T－SPOT.TB法在肺結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)中的應(yīng)用

T-SPOT.TB法在肺結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)中的應(yīng)用

白國(guó)峰

(沈陽市第十人民醫(yī)院，沈陽110044)

摘要：目的探討結(jié)核感染T細(xì)胞檢測(cè)(T-SPOT.TB)法在肺結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值。方法回顧性分析臨床確診的75例肺結(jié)核患者的臨床資料。入院時(shí)取患者靜脈血，采用T-SPOT.TB法檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌，并行結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)(TST)。比較T-SPOT.TB法、TST法檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的敏感性、特異性，比較兩種方法檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的陽性率。結(jié)果T-SPOT.TB法檢測(cè)肺結(jié)核患者結(jié)核分枝桿菌的敏感性、特異性分別為84.3%(70/83)、72.9%(27/37)。TST法檢測(cè)肺結(jié)核患者結(jié)核分枝桿菌的敏感性、特異性分別為79.8%(67/84)、77.8%(28/36)。采用T-SPOT.TB法、TST法檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的陽性率分別為93.3%(70/75)、86.7%(65/75)，T-SPOT.TB法檢測(cè)的陽性率高于TST法(P<0.01)。結(jié)論 T-SPOT.TB法檢測(cè)肺結(jié)核分枝桿菌的敏感性、特異性均較高，檢出率高，是一種較可靠的肺結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)方法。

關(guān)鍵詞：T-SPOT.TB法；結(jié)核，肺；結(jié)核分枝桿菌；酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)檢測(cè)

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.42.030

中圖分類號(hào)：R521文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B

收稿日期：(2015-04-27)

結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌感染引起的慢性傳染病，快速準(zhǔn)確地診斷結(jié)核分枝桿菌感染對(duì)于治療結(jié)核病具有重要作用[1]。結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)(TST)是目前診斷結(jié)核分枝桿菌感染常用的方法，它是以機(jī)體對(duì)結(jié)核菌素純化蛋白衍生物(PPD)遲發(fā)型超敏反應(yīng)為基礎(chǔ)進(jìn)行皮試。PPD本身是一種蛋白混合物，因其同時(shí)可以與非致病性結(jié)核分枝桿菌及卡介苗結(jié)合，因此無法特異性檢測(cè)致病性結(jié)核分枝桿菌[2,3]。臨床上認(rèn)為，TST對(duì)結(jié)核分枝桿菌的檢測(cè)結(jié)論可靠性尚欠佳。結(jié)核感染T細(xì)胞檢測(cè)(T-SPOT.TB)法是近年發(fā)明的一種新型診斷方法，以結(jié)核分枝桿菌基因RD1區(qū)域中編碼的早期分泌抗原靶(ESAT-6)和培養(yǎng)濾液蛋白(CFP-10)的肽段庫作為特異性抗原，采用酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法(ELISPOT)檢查進(jìn)行檢查，大大提高了檢測(cè)敏感性[4～6]。2015年3月，我們回顧性分析了75例行T-SPOT.TB法檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的肺結(jié)核患者臨床資料，探討T-SPOT.TB法在結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)中的臨床應(yīng)用價(jià)值。

1資料與方法

1.1臨床資料回顧性分析2014年3月～2015年3月臨床確診的75例肺結(jié)核患者的臨床資料，根據(jù)臨床表現(xiàn)、痰抗酸桿菌涂片檢查、結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)、胸部X線檢查、抗結(jié)核治療等確診，其中男43例、女32例，年齡(33.4±11.9)歲，病程0.5～2.0年。本研究經(jīng)過本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者均簽署知情同意書。

