聯(lián)用CD-CIK細(xì)胞和養(yǎng)肝解毒丸治療丙型肝炎的效果研究

李 楊

（山東省泰安市中醫(yī)醫(yī)院肝病科 山東 泰安 271000）

丙型肝炎是丙型病毒性肝炎的簡(jiǎn)稱，多由丙型肝炎病毒感染所致，其主要的傳播途徑是輸血、針刺及吸毒，臨床治療的效果效差。在本次研究中，為了探討分析聯(lián)用CD-CIK細(xì)胞和養(yǎng)肝解毒丸治療丙型肝炎的臨床效果，筆者進(jìn)行了以下研究：

1 資料與方法

1.1 臨床資料

本文的研究對(duì)象是近年來(lái)我院收治的160例丙型肝炎患者，我們將其隨機(jī)分為DC-CIK細(xì)胞組（40例）、養(yǎng)肝解毒丸組（40例）、DC-CIK細(xì)胞聯(lián)合養(yǎng)肝解毒丸組（40例）及長(zhǎng)效干擾素組（40例），這4組患者的臨床表現(xiàn)及各項(xiàng)檢查結(jié)果均符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)、中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病與寄生蟲(chóng)病學(xué)分會(huì)在《丙型肝炎防治指南》中制定的關(guān)于丙型肝炎的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)，并且這4組患者在年齡、性別、體重等一般資料方面的差異均不顯著（P＞0.05），不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。

1.2 中醫(yī)診斷及辨證標(biāo)準(zhǔn)

這160例患者的臨床癥狀均符合中國(guó)中醫(yī)藥學(xué)會(huì)在《病毒性肝炎中醫(yī)辨證標(biāo)準(zhǔn)》中制定的關(guān)于肝腎陰虛[1]的證候診斷標(biāo)準(zhǔn)，均伴有神疲乏力、口咽干燥、脅肋隱痛、腰膝酸軟、腹脹、皮膚存在蛛絲紋縷、面色晦暗等癥狀，舌質(zhì)紅、少苔，脈弦細(xì)、弦緩、弦沉或弦澀。

1.3 方法

使用DC-CIK細(xì)胞為DC-CIK細(xì)胞組患者進(jìn)行治療，使用養(yǎng)肝解毒丸為養(yǎng)肝解毒丸組患者進(jìn)行治療，聯(lián)用DCCIK細(xì)胞和養(yǎng)肝解毒丸為DC-CIK細(xì)胞聯(lián)合養(yǎng)肝解毒丸組患者進(jìn)行治療，使用長(zhǎng)效干擾素為長(zhǎng)效干擾素組患者進(jìn)行治療，然后觀察對(duì)比這4組患者的臨床療效，并將對(duì)比的結(jié)果及4組患者的臨床資料進(jìn)行回顧性的分析。DC-CIk細(xì)胞的制備方法及用法是：分離患者血液樣本中的外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC），在無(wú)菌及嚴(yán)格監(jiān)控的條件下進(jìn)行細(xì)胞誘導(dǎo)和培養(yǎng)，獲得DC-CIK細(xì)胞，然后采用靜脈滴注的方式將增殖數(shù)百倍的DC-CIK細(xì)胞分3次回輸至患者的體內(nèi)，每次滴注的間隔時(shí)間為1～2天。此后，每個(gè)月培養(yǎng)DCCIk細(xì)胞1次，分3次回輸至患者的體內(nèi)，連續(xù)治療6個(gè)月為1個(gè)療程。養(yǎng)肝解毒丸（由泰安市中醫(yī)醫(yī)院自制，魯藥制字為Z0920030155）的用法及用量是：口服，9g/次，3次/日，連續(xù)服用6個(gè)月為1個(gè)療程。長(zhǎng)效干擾素的用法及用量是：①使用180ug的聚乙二醇干擾素α-2a為患者進(jìn)行皮下注射，每周注射1次，或使用1.5ug/kg體重的聚乙二醇干擾素α-2b為患者進(jìn)行皮下注射，每周注射1次。②讓患者每日口服1000mg的利巴韋林片，連續(xù)服用6個(gè)月為1個(gè)療程。

1.4 觀察指標(biāo)

①臨床療效。②肝功能指標(biāo)。③安全性。

1.5 臨床療效判定標(biāo)準(zhǔn)

