乳腺癌表皮生長因子受體與Bcl-2的表達及其臨床意義

作者單位：1.100069北京，首都醫(yī)科大學公共衛(wèi)生學院流行病與衛(wèi)生統(tǒng)計學系；2.130021長春，吉林大學中日聯(lián)誼醫(yī)院普外科

乳腺癌表皮生長因子受體與Bcl-2的表達及其臨床意義

劉光旭1，任圣楠2，房學東2，何燕1

【摘要】目的探討表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor, EGFR)與B淋巴細胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2, Bcl-2)在乳腺癌中的表達狀況及其臨床意義。方法采用免疫組化(二步法)實驗方法檢測539例乳腺癌組織雌激素受體(estrogen receptor, ER)、孕激素受體(progesterone receptor, PR)、人表皮生長因子受體2(human epidermal growth factor receptor-2，HER-2)以及EGFR、Bcl-2的表達。結果EGFR的表達以三陰性乳腺癌最高 (44.4%)；Bcl-2的表達以管腔型乳腺癌最高(71.7%)。在EGFR的表達上，三陰性乳腺癌與管腔型乳腺癌(χ2=9.02, P<0.05)、HER-2受體陽性組乳腺癌患者(χ2=5.78, P<0.05)相比表達率更高；在Bcl-2表達上，管腔型乳腺癌與HER-2受體陽性組乳腺癌(χ2=70.73, P<0.0001)、三陰性乳腺癌(χ2=71.76, P<0.0001)的患者相比表達率更高。兩者的表達與其他病理特征的差異均無統(tǒng)計學意義。乳腺癌組織學分級越高EGFR的陽性表達率越高(χ2=11.38，P<0.05)，而Bcl-2的陽性表達率越低(χ2=6.92, P<0.05)。PR、Bcl-2與ER表達呈正相關，相關系數(shù)分別為0.712、0.599，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。同時，PR與Bcl-2間也呈正相關關系(r=0.599，P<0.01)。而ER、PR分別與HER-2、EGFR之間以及HER-2與Bcl-2之間都呈負相關，它們的相關系數(shù)依次為-0.366、-0.133、-0.453、-0.195和-0.392。結論EGFR與Bcl-2的表達在乳腺癌不同分子亞型間存在差異； EGFR以及Bcl-2的表達可以作為乳腺癌發(fā)生、發(fā)展的評價指標，有助于評估乳腺癌的生物學行為并指導臨床治療以及制定預后策略。

【關鍵詞】EGFR; Bcl-2;乳腺癌;臨床病理特征

通訊作者：何燕，E-mail：yanhe118@sina.com

作者簡介：吳瑤，大專學歷，主管護師，E-mail:wyao052791@163.com

【中國圖書分類號】R730.231

Expression of EGFR and Bcl-2 in breast cancer and their relationship with clinicopathological features

LIU Guangxu1，REN Shengnan2，F(xiàn)ANG Xuedong2，and HE Yan1. 1.Department of Epidemiology and Biostatistics, School of Public Health, Capital Medical University, Beijing 100069,China; 2.Department of General Surgery, China-Japan Union Hospital of Jilin University, Changchun 130021, China

Abstract【】ObjectiveTo study the expression of epidermal growth factor receptor (EGFR) and B-cell lymphoma-2 (Bcl-2) in breast cancer subtype and their relationship with clinicopathological features and the expression of ER,PR and HER-2. MethodsImmunohistochemistry was performed to detect the expression of EGFR and Bcl-2 in 539 patients with breast cancer and its correlation with clinicopathological parameters was analyzed. ResultsThe expression rate of EGFR in three negative breast cancer group (χ2=9.78,P=0.008) and Bcl-2 in luminal breast cancer group (χ2=114.11, P<0.0001) were 44.4% and 71.7%, which were the highest in all groups. The expression of EGFR showed a statistically significant difference in histological grade (χ2=11.38,P=0.003), and the expression of Bcl-2 showed a statistically significant difference in histological grade (χ2=6.92, P=0.041) and pathological type (χ2=5.39,P=0.022). No significant difference was found between the expression of both and other clinicopathological features. The expression of PR and Bcl-2 was positively correlated with the expression of Bcl-2, and their correlation coefficients were 0.712(P<0.01) and 0.599(P<0.01), respectively, which was the same with the expression between PR and Bcl-2 (r=0.599，P<0.01). However, there was a negative correlation between ER，PR and HER-2, Bcl-2 respectively, and their correlation coefficient were -0.366,-0.133,-0.453,-0.392 successively. In addition, no correlation was found between EGFR and HER-2, Bcl-2 (P>0.05). ConclusionsThe expression of EGFR and Bcl-2 is different in breast cancer subtypes. Joint detection of the expression of EGFR and Bcl-2 could be used as index of breast cancer occurrence, development, and help to guide clinical treatment and prognosis of strategy.

