靶向性抗肺癌新藥ZP-1在不同溶液中的穩(wěn)定性研究

靶向性抗肺癌新藥ZP-1在不同溶液中的穩(wěn)定性研究

張黎，易軍，臧林泉，黃婧瑩，張鳳玲

(廣東藥學(xué)院 藥科學(xué)院， 廣東 廣州 510006)

摘要:目的 研究靶向性抗肺癌新藥ZP-1在不同溶液中的穩(wěn)定性，為ZP-1的深入研究提供理論依據(jù)。方法 將ZP-1分別溶解于0.9%(質(zhì)量濃度，下同)注射用生理鹽水、無菌注射用水、5%(質(zhì)量濃度，下同)葡萄糖注射液中，采用高效液相色譜法檢測(cè)以上溶液中ZP-1的質(zhì)量分?jǐn)?shù)變化，以及不同溫度下和光照條件下的質(zhì)量分?jǐn)?shù)變化。結(jié)果 ZP-1溶于0.9%注射用生理鹽水中，分別于15、25、30 ℃條件下放置24 h，質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為99.22%、100.15%、98.96%，穩(wěn)定性良好；ZP-1在無菌注射用水和5%葡萄糖注射液中穩(wěn)定性不好，放置24 h相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別下降為62.40%、68.61%。結(jié)論 靶向性抗肺癌新藥ZP-1在0.9%注射用生理鹽水中具有良好的穩(wěn)定性。

關(guān)鍵詞:ZP-1； 抗癌藥； 溶液穩(wěn)定性； 高效液相色譜法

中圖分類號(hào):R914

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

doi:10.3969/j.issn.1006-8783.2015.01.001

文章編號(hào):1006-8783(2015)01-0001-04

Abstract:Objective To determine the stability of ZP-1 in different solution for providing theoretical basis for its intensive research. Methods HPLC was used to determine the content change of ZP-1 in different solvents(0.9% sodium chloride injection，sterile water for injection，5% glucose injection),temperature and illumination. Results ZP-1 was stable for 24 hours in 0.9% sodium chloride injection at 15，25，30 ℃,and the content of ZP-1 was 99.22%，100.15%，98.96%,respectively. ZP-1 was unstable when it was dissolved in the sterile water for injection and the 5% glucose injection,and the content of ZP-1 was 62.40% and 68.61%,respectively. Conclusion ZP-1 is stable in the 0.9% sodium chloride injection.

收稿日期：2014-10-29

基金項(xiàng)目：國家重大新藥創(chuàng)制專項(xiàng)(2011ZX09102-001031)

作者簡(jiǎn)介：張黎(1989—)，女，2012級(jí)碩士研究生，Email：402863230@qq.com； 通信作者：易軍(1970—)，女，副教授，從事藥物新劑型與新技術(shù)研究，Email：yijunyijunl@163.com。

Study on the stability of anti-lung cancer targeting drug ZP-1 in different solution

ZHANG Li，YI Jun，ZANG Linquan，HUANG Jingying，ZHANG Fengling

(SchoolofPharmacy,GuangdongPharmaceuticalUniversity，Guangzhou510006，China)

Key words:ZP-1； anti-cancer drugs; solution stability； HPLC

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2015-01-13 15:07網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/44.1413.R.20150113.1507.006.html

鉑類化合物在腫瘤的治療方面有較好的療效，被廣泛應(yīng)用于臨床，并成為許多腫瘤聯(lián)合用藥方案中的重要組成部分[1]。鉑類化合物的抗腫瘤活性由美國學(xué)者于1965年發(fā)現(xiàn)，目前已有3代，第1代的代表藥物是順鉑，第2代是奈達(dá)鉑和卡鉑，第3代是洛鉑、奧沙利鉑等[2]。順鉑和卡鉑是目前臨床上使用最廣的抗癌藥物之一，是治療許多腫瘤的首選藥物。據(jù)最新統(tǒng)計(jì)，目前臨床使用的聯(lián)合化療方案中，有85%的方案是以順鉑或卡鉑為主藥，或與其他藥物配伍應(yīng)用[3]。但是，臨床使用的鉑類化合物一般具有很強(qiáng)的毒副作用以及耐藥性，主要包括骨髓抑制、胃腸道反應(yīng)、耳毒性和腎臟毒性等。

