丹紅注射液對兔急性心肌梗死的影響

郝光++沈啟明++王馨+馬麗紅++王增武

[摘要]目的探討丹紅注射液對兔急性心肌梗死的影響。方法結(jié)扎日本大耳兔冠狀動(dòng)脈左前降支建立急性心肌梗死模型，制模成功后隨機(jī)分為模型組，丹紅注射液低、中、高劑量組及果糖二磷酸鈉組，另設(shè)假手術(shù)組。治療兩周，期間測量不同時(shí)間段心肌酶。兩周后取心臟進(jìn)行梗死面積測定。結(jié)果各組間心肌酶水平（谷草轉(zhuǎn)氨酶、肌酸激酶同工酶及乳酸脫氫酶）及心肌梗死面積差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但丹紅中劑量組（2ml/kg）心肌酶水平及心肌梗死面積較模型組都有降低或縮小趨勢。結(jié)論丹紅注射液對兔心肌梗死可能有一定的保護(hù)作用，但是還需要實(shí)驗(yàn)進(jìn)行證實(shí)。

[關(guān)鍵詞]丹紅注射液；急性心肌梗死；日本大耳兔

中圖分類號(hào)：R544.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1009-816X（2015）05-0369-03

急性心肌梗死（acute myocardial infarCtion，AMI）是在冠狀動(dòng)脈粥樣硬化基礎(chǔ)上突然出現(xiàn)斑塊破裂、血栓形成或血管痙攣而致血管性閉塞，相應(yīng)血管所支配心肌出現(xiàn)持久而嚴(yán)重的急性缺血壞死。AMI在中醫(yī)屬于“胸痹”或“真心痛”范疇。丹紅注射液是把中藥丹參、紅花按科學(xué)方法提取的復(fù)方制劑。有研究表明丹參主要成分丹參酮ⅡA具有抗動(dòng)脈粥樣硬化、縮小心肌梗死面積、抗氧化自由基、拮抗鈣離子、減輕心肌肥厚、改善血管內(nèi)皮功能等作用；紅花的主要提取物紅花苷、紅花胺、紅花黃素等，具有擴(kuò)張血管增加冠狀動(dòng)脈血流量、抗氧化自由基作用、降低心肌酶水平減小梗死范圍等作用。丹紅注射液治療冠心病具有較理想的療效，其作用機(jī)理可能是多方面的，研究發(fā)現(xiàn)丹紅注射液可明顯改善微循環(huán)和血液粘滯度，阻止血栓形成和促進(jìn)血栓溶解；還可以有效地抑制Adenosine diphos-phate（ADP）誘導(dǎo)的血小板凝聚、血小板TXA2合成和內(nèi)皮素等縮血管物質(zhì)的釋放，促進(jìn)纖維蛋白溶解酶的產(chǎn)生。迄今為止，國內(nèi)有關(guān)丹紅注射液治療急性心肌梗死的動(dòng)物研究非常有限，對作用機(jī)制進(jìn)行研究相對更少。本研究擬通過建立兔急性心肌梗死模型，觀察不同劑量丹紅注射液對心肌梗死兔的影響，同時(shí)為今后動(dòng)物研究提供一定的參考依據(jù)。

1.材料與方法

1.1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和儀器：實(shí)驗(yàn)用清潔級健康日本大耳白兔（阜外心血管病醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供），共48只，雌雄不限，平均體重（2.4±0.4）千克。丹紅注射液由步長集團(tuán)提供，氯化硝基四氮唑藍(lán)購自南京卓爾生化技術(shù)有限公司，天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)氨（aspar-tateaminotransf erase，AST）、肌酸激酶同工酶（creatine ki-nase isoenzvme，CK-MB）、乳酸脫氫酶（laCtate dehydroge-nase，LDH）由阜外醫(yī)院化驗(yàn)室進(jìn)行檢測，心肌切片由病理切片全景掃描系統(tǒng)LEICASCN400掃描并分析（中國科學(xué)院生物物理研究所）。

1.2.方法：

1.2.1.動(dòng)物處理：兔固定于手術(shù)臺(tái)上，前胸手術(shù)部位剪毛，常規(guī)碘酒、乙醇消毒，用氯胺酮全麻后，沿胸骨左緣2-4肋間切開皮膚。分離皮下組織暴露肋骨，以開胸器撐開，暴露心臟。剪開心包，用眼科小圓針帶7號(hào)手術(shù)線在前降支近根部心肌內(nèi)穿過，然后結(jié)扎。電生理記錄儀上顯示ST段抬高O.lmV為制模成功。假手術(shù)組只穿線不結(jié)扎。制模成功后關(guān)閉胸腔、縫合。術(shù)后給與耐樂品肋間神經(jīng)封閉止痛，術(shù)后前3天給與青霉素常規(guī)抗感染治療。之后14天按分組情況每天進(jìn)行腹腔給藥。

1.2.2.動(dòng)物分組和給藥：將兔子隨機(jī)分成6組：假手術(shù)組，模型組，丹紅注射液低、中、高劑量組，果糖二磷酸鈉組。假手術(shù)組和模型組分別給予2ml/kg生理鹽水腹腔注射，丹紅注射液低、中、高劑量組分別按0.4mI/kg、2ml/kg、4ml/kg：給予丹紅注射液腹腔注射，果糖陽性對照組給予2.8mg/kg糖注射液腹腔注射。每日給藥1次，連續(xù)給14天。

