棉花中脫葉劑哈威達檢測方法研究

孫近　晏新程　李丹　曾蓉

摘要：以乙腈為提取液，通過超聲波輔助萃取，離心凈化，C18柱為分析柱，乙腈與水溶液為流動相，在205nm的檢測波長下，用高效液相色譜法定量測定棉花中哈威達殘留量的方法。檢測結果表明，該方法靈敏度高、準確性好，檢出限為0.033mg/kg，回收率在98.2%～108.3%，相對標準偏差（RSD）1.68%～4.08%。本研究不僅建立了簡便、快速、準確的棉花中哈威達殘留量的檢測方法，同時對該方法的準確度和精密度等進行了較為全面的評價，為制定國家棉花中哈威達殘留量的檢測方法標準提供了依據(jù)，打下了基礎。

關鍵詞：哈威達；殘留；棉花；高效液相色譜

作為紡織品的主要原材料，棉花在紡織品中起著支柱的作用。目前，棉花生產(chǎn)中農(nóng)藥的使用必不可少。哈威達作為棉花生產(chǎn)中一種有效的脫葉劑，能促進棉葉脫落，提高機械采收效率并降低籽棉含雜率[1]，其與乙烯利一起廣泛應用于各國棉田。

哈威達，英文名dimethipin [2]，別名噻節(jié)因，落長靈，是一種植物生長調(diào)節(jié)劑，是目前各國應用的一種脫葉劑。哈威達通過殺傷或殺死植物的綠色組織，同時刺激傷害乙烯的產(chǎn)生，誘導棉鈴開裂和葉柄離層的形成[1]，從而起到催熟和脫葉作用。其應用于棉花脫葉時間偏晚，因此可能在棉花中殘留。該化合物比較穩(wěn)定不易分解，哈威達對人畜有一定毒性。目前國內(nèi)還沒有成熟的棉花中脫葉劑哈威達殘留量的檢測方法，更缺少對檢測方法的準確度和精密度等做全面的評價。課題組在前期系統(tǒng)研究哈威達溶解性、熱穩(wěn)定性等物理化學性質(zhì)的基礎上，著重研究了棉花中殘留哈威達的萃取、濃縮、凈化條件，建立了用高效液相色譜法檢測棉花中哈威達殘留量的分析方法，并對方法進行了較為全面的評估。

1 材料與方法

1.1 試驗材料與儀器

1.1.1 材料和試劑

哈威達標準品 （純度>99%，Sigma）；高純水；乙腈：分析純和色譜純（Sigma）。色譜純乙腈通過0.45μm孔徑的油相膜過濾；高純水，通過0.45μm孔徑的水相膜過濾。

1.1.2 儀器

液相色譜儀：Agilent1260Qua型HPLC系統(tǒng)。色譜柱：Agilent Eclipse XDB-C18，5μm，4.6mm×150mm。電子天平（精確到0.1mg）、超聲波振蕩儀、恒溫水浴振蕩器、離心機、旋轉蒸發(fā)儀等。

1.2 分析方法

1.2.1 樣品前處理

稱取棉花樣品（3±0.01）g于反應器中，加入150mL已預熱到（45±2）℃的乙腈溶液，將反應器密閉，用力振搖，使所有試樣浸于液體中，置于已恒溫至（45±2）℃的水浴中保溫30 min后，使所有試樣充分潤濕。然后，將反應器置于（45±2）℃超聲波浴中處理30 min，擠干，抽濾，收集濾液于圓底燒瓶中。濾渣收集到反應器中，再加入100mL乙腈溶液，將反應器置于（45±2）℃超聲波浴中處理10 min，擠干，抽濾，收集濾液于上述圓底燒瓶中。

用3×10 mL乙腈溶液分3次洗滌抽濾裝置中的濾渣，收集濾液于上述圓底燒瓶中。將上述收集的盛有乙腈提取液的圓底燒瓶置于真空旋轉蒸發(fā)器上，于45℃左右的溫度低真空下，濃縮至近干。準確移取1.0mL乙腈（色譜純）加入濃縮至近干的圓底燒瓶中，混勻，靜置[3]。

如定容溶液渾濁，采用離心處理，取其上清液上機分析。

1.2.2 高效液相色譜分析

Agilent1260Qua型HPLC系統(tǒng)，包含在線脫氣機、四元梯度泵和柱溫箱、DAD檢測器。色譜柱： Agilent Eclipse XDB-C18，5μm，4.6mm×150mm；檢測波長： 205nm，柱溫為30℃，進樣量10μL，用乙腈：水=20：80作為流動相，流速1mL/min，檢測時間8min。采用外標法峰面積定量。

