DADS通過Chk1/Cdc25C/CyclinB1/CDK1通路誘導(dǎo)白血病HL-60細胞G2/M期阻滯

吉曉霞，曾　穎，何　潔，譚　暉，易　嵐，黃衛(wèi)國，伍尤華，蘇　琦

(1.山西省運城市中心醫(yī)院病理科，山西 運城　044000；2.南華大學(xué)腫瘤研究所，湖南省高校腫瘤細胞與分子病理學(xué)重點實驗室，湖南 衡陽　421002；3.南華大學(xué)附屬第一醫(yī)院腫瘤科，湖南 衡陽　421002)

DADS通過Chk1/Cdc25C/CyclinB1/CDK1通路誘導(dǎo)白血病HL-60細胞G2/M期阻滯

吉曉霞1,2，曾穎2，何潔2，譚暉2，易嵐2，黃衛(wèi)國2，伍尤華3，蘇琦2

(1.山西省運城市中心醫(yī)院病理科，山西 運城044000；2.南華大學(xué)腫瘤研究所，湖南省高校腫瘤細胞與分子病理學(xué)重點實驗室，湖南 衡陽421002；3.南華大學(xué)附屬第一醫(yī)院腫瘤科，湖南 衡陽421002)

摘要：目的研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide, DADS)誘導(dǎo)人白血病HL-60細胞周期阻滯及其分子機制。方法采用細胞計數(shù)、軟瓊脂克隆形成實驗及流式細胞術(shù)觀察DADS對HL-60細胞生長抑制與周期阻滯效應(yīng)。Western blot檢測DADS對HL-60細胞Chk1/2以及下游分子的影響。結(jié)果細胞計數(shù)顯示，60、120 μmol·L-1DADS處理后，其群體倍增時間從19.14 h增加到35.03、71.82 h (P<0.05)。軟瓊脂克隆形成實驗表明，30、60、90、120 μmol·L-1DADS對HL-60細胞克隆形成率的抑制率分別為35.06%、62.10%、93.79%、99.35% (P<0.05)。流式細胞術(shù)檢測顯示， 60和120μmol·L-1DADS分別作用HL-60細胞24 h后，DADS可呈時間與濃度依賴性誘導(dǎo)HL-60細胞G2/M期阻滯 (P<0.05)。60 μmol·L-1DADS處理HL-60細胞后，p-Chk1可呈時間依賴性上調(diào) (P<0.05)，而Chk1與Chk2總蛋白和p-Chk2無改變 (P>0.05)。并且，Cdc25C、CyclinB1和CDK1分別呈時間依賴性下調(diào) (P<0.05)，但 14-3-3蛋白表達沒有改變 (P>0.05)。結(jié)論DADS能夠抑制HL-60細胞增殖，并通過Chk1/Cdc25C/CyclinB1/CDK1通路阻滯HL-60細胞于G2/M期。

關(guān)鍵詞：二烯丙基二硫；人白血病HL-60細胞；增殖抑制；G2/M期阻滯；Chk1/Cdc25C/CyclinB1/CDK1通路；分子機制

白血病是常見惡性腫瘤之一，全世界每年新發(fā)病例約30萬，死亡率高達70%，嚴重威脅著人類健康[1]。研究表明，二烯丙基二硫(diallyl disulfide, DADS)可抑制白血病等多種腫瘤增殖，其機制與增加組蛋白乙?；揎?，阻滯腫瘤細胞周期，促進腫瘤細胞凋亡和誘導(dǎo)分化等有關(guān)[2]。我們前期工作證實，DADS能明顯抑制人白血病HL-60細胞增殖和誘導(dǎo)凋亡，其機制與G2/M期阻滯，抑制ERK和激活p38、JNK信號通路，活化caspase，下調(diào)Bag-1、Bcl-2、PCNA、Mcl-1、CDK1，上調(diào)Fas-L、Bax，通過上調(diào)Rac2介導(dǎo)Rac2-NADPH氧化酶-ROS-JNK通路等有關(guān)[3-8]。

腫瘤是多基因變化導(dǎo)致細胞周期紊亂的一類疾病，G2/M期檢測點激酶Chk1和Chk2在細胞癌變過程中起著至關(guān)重要的作用，其介導(dǎo)Cdc25 磷酸酶與Cdks的活化和抑制是控制細胞G2/M期的關(guān)鍵[9]。本研究探討DADS誘導(dǎo)HL-60細胞周期阻滯的分子機制，了解Chk與細胞周期之間的相互作用，從而為DADS防治HL-60細胞的信號干預(yù)治療提供新思路。