靶向給藥由于可以將藥物選擇性地傳遞至特定部位，提高藥物在病灶上的濃度，同時(shí)減少在正常組織中的積累，是降低鉑類化合物毒性和提高療效的最有效方法之一[4]。本課題組自行研制的靶向性抗肺癌新藥ZP-1，是將可與肺癌組織靶向性結(jié)合的小分子多肽與鉑化合物偶聯(lián)得到的多肽-鉑配合物。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，鉑類藥物的抗腫瘤機(jī)制是對(duì)腫瘤細(xì)胞DNA的復(fù)制具有抑制作用[5]。據(jù)本課題組前期的藥理藥效研究結(jié)果表明，ZP-1具有良好的肺癌靶向性，能夠與腫瘤組織選擇性結(jié)合，同時(shí)保證鉑化合物進(jìn)入腫瘤細(xì)胞后被酶解釋放，實(shí)現(xiàn)了既有抑制腫瘤新生血管又具有產(chǎn)生抑制腫瘤DNA復(fù)制的雙重抗腫瘤機(jī)制。ZP-1在保證具有明確的抗腫瘤有效性的同時(shí)，又明顯減小了鉑化合物的毒副作用，提高了其安全性，突破了臨床上鉑化合物使用劑量的限制性，為傳統(tǒng)小分子抗癌藥物靶向性修飾開辟了新的領(lǐng)域。

ZP-1為白色粉末狀固體，擬進(jìn)一步制備成靜脈注射粉針劑，研究過程中發(fā)現(xiàn)，將ZP-1溶于不同的溶液中的穩(wěn)定性會(huì)不同。因此，為了保證制備凍干制品期間藥液的穩(wěn)定性，本文采用高效液相色譜法考察ZP-1在不同溶液中的穩(wěn)定性，以及在不同溫度和光照條件下的質(zhì)量分?jǐn)?shù)的變化情況，為制備工藝提供理論依據(jù) 。

1儀器與試藥

1.1　儀器

Quiksep-10D高效液相色譜儀(北京慧德易科技有限責(zé)任公司，P0010溶劑輸送單元，UV-100D紫外-可見光檢測(cè)器)；Shimadzu電子分析天平(日本島津公司)；SK8200LHC超聲波清洗器(上?？茖?dǎo)超聲儀器公司)；HH-S1數(shù)顯恒溫水浴鍋(金壇市醫(yī)療儀器廠)；PYX-250G-B光照培養(yǎng)箱(科力儀器有限公司)。

1.2　試藥

ZP-1對(duì)照品(自制，純度質(zhì)量分?jǐn)?shù)：99.55%，批號(hào)：130717，純度測(cè)定與標(biāo)定方法均采用色譜法)；ZP-1供試品(自制，純度質(zhì)量分?jǐn)?shù)：99.51%，批號(hào)：131117，純度測(cè)定方法采用色譜法)；無菌注射用水(天津藥業(yè)焦作有限公司)；0.9%(質(zhì)量濃度，下同)注射用生理鹽水(廣東艾希德藥業(yè)有限公司)；葡萄糖注射液(質(zhì)量濃度50%，天津藥業(yè)集團(tuán)新邦股份有限公司)；甲醇、乙腈(歐普森公司，色譜純)；三氟乙酸(阿拉丁試劑)。

2方法與結(jié)果

2.1　溶液的配制

2.1.1供試品儲(chǔ)備液的配制精密稱取ZP-1供試品適量，置10 mL量瓶中，加0.9%注射用生理鹽水溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度為1 mg/mL的供試品儲(chǔ)備液。

2.1.2供試品溶液的配制 精密吸取儲(chǔ)備液1.00 mL于5 mL棕色量瓶中，0.9%注射用生理鹽水稀釋至刻度，0.22 μm微孔濾膜濾過，即得質(zhì)量濃度為200 μg/mL的供試品溶液。

2.1.3對(duì)照品溶液的配制精密稱取ZP-1對(duì)照品適量，置10 mL量瓶中，加0.9%注射用生理鹽水溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度為10 mg/ mL的對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密吸取上述溶液200 μL于10 mL棕色量瓶，0.9%注射用生理鹽水稀釋至刻度，0.22 μm微孔濾膜濾過，即得質(zhì)量濃度為200 μg/mL的對(duì)照品溶液。