【Key words】EGFR; Bcl-2; breast cancer; clinicopathological features

乳腺癌是女性最為常見的腫瘤，并且是引起女性死亡的頭號殺手[1]。2003-2007年，中國女性乳腺癌的發(fā)病率和死亡率分別為41.64/10萬和9.63/10萬，在女性腫瘤中分別排名第1位和第6位[2]，給女性身心健康帶來重大負擔。近年來，乳腺癌的分子亞型及腫瘤標志物已經(jīng)有了很多研究。其中，表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor, EGFR)與B淋巴細胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2, Bcl-2)的表達與腫瘤的生物學行為及預后有密切關系[3-5]，但在乳腺癌中探討兩者與臨床病理特征及其他蛋白關系的研究較少。本研究旨在分析腫瘤標志物EGFR及Bcl-2在不同分子亞型間的表達，探討兩者與乳腺癌臨床病理特征與雌激素受體(estrogen receptor, ER)、孕激素受體(progesterone receptor, PR)、人表皮生長因子受體2(human epidermal growth factor receptor-2，HER-2)表達的關系，并將其作為乳腺癌發(fā)生、發(fā)展的指標，以期用它評估乳腺癌的生物學行為、指導臨床治療和制定治療策略。

1　對象與方法

1.1對象收集吉林大學附屬中日聯(lián)誼醫(yī)院2009-01至2011-12經(jīng)病理診斷為乳腺癌539例，均具有完整的臨床資料和石蠟包埋的組織標本。年齡31～79歲，中位年齡53歲。腫塊位置：左側(cè)280例，右側(cè)259例。腫瘤大?。? 2 cm 244例，2～5 cm 212例，> 5 cm 83例。有淋巴結轉(zhuǎn)移者309例，無淋巴結轉(zhuǎn)移者230例。TNM分期：Ⅰ期217例，Ⅱ期229例，Ⅲ/Ⅳ期93例。病理類型：浸潤導管癌446例，其他93例(包括浸潤性小葉癌38例；導管內(nèi)癌23例，髓樣癌19例，乳頭狀癌13例)。組織學分級：Ⅰ級89例，Ⅱ級340例，Ⅲ級110例。患者術前均未接受過放療、化療等治療。

1.2試劑EGFR、Bcl-2、 ER、PR及HER-2等抗原的單克隆抗體均購自Dako公司。

1.3方法所有切片均在同一條件下同步同時進行免疫組化SP法染色[3]。

1.4結果判定參照文獻[4-6] 標準對ER、PR、HER-2、EGFR與Bcl-2蛋白免疫組化陽性結果進行判定。

1.5分子亞型定義參照Cheang等[7]的報道，根據(jù)ER、PR和HER-2的表達情況，將乳腺癌分為三組亞型：管腔型組(ER+和/或PR+, HER2-)，HER-2受體陽性組(ER-,PR-且HER2+)，三陰性組(ER-,PR-且HER2-)。

1.6統(tǒng)計學處理采用 SPSS19.0軟件進行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料用χ2檢驗，相關性檢驗用Spearman相關性分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結　　果

