疫力有重要作用。對(duì)點(diǎn)帶石斑魚的研究結(jié)果表明，血漿LZM活性同飼料脂肪水平的升高呈正相關(guān)［9］；奧尼羅非魚［39］和吉富羅非魚［53］血液中AKP活性均與飼料脂肪水平呈正相關(guān)；梭魚肝臟SOD活性隨著飼料脂肪水平的升高呈先上升后下降的趨勢(shì)［62］；鏡鯉肝臟SOD和LZM活性隨飼料脂肪水平的升高先升高后降低［63］。上述研究結(jié)果均與本試驗(yàn)結(jié)果類似。以肝臟SOD活性為判據(jù)時(shí)，幼魚和養(yǎng)成階段斜帶石斑魚對(duì)飼料中脂肪的需要量分別為16．57%和14．74%，結(jié)合生長(zhǎng)性能指標(biāo)表明，當(dāng)飼料脂肪水平滿足斜帶石斑魚最佳生長(zhǎng)時(shí)，其免疫力并不是最高，滿足最佳免疫力的飼料脂肪含量高于其生長(zhǎng)對(duì)脂肪的需要。

魚類（特別是無胃魚類）消化酶活性的高低可以反映其對(duì)飼料的消化能力。飼料成分對(duì)魚類消化酶活性的影響具有復(fù)雜性和效應(yīng)的多樣性［64］。飼料脂肪水平對(duì)消化酶活性影響的研究結(jié)果［65－67］差異較大。消化酶為底物誘導(dǎo)酶，在本試驗(yàn)中，隨著飼料脂肪水平的升高，2個(gè)階段斜帶石斑魚腸道脂肪酶活性均逐漸上升，進(jìn)一步證明了這一結(jié)論。對(duì)厚唇弱棘

［40］和方斑東風(fēng)螺（Babylonia areo? late）［66］的研究也得到了類似的結(jié)果。隨著飼料脂肪水平的升高，胭脂魚腸道蛋白酶活性逐漸降低，淀粉酶活性先降低后穩(wěn)定［55］，與本試驗(yàn)結(jié)果類似，可能是當(dāng)飼料脂肪水平升高后，誘導(dǎo)了脂肪酶的分泌而影響了蛋白酶的分泌，飼料中碳水化合物水平逐漸降低，淀粉酶活性也隨底物的減少而降低。

4　結(jié) 論

在本試驗(yàn)條件下，飼料中適宜水平的脂肪可以改善幼魚和養(yǎng)成階段斜帶石斑魚的生長(zhǎng)性能，且對(duì)體成分、生化指標(biāo)和消化代謝酶活性有一定影響；以SGR、FCR和PER為評(píng)價(jià)指標(biāo)，幼魚和養(yǎng)成階段的斜帶石斑魚對(duì)飼料中脂肪的需要量均在11%～13%內(nèi)。

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（編輯 菅景穎）

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Dietary Lipid Requirements of Orange?Spotted Grouper（Epinephelus coioides）in Juvenile and Grow Out Stages

DONG Xiaohui YANG Junjiang TAN Beiping?YANG Qihui CHI Shuyan LIU Hongyu
（Laboratory of Aquatic Animal Nutrition and Feed，F(xiàn)isheries College，Guangdong Ocean University，Zhanjiang 524025，China）

?Corresponding author，professor，E?mail：bptan＠126．com

Abstract：The present study was performed to investigate the dietary lipid requirements of grouper in two growth stages（juvenile and grow out stages）．Five isonitrogenous diets were formulated with five lipid levels （7．07%，9．92%，12．92%，15．95%and 19．04%），which were regulated by fish oil．Fish with the body weight of 9．1 g（juvenile stage）were fed the 5 diets for 8 weeks，and fish with the body weight of 102．6 g （grow out stage）were fed the 5 diets for 10 weeks．In the same growth stage，each diet had 3 replicates，and each replicate in juvenile and grow out stages had 25 and 20 fish，respectively．The results showed as follows：1）with the dietary lipid level increasing，the weight gain rate（WGR），specific growth rate（SGR），protein efficiency rate（PER），condition factor（CF）and viscerasomatic index（VSI）of fish in juvenile and grow out stages were firstly increased and then decreased，while the feed conversion ratio（FCR）showed an opposite trend，and all of them obtained the extreme when dietary lipid level was 12．92%．2）With the dietary lipid lev?el increasing，the content of crude protein in whole body of fish in juvenile and grow out stages was gradually decreased，the content of crude lipid in whole body and muscle was gradually increased，and the content of moisture in whole body and muscle had no significant difference（P＞0．05），while the other indices in whole body and muscle had no regular changes．3）With the dietary lipid level increasing，the contents of plasma total protein（TP）and low density lipoprotein（LDLC）of fish in juvenile and grow out stages were gradually de?creased，while the content of plasma high density lipoprotein（HDLC）was gradually increased．The contents of plasma triglyceride（TG）and total cholesterol（CHOL）of fish in juvenile and grow out stages had linear or curvilinear relationships with dietary lipid level，repectively．4）With the dietary lipid level increasing，the ac?tivities of liver hepaticlipase（HL），lipoprotein lipase（LPL）and malic dehydrogenase（MDH）of fish in ju?venile and grow out stages were gradually decreased，while the content of lactate dehydrogenase（LDH）was gradually increased．5）With the dietary lipid level increasing，the activity of liver acid phosphatase（ACP）of fish in juvenile stage had no significant change（P＞0．05），while the activity of liver ACP of fish in grow out stage was gradually decreased，and the activity of liver superoxide dismutase（SOD）of fish in juvenile and grow out stages was firstly increased and then decreased．The activities of liver alkaline phosphatase（AKP）and lysozyme（LZM）of fish in juvenile and grow out stages exhibited positive correlations with dietary lipid level，respectively．6）With the dietary lipid level increasing，the activities of gastrointestinal pepsin and amyl?ase of fish in juvenile and grow out stages were gradually decreased，while the activity of gastrointestinal lipase was gradually increased．In conclusion，suitable dietary lipid level can improve the growth performance and af?fect the body composition，biochemical indices and digestive and metabolism enzyme activities of orange?spot?ted grouper in juvenile and grow out stages．Using SGR，F(xiàn)CR and PER as evaluation indices，the dietary lipid requirements of orange?spotted grouper in juvenile and grow out stages are all in the range of 11%to 13%．［Chinese Journal of Animal Nutrition，2015，27（1）：133?146］

Key words：orange?spotted grouper（Epinephelus coioides）；lipid；growth performance；biochemical indices；digestive enzyme

通信作者：?譚北平，教授，博士生導(dǎo)師，E?mail：bptan＠126．com

作者簡(jiǎn)介：董曉慧（1970—），女，黑龍江穆棱人，教授，博士，研究方向?yàn)樗a(chǎn)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料。E?mail：dongxiaohui2003＠163．com

基金項(xiàng)目：公益性行業(yè)（農(nóng)業(yè)）科研專項(xiàng)（201003020）；國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃（2014CB138600）；廣東省珠江學(xué)者資助項(xiàng)目（2011）

收稿日期：2014－07－21

doi：10．3969／j．issn．1006?267x．2015．01．017

文章編號(hào)：1006?267X（2015）01?0133?14

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

中圖分類號(hào)：S963