2.1.4陰性對(duì)照溶液的配制取0.9%注射用生理鹽水適量，0.22 μm微孔濾膜濾過，即得。

2.2　色譜條件

色譜柱：Waters Xbridge C18柱(100 mm×4.6 mm，3.5 μm)；流動(dòng)相： 0.1%(質(zhì)量分?jǐn)?shù)，下同)三氟乙酸/水-0.1%三氟乙酸/乙腈(體積比97∶3)；流速：1 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：215 nm；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：20 μL。

2.3　系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

分別配制6份相同質(zhì)量濃度的供試品溶液、對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照溶液作為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液，照上述色譜條件，精密量取20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖(見圖1)。結(jié)果理論塔板數(shù)以ZP-1計(jì)不低于3 000，拖尾因子為1.15，保留時(shí)間約10.90 min，與其他組分峰的分離度大于1.5，陰性對(duì)照不干擾測(cè)定。

1. ZP-1。

2.4　標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密吸取“2.1.1”項(xiàng)下配制的供試品儲(chǔ)備液適量，依次配成質(zhì)量濃度為50.10、100.2、200.4、400.8、801.6 μg/mL的供試品溶液，按上述色譜條件，分別吸取20 μL注入液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，重復(fù)測(cè)定3次，記錄色譜圖，以ZP-1峰面積(A)為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度(ρ)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程A=7 287ρ+17 304(r=0.999 0)。結(jié)果表明，ZP-1在1.004～16.032 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5　精密度試驗(yàn)

按“2.1.2”項(xiàng)下制備供試品溶液，在上述色譜條件下，分別精密吸取上述供試品溶液20 μL，注入液相色譜儀，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣6次，依法測(cè)定，記錄ZP-1峰面積。ZP-1峰面積的RSD為0.81%，表明儀器精密度良好。

2.6　重復(fù)性試驗(yàn)

按“2.1.2”項(xiàng)下同時(shí)平行制備6份供試品溶液，在上述色譜條件下，分別精密吸取上述供試品溶液20 μL，注入液相色譜儀，依法測(cè)定，記錄ZP-1峰面積。結(jié)果6份供試品溶液ZP-1峰面積的RSD為1.56%，表明方法的重復(fù)性良好。

2.7樣品在不同條件下的穩(wěn)定性

2.7.1樣品在不同溶液中的穩(wěn)定性精密稱取3份ZP-1供試品適量，分別置于10 mL棕色量瓶中，分別加0.9%注射用生理鹽水、5%(質(zhì)量濃度，下同)葡萄糖溶液(由質(zhì)量濃度50%葡萄糖注射液稀釋所得)、無菌注射用水溶解，并稀釋至刻度，搖勻，配成ZP-1質(zhì)量濃度為10 mg/mL的供試品溶液。取上述3份供試品溶液，置于25 ℃條件下，分別于0、2、4、6、8、12、24 h取樣200 μL，并用0.9%注射用生理鹽水稀釋配成ZP-1質(zhì)量濃度為200 μg/mL的溶液，精密吸取20 μL注入液相色譜儀，依法測(cè)定，記錄色譜圖，以0 h的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為100%，計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)，結(jié)果見表1。

可見：ZP-1在0.9%注射用生理鹽水中，于25 ℃避光放置24 h，質(zhì)量分?jǐn)?shù)基本穩(wěn)定；在無菌注射用水中，于25 ℃避光保存2 h后相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)下降為86.22%，24 h后還剩62.40%；在5%葡萄糖溶液中，于25 ℃避光放置2 h后相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)下降為88.04%，放置24 h后還剩下68.61%。以上結(jié)果表明，ZP-1在0.9%注射用生理鹽水中基本穩(wěn)定，而在無菌注射用水和葡萄糖溶液中不穩(wěn)定；因此，選擇0.9%注射用生理鹽水為溶解ZP-1的溶液。

2.7.2樣品溶解于0.9%注射用生理鹽水后在不同溫度下的穩(wěn)定性精密稱取3份ZP-1供試品適量，分別置于10 mL棕色量瓶中，加0.9%注射用生理鹽水溶解，并稀釋至刻度，搖勻，配成ZP-1質(zhì)量濃度為10 mg/mL的供試品溶液。取上述3份供試品溶液，分別置于15、25、30 ℃條件下保存，于0、2、4、6、8、12、24 h取樣200 μL，并用0.9%注射用生理鹽水稀釋配成ZP-1質(zhì)量濃度為200 μg/mL的溶液，精密吸取20 μL注入液相色譜儀，依法測(cè)定，記錄色譜圖，以0 h質(zhì)量分?jǐn)?shù)為100%，計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)的相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)，結(jié)果見表2。

