miR－21與miR－375在食管鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及意義

miR-21與miR-375在食管鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及意義

冷超，張晶晶

(南華大學(xué)附屬第一醫(yī)院，湖南衡陽 421001)

摘要：目的觀察食管鱗狀細(xì)胞癌(ESCC)癌組織中miR-21、miR-375的表達(dá)，分析兩者與ESCC患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。方法選擇39例ESCC患者的癌組織及其正常食管黏膜組織標(biāo)本，采用逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應(yīng)法檢測(cè)miR-21、miR-375。隨訪至患者死亡或截止2015年4月1日，采用Kaplan-Meier法分析miR-21、miR-375表達(dá)與 ESCC患者預(yù)后的關(guān)系，采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析影響ESCC患者預(yù)后的因素。結(jié)果 ESCC癌組織、癌旁組織中miR-21的表達(dá)分別為0.697±0.412、0.449±0.337，miR-375的表達(dá)分別為0.322 ±0.215 、0.484 ± 0.341，癌組織中miR-21的表達(dá)高于癌旁組織、miR-375的表達(dá)低于癌旁組織(P均<0.05)。發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期者miR-21表達(dá)較高(P均<0.05)。miR-21高表達(dá)者的3年生存率低于低表達(dá)者，miR-375高表達(dá)者的3年生存率高于低表達(dá)者(P均<0.05)。miR-21高表達(dá)和miR-375低表達(dá)患者生存預(yù)后較差，是影響ESCC患者預(yù)后的獨(dú)立因素(P均<0.05)。結(jié)論 ESCC患者癌組織中miR-21表達(dá)增高，且發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期較高者miR-21表達(dá)較高。miR-21高表達(dá)、miR-375低表達(dá)的ESCC患者預(yù)后較差。

關(guān)鍵詞：食管鱗狀細(xì)胞癌；微小RNA；生存分析；預(yù)后

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.42.022

中圖分類號(hào)：R730.2；R735.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B

收稿日期：(2015-08-03)

食管癌是臨床常見的消化道惡性腫瘤，食管鱗狀細(xì)胞癌(ESCC)是其主要的病理類型。尋找能夠用于早期診斷和判斷腫瘤轉(zhuǎn)移的生物標(biāo)志物對(duì)于ESCC的治療具有重要意義[1]。近年研究發(fā)現(xiàn)，微小RNA(miRNAs)參與了多種腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移，不同的miRNAs在不同的腫瘤組織中可表現(xiàn)為異常增高或降低，可作為抑癌基因或癌基因行使功能[2]。因此，研究與ESCC相關(guān)的miRNAs對(duì)于ESCC的診斷、治療及預(yù)后判斷具有重要意義。近年來，我們對(duì)39例ESCC患者的癌組織中miR-21、miR-375的表達(dá)進(jìn)行了檢測(cè)，分析兩者與患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系，為ESCC的早期診斷、治療及預(yù)后判斷提供依據(jù)。

1資料與方法

1.1臨床資料選擇2008年12月～2011年10月于我院胸外科手術(shù)切除的39例ESCC患者的癌組織及其正常食管黏膜組織標(biāo)本。男31例、女8例，年齡(53.7±8.6)歲。病變位于胸上段5例、胸中段24例、胸下段10例。低分化6例，中分化27例，高分化6例。均經(jīng)病理檢查確診?；颊呤中g(shù)前后均未接受放化療及生物免疫治療。所有患者簽署知情同意書。

1.2miR-21、miR-375表達(dá)檢測(cè)采用逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應(yīng)法。按試劑盒說明書提取組織總RNA，采用15 μL反應(yīng)體系，包括反應(yīng)體系混合物7 μL、Taqman引物3 μL及RNA樣本5 μL。擴(kuò)增過程為95 ℃ 10 min，95 ℃ 15 s、60 ℃ 30 s、72 ℃ 1 s循環(huán)40次，最后60 ℃ 1 min。以U6 snRNA作為內(nèi)參，參考文獻(xiàn)[3]描述的2-ΔCt法計(jì)算相對(duì)表達(dá)量，ΔCt=(CtmiRNA-CtU6snRNA)。根據(jù)miR-21、miR-375表達(dá)的中位數(shù)，將39例標(biāo)本分為高表達(dá)、低表達(dá)。

1.3隨訪方法 通過門診復(fù)查、電話及信訪方式，隨訪患者有無腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移等，隨訪至患者死亡或截止2015年4月1日。