1.3 定量方法和計算公式

定量方式采用外標法。試樣中哈威達殘留量的計算公式如下：

2 結果與分析

2.1 線性關系與檢出限

用乙腈將脫葉劑哈威達標準品（Sigma）配制成儲備液，以流動相乙腈稀釋至所需濃度的系列標準溶液，分別取上述系列標準溶液在1.2.2測定條件下進行測試，測試結果以峰面積Area-哈威達濃度（Amt）作標準曲線。測得標準曲線方程為Area=32.54×Amt+2.36 （γ=0.99954）。

從表1和圖1可以看出，哈威達濃度在0.5?g/mL～20.0?g/mL之間線性關系良好，范圍寬，完全可以滿足試驗要求，即本試驗可以用外標法進行定量。

方法檢出限的測定能反映分析方法的精度，定量檢出限的測定能反映方法定量的低限和準確程度。根據(jù)特征色譜峰信噪比S/N≥3為方法檢出限。配制濃度為0.5?g/mL的哈威達標準溶液，以乙腈/水溶液為流動相，進樣量為10μL。在該條件下利用此方法得到的信噪比為152.3。因此可以根據(jù)定量方法計算出該方法的檢測限低于0.033mg/kg。

2.2 方法精密度與穩(wěn)定性

采用上述儀器設備條件和參數(shù)，利用濃度為10.0?g/mL的哈威達標準溶液與空白交叉進樣，重復測量10次后計算相對標準偏差（RSD），試驗結果如表2所示。結果表明，該方法的系統(tǒng)精密度變異系數(shù)為0.44，系統(tǒng)精密度比較高。同時，利用濃度為10.0?g/mL的哈威達標準溶液分別在4℃下放置0、1、2、4天進行測試，測試結果見表3，穩(wěn)定性試驗表明該方法具備較好的穩(wěn)定性。

2.3 樣品測定與回收率試驗

2.3.1 回收率試驗

根據(jù)建立的檢測方法進行回收率測試，在不含哈威達的棉花樣品中分別加入濃度為1.0?g/mL、2.0?g/mL、10.0?g/mL的哈威達標準品1mL，測試結果見表4。其回收率在98.2%～108.3%之間，變異系數(shù)在1.68%～4.08%之間，說明該方法測定具有較高的回收率和穩(wěn)定性。

2.3.2 國內(nèi)外棉花樣品測定

采用上述分析方法中的樣品前處理和儀器分析條件，對不同國家和地區(qū)的棉花8個樣品進行分析，均檢測出含有哈威達，可能是課題組選取的棉花樣品是采用手摘或者使用了其他脫葉劑。

3 結論

在前期對多種萃取劑的選擇和結合哈威達物質(zhì)的熱穩(wěn)定性分析研究基礎上，本方法研究采用乙腈作為提取劑，在超聲波條件下對棉花中哈威達殘留量進行提取，通過離心凈化，利用高效液相色譜-二極管陣列檢測器（HPLC/DAD）對棉花中哈威達殘留量進行檢測。檢測結果表明色譜峰分離完全，精密度高，檢測限低，線性范圍寬，回收率符合殘留量檢測的要求，完全適用于測定棉花中哈威達殘留量的要求。本研究不僅建立了簡便、快速、準確的棉花中哈威達殘留量的檢測方法，同時對該方法的準確度和精密度等進行了較為全面的評價，為下一步制定國家棉花中噻苯隆殘留量的檢測方法標準提供了依據(jù)，打下了基礎。

參考文獻：

[1] 田曉莉，段留生，李召虎. 棉花化學催熟與脫葉的生理基礎. 植物生理學通訊. 2004， 40（16）：758-762.

[2] Thomas L. Potter， Luz Marti， Sally Belflower， and Clint C. Truman. Multiresidue Analysis of Cotton Defoliant， Herbicide， and Insecticide Residues in Water by Solid-Phase Extraction and GC-NPD， GC-MS， and HPLC-Diode Array Detection. J. Agric. Food Chem. 2000， （48）： 4103-4108.

[3] 曾蓉，孫近，趙瑞方，等.棉花中脫葉劑噻苯隆檢測方法研究[J].標準科學，2010，（5）：22-25.

（作者單位：四川省纖維檢驗局）endprint