1.2T-SPOT.TB檢測(cè)方法按照T-SPOT.TB試劑盒操作規(guī)范進(jìn)行。入院時(shí)，取患者的靜脈血4 mL，采用Ficoll分離法分離外周血單個(gè)核細(xì)胞，用細(xì)胞培養(yǎng)基AIM-V重懸細(xì)胞，調(diào)整至2.5×106/mL。在已包被抗IFN-γ抗體的96孔板中，加入細(xì)胞培養(yǎng)基作為空白對(duì)照，以50 μL植物血凝素作為陽性對(duì)照，分別以結(jié)核分枝桿菌特異性ESAT-6和CFP-10肽段庫(終濃度10 μg/mL)作為刺激原。孵化后用PBS洗滌4次，ELISPOT計(jì)數(shù)儀進(jìn)行斑點(diǎn)閱讀與統(tǒng)計(jì)。以ESAT-6或CFP-10任一檢測(cè)孔達(dá)到以下標(biāo)準(zhǔn)判定為陽性：如果空白對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)<5個(gè)，以檢測(cè)孔斑點(diǎn)數(shù)減去空白對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)≥6為陽性；如果空白對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)≥6個(gè)，以檢測(cè)孔斑點(diǎn)數(shù)>2倍的空白對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)為陽性。

1.3TST檢測(cè)方法入院時(shí)，于患者前臂皮內(nèi)注射PPD 0.1 mL，72 h后由2位醫(yī)生共同查驗(yàn)結(jié)果及卡痕。以硬結(jié)直徑<5 mm為陰性，硬結(jié)直徑≥10 mm為陽性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1檢測(cè)效能 T-SPOT.TB法對(duì)檢測(cè)肺結(jié)核患者結(jié)核分枝桿菌的敏感性、特異性分別為85.3%(70/83)、72.9%(27/37)。TST法檢測(cè)肺結(jié)核患者結(jié)核分枝桿菌的敏感性、特異性分別為79.8%(67/84)、77.8%(28/36)。T-SPOT.TB檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的敏感性高于TST法(P<0.01)。

2.2陽性率75例肺結(jié)核患者采用T-SPOT.TB法、TST法檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的陽性率分別為93.3%(70/75)、86.7%(65/75)，T-SPOT.TB法檢測(cè)的陽性率高于TST法(P<0.01)。

3討論

結(jié)核分枝桿菌可侵及全身各個(gè)器官，最常見的致病部位為肺臟，占所有器官結(jié)核病的90%[7]。TST是目前診斷結(jié)核分枝桿菌感染的常用方法，但由于PPD是一種蛋白混合物，同時(shí)可以與非致病性結(jié)核分枝桿菌及卡介苗結(jié)合，因此無法特異性地檢測(cè)致病性結(jié)核分枝桿菌[8]，使得TST檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的結(jié)論可靠性欠佳。目前常用的結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)方法還有抗酸性染色法及分支桿菌培養(yǎng)法[9]，但抗酸性染色法的敏感性僅有50%～60%，而分枝桿菌培養(yǎng)法則需要2周以上才能得到培養(yǎng)結(jié)果。尋找檢測(cè)速度快、敏感性及特異性高的結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)方法是影響結(jié)核病診斷與治療的重要方面。

研究發(fā)現(xiàn)，卡介苗與結(jié)核分枝桿菌基因存在16個(gè)丟失區(qū)，分別為RD1～RD16，其中RD1中的9個(gè)基因編碼區(qū)(Rv3871-Rv3879c)僅存在于致病性的結(jié)核分枝桿菌中，而卡介苗中該編碼區(qū)出現(xiàn)缺失。該特異性編碼區(qū)即被作為特異性檢測(cè)致病性結(jié)核分枝桿菌的靶點(diǎn)[10～12]。此外，在人體初次感染結(jié)核分枝桿菌后，外周血中的T細(xì)胞會(huì)發(fā)生致敏轉(zhuǎn)化，形成記憶性T淋巴細(xì)胞，當(dāng)再次接觸結(jié)核分枝桿菌時(shí)，記憶性T淋巴細(xì)胞能夠迅速活化增殖，從而引起γ干擾素的釋放。T-SPOT.TB法即是基于以上原理，以ESAT-6(Rv3875)和CFP-10 (Rv3874)肽段庫作為刺激原，通過特異性與結(jié)核分枝桿菌結(jié)合，檢測(cè)外周血中具有促進(jìn)γ干擾素釋放的T淋巴細(xì)胞，從而特異性地檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌[13～15]。T-SPOT.TB法采用ELISPOT檢測(cè)，可在細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子擴(kuò)散前，捕獲到細(xì)胞周圍分泌的細(xì)胞因子，使檢測(cè)更加靈敏，其靈敏性超過傳統(tǒng)的ELISA實(shí)驗(yàn)。T-SPOT.TB檢測(cè)適用于所有具有結(jié)核潛伏感染風(fēng)險(xiǎn)或懷疑結(jié)核病的人群，且不受年齡、性別、種族、治療藥物、免疫狀況等的影響。本研究發(fā)現(xiàn)，T-SPOT.TB法對(duì)肺結(jié)核患者結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)的敏感性、特異性分別為85.3%、81.2%，高于TST法的檢測(cè)效能，對(duì)結(jié)核分枝桿菌也具有更高的檢測(cè)陽性率，提示T-SPOT.TB法檢測(cè)肺結(jié)核分枝桿菌的敏感性和特異性均較高，檢出率高，是一種較可靠的肺結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)方法。