2.1EGFR與Bcl-2在不同分子亞型乳腺癌組織中的表達情況EGFR與Bcl-2在管腔型組、HER-2受體陽性組與三陰性組不同分子亞型中的表達情況見表1。三組間EGFR與Bcl-2的陽性表達差異有統(tǒng)計學意義(χ2=9.78,P=0.008;χ2=114.11,P<0.0001)。其中，EGFR的表達以三陰性組最高(44.4%)；Bcl-2的表達以管腔型組最高(71.7%)。在EGFR的表達上，三陰性組與管腔型組(χ2=9.02,P<0.05)、HER-2受體陽性組(χ2=5.78,P<0.05)相比表達率更高；而管腔型組與HER-2受體陽性組間差異無統(tǒng)計學意義。在Bcl-2表達上，管腔型組與HER-2受體陽性組(χ2=70.73,P<0.0001)、三陰性組(χ2=71.76,P<0.0001)的患者相比表達率更高;而在HER-2受體陽性組與三陰性乳組間差異無統(tǒng)計學意義(表1)。

2.2EGFR與Bcl-2表達與臨床病理特征的關系乳腺癌組織中EGFR與Bcl-2的表達率分別為30.6%，56.0%。乳腺癌組織學分級越高EGFR的陽性表達率越高，而Bcl-2的陽性表達率越低 (χ2=11.38,χ2=6.92),差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。浸潤性導管癌在Bcl-2表達上與其他類型的乳腺癌患者相比有更高的表達率 (χ2=5.39,P<0.05)。 EGFR與Bcl-2的表達在不同年齡組、腫瘤直徑、TNM分期、淋巴結轉(zhuǎn)移方面差異無統(tǒng)計學意義。而且EGFR的表達在不同病理類型上也無統(tǒng)計學差異(表2)。

表1　三組乳腺癌患者表皮生長因子受體及Bcl-2表達情況　( n;%)

注：與三陰性組比較，①P<0.05；與管腔型組比較，②P<0.05

表2　表皮生長因子受體與Bcl-2表達及其與臨床病理特征的關系　( n;%)

注：與Ⅲ級比較， ①P<0.05；與Ⅰ級比較，②P<0.05

2.3EGFR、BCl-2、ER、PR、HER-2之間的相關性PR、Bcl-2與ER間呈正相關，相關系數(shù)分別為0.712(P<0.01)、0.599(P<0.01)。同時，PR與Bcl-2間也呈正相關(r=0.599，P<0.01)。而ER、PR 分別與HER-2、EGFR之間及HER-2與Bcl-2之間都呈負相關，它們的相關系數(shù)依次為-0.366、-0.133、-0.453、-0.195和-0.392。此外，HER-2、Bcl-2與EGFR之間均無相關性(P>0.05，表3)。

表3　EGFR、BCl-2、ER、PR、HER-2之間的相關性

注：采用Spearman相關檢驗，①P<0.05，②P<0.01

3　討　　論

乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移是一個極其復雜的生物學過程，是多因素、多基因、多步驟突變的結果[8]。

EGFR 是一種分布于組織細胞膜上的多功能糖蛋白[9]，也屬于表皮生長因子受體家族成員之一。它的過度表達已證明與腫瘤的惡性程度有關[2-10]。Nicholson 等[11]發(fā)現(xiàn)，在腫瘤患者中EGFR 高表達的腫瘤更易發(fā)生轉(zhuǎn)移，復發(fā)時間短、復發(fā)率高、存活期短等。本研究結果發(fā)現(xiàn)EGFR在三陰性乳腺癌中有更高的表達，這符合三陰性乳腺癌具有更高的惡性程度以及更差的預后的報道[11-13]。

Bcl-2 是目前公認的抗凋亡基因，它可阻斷多種原因?qū)е碌募毎蛲鲞^程。其中一種主要通過阻斷內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶的DNA 切割活性，從而阻斷細胞的程序性死亡[12]。Bcl-2在多種腫瘤中都有表達，但表達的預后意義差異很大，在慢性淋巴細胞白血病、胰腺癌、胃癌患者中，Bcl-2高表達提示預后不良；然而在乳腺癌中，多數(shù)報道Bcl-2高表達是預后良好的指標。文獻[13,14]研究表明Bcl-2蛋白表達與組織學分級呈負相關，在組織學分級中I～Ⅱ級表達率明顯高于Ⅲ級，且提示Bcl-2高表達是預后良好的指標。Hellemans 等[15]研究表明Bcl-2蛋白高表達與預后較好有密切關系，且與組織學分級呈負相關，同時Bcl-2蛋白陽性表示癌細胞分化程度高，增殖能力和侵襲力弱。本研究顯示，Bcl-2在預后較好的管腔型乳腺癌中有高表達，同時在組織學分級中，級別越高，Bcl-2的表達率越高，這與Hellemans等[15]報道一致。