可見：ZP-1在生理鹽水中，于15、25和30 ℃條件下避光保存24 h，質(zhì)量分?jǐn)?shù)沒有發(fā)生明顯變化，表明質(zhì)量濃度為10 mg/mL的ZP-1供試品溶液在以上3個(gè)溫度下都基本穩(wěn)定；因此，在溶解ZP-1時(shí)，環(huán)境溫度在15～30 ℃時(shí)的影響不大。

表1　ZP-1在不同溶液中的相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)

表2　ZP-1在不同溫度下的相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)

2.7.3樣品溶解于0.9%注射用生理鹽水后在光照條件下的穩(wěn)定性精密稱取ZP-1供試品適量，置于10 mL棕色量瓶中，加0.9%注射用生理鹽水溶解，并稀釋至刻度，搖勻，配成ZP-1質(zhì)量濃度為10 mg/mL的供試品溶液。取上述供試品溶液，置于恒溫光照培養(yǎng)箱中(25 ℃，4 500 lx)，分別于0、2、4、6、8、12、24 h取樣200 μL，并用0.9%注射用生理鹽水稀釋配成ZP-1質(zhì)量濃度為200 μg/mL的溶液，精密吸取20 μL注入液相色譜儀，依法測(cè)定，記錄色譜圖，以0 h質(zhì)量分?jǐn)?shù)為100%，計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)，并與25 ℃避光條件下的結(jié)果進(jìn)行比較，結(jié)果見表3。

表3　ZP-1在強(qiáng)光照條件下的相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)

可見：ZP-1溶于0.9%注射用生理鹽水中，在25 ℃強(qiáng)光照條件下保存4 h，相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)下降為96.28%，24 h后剩余84.87%；因此，ZP-1溶液應(yīng)避光放置。

3討論

3.1　檢測(cè)溶液的穩(wěn)定性

本文以檢測(cè)溶液的穩(wěn)定性為指標(biāo)，進(jìn)行了檢測(cè)溶液種類的篩選。分別以流動(dòng)相和0.9%注射用生理鹽水作為檢測(cè)溶液，配制相同濃度的供試品溶液各1份，于相同條件下放置，分別于0、 0.5、1、2、4、6、8、10、12 h取出，依法測(cè)定，計(jì)算質(zhì)量分?jǐn)?shù)，結(jié)果見圖2。可見：供試品在0.9%注射用生理鹽水中12 h內(nèi)穩(wěn)定；在流動(dòng)相中放置0.5 h時(shí)穩(wěn)定，但12 h后質(zhì)量分?jǐn)?shù)下降至64.72%；因此，ZP-1在生理鹽水中的穩(wěn)定性比在流動(dòng)相中好，本文選用0.9%注射用生理鹽水作為溶解ZP-1的溶液。

圖2檢測(cè)溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

Figure 2Results of stability experiment of detection solution

3.2　樣品測(cè)定結(jié)果分析

從本文結(jié)果可以看出，溶液的種類對(duì)ZP-1的穩(wěn)定性影響很大，ZP-1在0.9%注射用生理鹽水中比在無菌注射用水以及葡萄糖溶液中穩(wěn)定。許德晨[6]對(duì)鉑類配合物的結(jié)構(gòu)活性構(gòu)效關(guān)系進(jìn)行了研究，認(rèn)為結(jié)構(gòu)中的氯離子為離去基團(tuán)，具有中等配位能力，容易離去，離去之后結(jié)構(gòu)發(fā)生變化；因此，本文推測(cè)ZP-1溶于水后氯離子會(huì)被水分子緩慢取代，出現(xiàn)降解的情況，但是在0.9%注射用生理鹽水中，存在大量的氯離子，由于同離子效應(yīng)，使得氯離子不易離去，上述反應(yīng)受到抑制，從而穩(wěn)定性增加。

綜合本文結(jié)果，為了保證制劑制備過程中ZP-1的穩(wěn)定性，應(yīng)選擇0.9%注射用生理鹽水為溶解ZP-1的溶液，溶解過程中環(huán)境溫度控制在15～30 ℃之間，且避光保存。

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(責(zé)任編輯：陳翔)