參考文獻(xiàn)：

[1] Wang X, Yang Z, Fu Y, et al. Insight to the epidemiology and risk factors of extrapulmonary tuberculosis in Tianjin, China during 2006-2011[J] . PLoS One, 2014,9(12):e112213.

[2] Mazurek GH, Jereb J, Vernon A, et al. Updated guidelines for using interferon gamma release assays to detect mycobacterium tuberculosis infection-united states, 2010[J]. MMWR Recomm Rep, 2010,59(RR-5):1-25.

[3] Bikdeli B, Sharif-Kashani B, Raeissi S, et al. Chest physicians′ knowledge of appropriate thromboprophylaxis: insights from the promote study[J]. Blood Coagul Fibrinolysis, 2011,22(8):667-672.

[4] Yan L, Xiao H, Han M, et al. Diagnostic value of T-SPOT.TB interferon-γ release assays for active tuberculosis[J]. Exp Ther Med, 2015,10(1):345-351.

[5] Kim CH, Kim JY, Hwang YI, et al. Interferon-gamma enzyme-linked immunospot assay in patients with tuberculosis and healthy adults[J]. Tuberc Respir Dis, 2014,76(1):23-29.

[6] 劉菲,張霞,杜鳳嬌,等. γ-干擾素釋放試驗(yàn)檢測(cè)胸腔積液對(duì)診斷結(jié)核性胸膜炎的初步探討[J]. 中華結(jié)核和呼吸雜志,2014,37(5):323-327.

[7] 全斌,喻艷林.肺結(jié)核合并肺癌的發(fā)生機(jī)制研究進(jìn)展[J].山東醫(yī)藥,2015, 55(24):104-106.

[8] Wu X, Ma Y, Li D, et al. Diagnostic value of ELISPOT technique for osteoarticular tuberculosis[J]. Clin Lab, 2014,60(11):1865-1870.

[9] King TC, Upfal M, Gottlieb A, et al. T-SPOT. TB interferon-γ release assay performance in healthcare worker screening at nineteen U.S. hospitals[J]. Am J Respir Crit Care Med, 2015,192(3):367-373.

[10] Sharma A, Dubey D, Janga K, et al. A case of peritoneal TB causing renal failure in a patient with rheumatoid arthritis and initial negative PPD after treatment with infliximab[J]. Ren Fail, 2014,36(6):948-950.

[11] Zhong L, Zhou XL, Li J, et al. The T-SPOT.TB Test for Diagnosis of Breast Tuberculosis[J]. Lab Med, 2015,46(1):14-19.

[12] Chapman HJ, Lauzardo M. Advances in diagnosis and treatment of latent tuberculosis infection[J].J Am Board Fam Med, 2014,27(5):704-712.

[13] Mukouyama H, Higuchi K, Harada N. Comparison of tests results between T-SPOT.TB and QuantiFERON-TB gold in-Tube in a contact investigation[J]. Kekkaku, 2014,89(7):655-658.

[15] Wang X, Wu Y, Wang M, et al. The sensitivity of T-SPOT.TB assay in diagnosis of pediatric tuberculosis[J]. Fetal Pediatr Pathol, 2014,33(2):123-125.