2結(jié)果

2.1癌組織及癌旁組織 miR-21、miR-375表達(dá)癌組織、癌旁組織中miR-21的表達(dá)分別為0.697±0.412、0.449±0.337，miR-375的表達(dá)分別為0.322 ±0.215、0.484±0.341，癌組織中miR-21的表達(dá)高于癌旁組織、miR-375的表達(dá)低于癌旁組織(P均<0.05)。

2.2miR-21、miR-375表達(dá)與ESCC患者臨床病理特征的關(guān)系發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期者miR-21表達(dá)較高(P均<0.05)。見表1。

表1　 癌組織miR-21、miR-375表達(dá)與ESCC患者

2.3miR-21、miR-375表達(dá)與ESCC患者預(yù)后的關(guān)系 Kaplan-Meier法分析顯示,miR-21高表達(dá)者3年生存率為42.1%，低表達(dá)者3年生存率為75.0%，miR-21高表達(dá)者的3年生存率低于低表達(dá)者(P<0.05)；miR-375高表達(dá)者3年生存率為68.4%，低表達(dá)者3年生存率為45.0%，miR-375高表達(dá)者3年生存高于低表達(dá)者(P<0.05)。miR-21高表達(dá)和miR-375低表達(dá)者生存預(yù)后較差(P<0.05)。 Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型多因素分析示miR-21高表達(dá)、miR-375低表達(dá)(OR=6.43，95%CI為1.25～14.49，P<0.01)是影響ESCC患者預(yù)后的獨(dú)立因素。

3討論

miRNAs是長度為20～25 nt、具有調(diào)控功能的非編碼RNA，其主要功能是參與基因轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)控。近年來，miRNAs在腫瘤發(fā)病中的作用受到廣泛關(guān)注。研究發(fā)現(xiàn)，miRNAs表達(dá)變化對(duì)于腫瘤診斷和預(yù)后判斷具有潛在價(jià)值[4～6]。人類許多miRNAs基因位于染色體上的腫瘤相關(guān)區(qū)域，如脆性區(qū)域、癌基因或抑癌基因斷裂區(qū)域等，在癌癥發(fā)生、發(fā)展過程中具有重要作用[7,8]。miRNAs表達(dá)異常能影響腫瘤相關(guān)的重要生物學(xué)行為，如腫瘤細(xì)胞的分化、遷移、增殖等。因此，篩查腫瘤組織的miRNAs表達(dá)譜，對(duì)腫瘤發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制研究具有重要意義[9]。

miR-21是較早發(fā)現(xiàn)的具有致癌基因作用的人類miRNAs之一，位于17q23.2染色體FRA17B脆性區(qū)域，且具有自主轉(zhuǎn)錄單位的miRNA，通過調(diào)節(jié)RAS/MEK/ERK通路從而抑制凋亡基因的表達(dá)[10]。Komastsu等[11]研究發(fā)現(xiàn)，ESCC患者血漿miR-21表達(dá)增高，并與腫瘤的侵襲和術(shù)后復(fù)發(fā)有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，miR-21在多種腫瘤中表達(dá)增高，可調(diào)控p53、PTEN或PI3K/AKT/mTOR等基因或通路，發(fā)揮癌基因的作用[12]。本研究發(fā)現(xiàn)，ESCC組織miR-21表達(dá)增高，且存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、較晚臨床分期的患者miR-21表達(dá)較高，miR-21高表達(dá)者的3年生存率低于低表達(dá)者，miR-21高表達(dá)是影響ESCC患者預(yù)后的獨(dú)立因素，提示miR-21高表達(dá)與ESCC的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。

miR-375位于2q2.3，擁有獨(dú)立的啟動(dòng)子并受轉(zhuǎn)錄調(diào)控信號(hào)調(diào)節(jié)，可通過抑制Janus激酶2、胰島素樣生長因子1受體等重要癌基因發(fā)揮抑癌作用[13]。Mathe等[14]研究發(fā)現(xiàn)，ESCC組織中miR-375的表達(dá)顯著降低。Harris等[15]研究發(fā)現(xiàn)，頭頸部鱗狀細(xì)胞癌患者miR-375低表達(dá)者的預(yù)后較差，并與癌轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，在ESCC癌組織中miR-375的表達(dá)降低，且miR-375低表達(dá)患者生存預(yù)后較差，是影響ESCC患者預(yù)后的獨(dú)立因素，提示miR-375下調(diào)可能參與了ESCC的發(fā)生發(fā)展，miR-375可能發(fā)揮了抑癌基因作用。

綜上所述，ESCC患者癌組織中miR-21表達(dá)增高，且發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期較高者miR-21表達(dá)較高，miR-21高表達(dá)、miR-375低表達(dá)的ESCC患者預(yù)后較差。

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