1.2.3.標(biāo)本處理：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物于術(shù)前和術(shù)后1d、2d、3d和14d經(jīng)耳緣靜脈采血1-2ml，3小時(shí)內(nèi)送檢，測定AST、CK-MB和LDH。術(shù)后2周處死動(dòng)物，分離心臟并去除周圍脂肪，0.9%氯化鈉注射液沖洗后，垂直于心臟縱軸方向自心底向心尖將心臟均勻切成6份。即刻進(jìn)行氯化三苯四氮唑Triphenyl Tetrazolium Chloride，TTc）染色，福爾馬林固定后進(jìn)行石蠟包埋。制作切片后，采用病理切片全景掃描系統(tǒng)LEICASCN400掃描切片并測定心肌梗死面積。

1.3.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：使用SAS9.2軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，連續(xù)資料使用（x±s）表示，采用重復(fù)測量方差分析，方差分析及SNK-q檢驗(yàn)進(jìn)行分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1.不同組間AST檢測值的比較：各項(xiàng)生化指標(biāo)使用方差分析發(fā)現(xiàn)，同一時(shí)點(diǎn)各組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表1。但是從絕對值來看，丹紅中劑量組和果糖組在第3天及第14天時(shí)，AST和CK-MB的水平較其它組相對較低。

2.4.不同組間心肌梗死面積的比較：病理標(biāo)本采用最大梗死面積進(jìn)行分析，各組間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。丹紅中劑量組的心肌梗死面積最小，果糖組次之。

3.討論

血清AST、LDH、CK及CK-MB等心肌酶主要來源于心、肝、腎、肺及骨骼肌等，血清酶活性增高可能是一種或多種組織或器官受損的結(jié)果。血清AST、CK-MB、CK和LDH活性水平可反映心肌梗死程度，而且相對于CK而言，CK-MB更敏感。故本研究選取AST、CK-MB、 LDH為觀察指標(biāo)。

AST廣泛存在于人體各組織，心肌組織含量豐富，由于AST不存在組織特異性，且敏感性不高，故單純的AST升高不能診斷為AMI。乳酸脫氫酶是體內(nèi)能量代謝過程中的一個(gè)重要的酶，此酶幾乎存在于所有組織中。組織中的LDH的活力比血清中高得多，所以當(dāng)少量組織壞死時(shí)，該酶即釋放入血而使其在血液中的活性升高，即只有在細(xì)胞受損時(shí)才可能大量溢出，LDH水平增加可反映細(xì)胞膜的損傷。CK是心肌中重要的能量調(diào)節(jié)酶，是有M和B兩個(gè)亞基組成的二聚體。CK-MB作為其中一種同工酶臨床上用于較早期診斷AMI，估計(jì)梗死范圍大小。本研究發(fā)現(xiàn)中劑量丹紅組和果糖組的LDH和CK-MB水平第3天及第14時(shí)較其它組明顯為低，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能是由于樣本量較少造成的。

動(dòng)物及臨床研究發(fā)現(xiàn)丹紅注射液能顯著降低心肌酶活性，明顯縮小心肌梗死面積，對心肌梗死具有保護(hù)作用。李惠民對82例不穩(wěn)定心絞痛患者的研究發(fā)現(xiàn)，在常規(guī)治療下丹紅注射液能明顯提高不穩(wěn)定心絞痛的療效，并且有較小的不良反應(yīng)。劉愛國等對117例AMI患者的研究發(fā)現(xiàn)，丹紅注射液能改善AMI患者的心功能，抑制AMI后的心肌重構(gòu)。目前丹紅注射制劑已廣泛應(yīng)用于臨床AMI的治療，在常規(guī)治療基礎(chǔ)上，丹紅注射液能改善患者缺血癥狀，具有較理想的療效。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與模型組相比，盡管沒有發(fā)現(xiàn)丹紅注射液及果糖組心肌酶的降低及心肌梗死面積的減小具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但是結(jié)果總體上呈現(xiàn)隨著劑量上升，梗死面積下降趨勢，中度劑量丹紅注射液組和果糖組的治療效果最好，其組內(nèi)的大耳兔心肌酶較其它組有降低的趨勢，同樣心肌梗死面積在這兩組內(nèi)減小也最為明顯。以上結(jié)果說明適當(dāng)劑量的丹紅注射液對心肌梗死可能有改善作用，此外也證明果糖同樣有與中等劑量丹紅注射液相當(dāng)?shù)男Ч?。所以統(tǒng)計(jì)學(xué)的沒有差異一方面可能是由于樣本量不足造成的，另一方面可能由于丹紅實(shí)驗(yàn)劑量選擇不合適導(dǎo)致的，所以今后類似研究建議以2ml/kg為基礎(chǔ)選擇更為合適的劑量，以期達(dá)到試驗(yàn)最佳的效果。另外本實(shí)驗(yàn)在不同時(shí)點(diǎn)心肌酶水平波動(dòng)較大，甚至在14天的時(shí)候心肌酶的水平還是處于較高的水平，這可能和實(shí)驗(yàn)期間每天腹腔注射給藥，或者在抽血過程中對兔子肌肉組織損傷有關(guān)。

綜上所述，丹紅注射液對心肌梗死可能具有一定的保護(hù)作用，且從絕對值來看，中度劑量的丹紅注射液對心肌的保護(hù)作用可能較其它劑量及果糖組為好，但是以上結(jié)論還需要進(jìn)一步細(xì)分丹紅注射液實(shí)驗(yàn)劑量實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。endprint