乳腺癌是激素依賴型腫瘤，它的生長依賴于體內(nèi)雌孕激素水平，受ER 、PR 的調(diào)控，ER、PR是公認的唯一能預測內(nèi)分泌治療效果的最可靠生物標志物[16,17]，因此了解乳腺癌組織中的ER、PR 的表達極為重要。Gee 等[18,19]指出，Bcl-2蛋白受雌激素調(diào)節(jié)，且多局限在ER、PR 陽性的乳腺癌細胞中，而ER、PR 陽性又是內(nèi)分泌治療的必要條件，故認為Bcl-2高表達患者預后好可能是由于其對激素治療反應好所致。本研究結果表明，Bcl-2的表達與ER、PR的表達呈正相關的關系[20]，這也與Rolland P[19]報道一致。因此，Bcl-2的表達可能為內(nèi)分泌的治療提供很好的指標。臨床研究表明，ER、PR表達為預后好的因素，而HER-2表達為預后不好的因素[12,21]，EGFR高表達通常認為患者腫瘤惡性度高、預后不良[23, 24]。本研究結果顯示，EGFR與ER、PR呈負相關，而與HER-2呈正相關，得到的結論與上述研究一致。本研究主要對EGFR、Bcl-2 的表達及與乳腺癌臨床病理特征之間的關系進行探討，研究結果發(fā)現(xiàn)，EGFR與Bcl-2的表達之間無相關性，所以對EGFR與Bcl-2的共表達未作進一步的探討。

綜上所述，乳腺癌出現(xiàn)EGFR表明惡性程度高，預后差，特別是在三陰性乳腺癌患者表達最高[23]，而Bcl-2在預后較好的管腔型乳腺癌中表達更高。兩者的表達都與組織學分級有關系，組織學分級越高EGFR表達率越高而Bcl-2表達率越低，提示EGFR與Bcl-2的高表達提示乳腺癌表現(xiàn)了更加惡性的臨床病理特征。而EGFR的高表達與Bcl-2的低表達對預后的影響需要本研究進行預后的隨訪調(diào)查。另外，本研究還發(fā)現(xiàn)，EGFR表達與ER、PR呈負相關；Bcl-2表達與ER、PR呈正相關，與HER-2呈負相關，提示EGFR與Bcl-2與激素受體的表達有密切關系。因此，檢測EGFR與Bcl-2表達可以作為乳腺癌發(fā)生、發(fā)展的指標，對評估乳腺癌的生物學行為以及指導臨床治療和預后策略的制定具有重要的臨床意義。

志謝：吉林大學中日友誼醫(yī)院普外科提供乳腺癌病理組織標本。

【參考文獻】

[1]Balslev I, Axelsson C K, Zedeler K,etal. The Nottingham Prognostic Index applied to 9,149 patients from the studies of the Danish Breast Cancer Cooperative Group (DBCG) [J]. Breast Cancer Res Treat, 1994, 32(3):281-290.

[2]Burness M L, Grushko T A, Olopade O I.Epidermal growth factor receptor in triple-negative and basal-like breast cancer: promising clinical target or only a marker[J]. Cancer J, 2010, 16(1):23-32.

[3]Park S, Koo J S, Kim M S,etal. Characteristics and outcomes according to molecular subtypes of breast cancer as classified by a panel of four biomarkers using immunohistochemistry [J]. Breast, 2012, 21(1):50-57.

[4]Gehrig P A, Van L L, Olatidoye B. Estrogen receptor status, determined by immunohistochemistry, as a predictor of the recurrence of stage I endometrial carcinoma [J]. Cancer, 1999, 86(10):2083-2089.