肝腎陰虛癥狀、體征記分，癥狀體征內(nèi)容以病例選擇納入標(biāo)準(zhǔn)為準(zhǔn)，記分（參照中國(guó)中醫(yī)藥學(xué)會(huì)內(nèi)科肝病專業(yè)委員會(huì)，病毒性肝炎中醫(yī)辨證標(biāo)準(zhǔn)擬定）。西醫(yī)標(biāo)準(zhǔn)時(shí)：①治愈：HCV抗體陰轉(zhuǎn)，HCV-RNA＜103copy/ml，隨訪48周患者未復(fù)發(fā)。②顯效：HCV抗體未陰轉(zhuǎn)，HCV-RNA＜103copy/ml。③有效：HCV抗體未陰轉(zhuǎn)，HCV-RNA下降至103copy/ml-106copy/ml。④無(wú)效：HCV抗體未陰轉(zhuǎn)，HCV-RNA未下降或升高。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS13.0 for windows統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)本次研究所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，正態(tài)分布計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（X±S）表示，采用t檢驗(yàn)，非正態(tài)分布計(jì)數(shù)資料采用例數(shù)或百分率表示，采用X2檢驗(yàn)，當(dāng)P＜0.05時(shí)，視為差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 4組患者臨床療效的比較

DC-CIk細(xì)胞聯(lián)合養(yǎng)肝解毒丸組患者治療的總有效率為82.5%，DC-CIk細(xì)胞組患者治療的總有效率為75.0%，養(yǎng)肝解毒丸組患者治療的總有效率為32.5%，長(zhǎng)效干擾素組患者治療的總有效率為40.0%。DC-CIk細(xì)胞聯(lián)合養(yǎng)肝解毒丸組患者的臨床療效明顯優(yōu)于其他三組患者，差異顯著（P＜0.05），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。詳情見(jiàn)表1。

表1 4組患者臨床療效的比較

2.2 4組患者治療前后各項(xiàng)肝功能指標(biāo)的比較

在治療前，4組患者各項(xiàng)肝功能指標(biāo)之間的差異均不顯著（P＞0.05），不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的治療，這4組患者的各項(xiàng)肝功能指標(biāo)較治療前均有明顯的改善，且DC-CIk細(xì)胞聯(lián)合養(yǎng)肝解毒丸組患者各項(xiàng)肝功能指標(biāo)的改善程度更為明顯，差異顯著（P＜0.05），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。詳情見(jiàn)表2。

表2 4組患者治療前后各項(xiàng)肝功能指標(biāo)的比較

2.3 安全性分析

DC-CIk細(xì)胞聯(lián)合養(yǎng)肝解毒丸組患者、DC-CIk細(xì)胞組患者及養(yǎng)肝解毒丸組患者的甲狀腺功能、血糖水平均正常，而長(zhǎng)效干擾素組患者中有1例患者出現(xiàn)了血糖升高的情況、有2例患者出現(xiàn)了甲狀腺功能亢進(jìn)的情況。