[5]《乳腺癌HER2檢測指南》編寫組.乳腺癌HER2檢測指南(2009版)[J]. 中華病理學雜志, 2009, 38(12):836-840.

[6]許良中，楊文濤. 免疫組織化學結果的判定標準 [J]. 中華癌癥學雜志, 2006, 38(6): 1-3.

[7]Cheang, M C, Chia S K, Voduc D,etal. Ki67 index, HER2 status, and prognosis of patients with luminal B breast cancer [J]. J Natl Cancer Inst, 2009, 101(10):736-750.

[8]李彥國，王歡，張秉明，等. 農(nóng)村婦女乳腺癌危險因素的病例對照研究[J].中國醫(yī)刊,2013,48(7)：75-77.

[9]盛唯瑾，高瑞娟，甄永蘇. EGFR單鏈抗體-力達霉素融合蛋白抑制人乳腺癌MCF-7細胞增殖與侵襲的研究[J]. 醫(yī)學研究雜志，2014，43(6)：25-30.

[10]李珊珊. EGFR在乳腺癌中的表達及意義[J].山東醫(yī)藥，2012,52(20)：89-90.

[11]Nicholson R I. EGFR and cancer prognosis [J]. Eur J Cancer, 2001, 37 (4):9-15.

[12]Nielsen T O, Hsu F D, Jensen K,etal. Immunohistochemical and clinical characterization of the basal-like subtype of invasive breast carcinoma [J]. Clin Cancer Research, 2004, 10(16):5367-5374.

[13]Kim M J, Ro J Y, Ahn S H,etal. Clinicopathologic significance of the basal-like subtype of breast cancer: a comparison with hormone receptor and Her2/neu-overexpressing phenotypes [J]. Human pathology, 2006, 37(9):1217-1226.

[14]Zaha D C, Lazar E, Lazureanu C,etal. Clinicopathologic features and five years survival analysis in molecular subtypes of breast cancer [J]. Rom J Morphol Embryol, 2010, 51(1):85-89.

[15]Hellemans P, van Dam P A, Weyler J,etal. Prognostic value of bcl-2 expression in invasive breast cancer [J]. Br J Cancer, 1995, 72(2):354-360.

[16]徐兵河.復發(fā)轉(zhuǎn)移乳腺癌的化學治療[J].中國實用內(nèi)科雜志，2007，24(4)：1913-1916.

[17]涂小煌. 乳腺癌的化療方案[J].中國臨床醫(yī)師，2011,39(7)：9-11.

[18]Gee J M, Ellis I O, Robertson J F,etal. Immunocytochemical localization of BCL-2 protein in human breast cancers and its relationship to a series of prognostic markers and response to endocrine therapy [J]. Int J Cancer, 1994, 59(5):619-628.

[19]Rolland P, Spendlove I, Madjd Z,etal. The p53 positive Bcl-2 negative phenotype is an independent marker of prognosis in breast cancer [J]. Int J Cancer, 2007, 120(6):1311-1317.

[20]dos Santos LG, Lopes-Costa P V, dos Santos A R,etal. Bcl-2 oncogene expression in estrogen receptor-positive and negative breast carcinoma [J]. Eur J Gynaecol Oncol, 2008, 29(5):459-461.

[21]李忻，張韞，楊鑫，等. 浸潤性乳腺癌組織中人表皮生長因子受體2表達的檢測方法比較[J].中日友好醫(yī)院學報，2012，26(6)：326-328.

[22]McCawley L J, O’Brien P, Hudson L G. Overexpression of the epidermal growth factor receptor contributes to enhanced ligand-mediated motility in keratinocyte cell lines[J]. Endocrinology. 1997, 138(1):121-127.

[23]Sibilia M, Fleischmann A, Behrens A,etal. The EGF receptor provides an essential survival signal for SOS-dependent skin tumor development [J]. Cell,2000,102(2):211-220.

[24]謝文秀,楊俊蘭,焦順昌,等.乳腺癌分子分型與腋窩淋巴結轉(zhuǎn)移相關性分析[J]. 軍醫(yī)進修學院學報, 2011, 32(7): 32-33.

(2014-11-30收稿2015-01-20修回)

(責任編輯梁秋野)