3 討論

3.1 DC-CIK細(xì)胞對(duì)丙型肝炎的治療機(jī)制

DC-CIK療法是指將DC-CIK細(xì)胞（即DC細(xì)胞和CIK細(xì)胞）在人體外進(jìn)行培養(yǎng)，然后回輸給患者的一種治療方法。嚴(yán)格地說(shuō)，該方法最終的治療效應(yīng)細(xì)胞是經(jīng)DC體外活化的CIK細(xì)胞。多項(xiàng)研究表明，DC細(xì)胞與CIK細(xì)胞具有協(xié)同作用，將二者共同孵育后，DC細(xì)胞表面的刺激分子的表達(dá)及抗原遞呈能力均明顯提高，而CIK細(xì)胞的增殖能力和體內(nèi)外細(xì)胞毒活性也顯著提高，因此，與單獨(dú)的CIK細(xì)胞相比，DC-CIK細(xì)胞的治療效果更佳。CIK細(xì)胞治療屬于自體免疫細(xì)胞治療范疇，回輸后無(wú)排斥反應(yīng)；此外，經(jīng)過(guò)體外培養(yǎng)的CIK細(xì)胞對(duì)病毒感染細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞具有很強(qiáng)的細(xì)胞毒作用，還可以通過(guò)分泌大量的細(xì)胞因子，如IL-2、IL-6以及IFN-r等調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫反應(yīng)。早期CIK細(xì)胞主要應(yīng)用于臨床上各種腫瘤的治療，包括肝癌、肺癌、淋巴瘤等[2-4]。近期研究表明CIK細(xì)胞對(duì)慢性乙型肝炎、慢性丙肝都具有良好的療效[5-6]。據(jù)統(tǒng)計(jì)，目前全世界約有1.7億人感染HCV。70%的HCV感染者會(huì)轉(zhuǎn)為慢性感染，并在長(zhǎng)期的慢性炎癥作用下產(chǎn)生肝纖維化，最終形成肝硬化甚至肝癌[7]。這主要由于HCV作為一種RNA病毒，在復(fù)制過(guò)程中經(jīng)常發(fā)生錯(cuò)誤的“拼寫檢查”。與DNA病毒相比較，只有少數(shù)RNA病毒可以被完全無(wú)誤地讀取和復(fù)制。所以，HCV的變異速度遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于HBV，這就使得HCV可以輕而易舉地逃避免疫系統(tǒng)“追擊”，并在與機(jī)體長(zhǎng)期 －的相互作用中導(dǎo)致免疫系統(tǒng)的耗竭（exhausted）或者失能（anergy）。研究表明，HCV在感染早期可以迅速?gòu)?fù)制，產(chǎn)生的結(jié)構(gòu)蛋白能夠抑制宿主DC和NK細(xì)胞的活化，無(wú)法產(chǎn)生足夠強(qiáng)度的天然免疫反應(yīng)[8-10]，進(jìn)而影響到適應(yīng)性免疫的應(yīng)答。另外，HCV的高變異性可以迅速地逃避機(jī)體產(chǎn)生的特異性免疫應(yīng)答，使得機(jī)體針對(duì)病毒的免疫反應(yīng)無(wú)法被充分調(diào)動(dòng)[11-12]。所以尋找可以重新激活免疫系統(tǒng)的方法顯得尤為重要。CIK細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)方案可以提高培養(yǎng)體系中CD3+CD8+、CD3+CD56+細(xì)胞的比例，增強(qiáng)其分泌IFN-r和脫顆粒（CD107a）的能力。CD3+CD8+以及CD3+CD56+細(xì)胞具有很強(qiáng)的抗病毒作用，這主要通過(guò)細(xì)胞裂解和非裂解兩個(gè)途徑。對(duì)于細(xì)胞裂解途徑，效應(yīng)細(xì)胞通過(guò)分泌各種顆粒酶，穿孔素直接殺傷、裂解靶細(xì)胞，從而破壞HCV感染、復(fù)制的場(chǎng)所；而在非裂解途徑中，效應(yīng)細(xì)胞分泌的IFN-r可以作用于被感染的肝細(xì)胞，通過(guò)一系 列細(xì)胞內(nèi)信號(hào)途徑，抑制HCV在肝細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制過(guò)程[13]。另外，CIK技術(shù)通過(guò)CD3+CD8+以及CD3+CD56+細(xì)胞分泌大量促炎因子，包括IFN-r、IL-6，還具有重新調(diào)動(dòng)免疫學(xué)反應(yīng)的作用。

3.2 養(yǎng)肝解毒丸的組方意義

養(yǎng)肝解毒丸以扶正、解毒、化瘀為配伍原則，所使用的藥物主要有熟地、敗醬草、山萸肉、山藥、赤靈芝、丹皮、夏枯草、苡米、砂仁等，具有滋補(bǔ)肝腎、祛毒化瘀的功效，其中熟地、敗醬草為君藥，具有補(bǔ)肝腎、解毒邪的功效；山萸肉、山藥、赤靈芝、夏枯草為臣藥，具有助君藥滋補(bǔ)肝腎、扶正祛毒的功效；丹皮、苡米為佐藥，具有助君藥清血中虛熱、引藥入血、滋補(bǔ)肝腎、活血化瘀的功效；砂仁為使藥，具有免除滋補(bǔ)藥的副作用（妨害消化、減低食欲）、引熟地歸腎的功效，可謂一舉兩得。

本次研究結(jié)果顯示，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的治療，這4組患者的各項(xiàng)肝功能指標(biāo)較治療前均有明顯的改善，且DC-CIk細(xì)胞聯(lián)合養(yǎng)肝解毒丸組患者各項(xiàng)肝功能指標(biāo)的改善程度更為明顯，差異顯著（P＜0.05），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。DC-CIk細(xì)胞聯(lián)合養(yǎng)肝解毒丸組患者的臨床療效明顯優(yōu)于其他三組患者，差異顯著（P＜0.05），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。DC-CIk細(xì)胞聯(lián)合養(yǎng)肝解毒丸組患者、DC-CIk細(xì)胞組患者及養(yǎng)肝解毒丸組患者的甲狀腺功能、血糖水平均正常，而長(zhǎng)效干擾素組患者中有1例患者出現(xiàn)了血糖升高的情況、有2例患者出現(xiàn)了甲狀腺功能亢進(jìn)的情況。

綜上所述，聯(lián)用CD-CIK細(xì)胞和養(yǎng)肝解毒丸治療丙型肝炎的臨床效果顯著，值得在臨床上推廣應(yīng)用。

[1] 中國(guó)中醫(yī)藥學(xué)會(huì)內(nèi)科肝病專業(yè)委員會(huì)《病毒性肝炎中醫(yī)辨證標(biāo)準(zhǔn)》.中醫(yī)雜志，1992，33(5)：39-40.

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