1材料與方法

1.1細胞與試劑HL-60細胞為人急性髓細胞性白血病細胞株，由本實驗室保存。DADS：Fluka公司產(chǎn)品，d420=1.0，Mr 146.28，純度80%，含10%~20% DAS。DADS與Tween 80以1 ∶2的比例充分溶解后，加入體積分數(shù)為0.90的生理鹽水稀釋100倍，震蕩混勻，作為母液保存于-20℃冰箱中，臨用時將此母液稀釋至所需濃度。Tween 80為華美公司產(chǎn)品。培養(yǎng)液：Gibco公司產(chǎn)品。RPMI 1640培養(yǎng)基10.4 g溶于1 000 mL蒸餾水中，加NaHCO32 g，用1 mol·L-1HCl調(diào)pH值為7.0，抽濾除菌，4℃冰箱保存，臨用時加10%小牛血清。小牛血清：杭州四季青生物工程公司產(chǎn)品，臨用時經(jīng)56℃水浴30 min滅活，-20℃保存。BCA蛋白定量檢測試劑盒購自美國Pierce公司；顯影定影試劑盒、麗春紅染色液、預(yù)染蛋白Marker購于Fermentas公司。ECL發(fā)光檢測試劑盒、Chk1(FL-467)、Chk2(H-300)、14-3-3 (aC-12)與CDK1多克隆抗體購于Santa Cruz公司；P-Chk1 (Ser345) 多克隆抗體購自Cell Signaling Technology公司；P-Chk2 (T387) 多克隆抗體購于美國Abzoom公司；羊抗兔二抗和羊抗鼠二抗購自KPL 公司。

1.2細胞培養(yǎng)在37℃、飽和濕度、5%CO2孵箱中常規(guī)培養(yǎng)，培養(yǎng)液為含10%小牛血清的RPMI-1640，每2~3天換液傳代，取對數(shù)生長期細胞用于實驗。對照組不加DADS，溶媒對照組加等量的Tween 80，處理組加DADS。

1.3細胞計數(shù)取對數(shù)生長期細胞，接種于24孔培養(yǎng)板，加處理因素，每24 h取4復(fù)孔細胞計數(shù)，每孔計數(shù)4次，求出3孔細胞的均值及標準差，連續(xù)計數(shù)4 d，繪制細胞生長曲線。腫瘤細胞群體倍增時間按公式計算：TD=t×lg2/lg(Nt/N0)(Nt為t時間的細胞數(shù)，N0為初種細胞數(shù))。

1.4軟瓊脂克隆形成實驗取對數(shù)生長期細胞，離心，加培養(yǎng)基重懸使之分散成單個細胞，調(diào)整細胞密度至1.25×106·L-1。取出37℃保溫的不同密度的細胞懸液4 mL移入小燒杯中，加入50℃的5%瓊脂1 mL，迅速混勻，即配成0.2%瓊脂培養(yǎng)基，立即澆入24孔培養(yǎng)板中，每孔加1 mL，置室溫使瓊脂凝固。培養(yǎng)板移入CO2孵箱，37℃、5%CO2及飽和濕度下培養(yǎng)2~3周。倒置顯微鏡下計數(shù)直徑大于75 μm或含50個細胞以上的克隆，并計算形成抑制率。實驗重復(fù)3次。

1.5流式細胞儀檢測設(shè)立空白對照組和藥物處理組，藥物處理組包括30、60、120 μmol·L-1DADS分別作用24 h。1 000 r·min-1離心5 min，收集培養(yǎng)細胞，預(yù)冷PBS吹打重懸，離心沉淀，重復(fù)1次。用4℃預(yù)冷的75%乙醇固定細胞，冰盒送檢。樣本上機前離心洗滌，棄上清，加1 g·L-1碘化丙啶50 μL，振蕩混勻，避光置冰箱30 min，上機檢測時300目尼龍網(wǎng)濾過，計數(shù)10 000個細胞，進行細胞周期和DNA含量分析。實驗重復(fù)3次。

1.6Western blot分別收集細胞，冰PBS洗兩次，以1×107個細胞濃度加入100 μL裂解液(100 mmol·L-1NaCl, 10 mmol·L-1Tris-HCl pH 7.6,1 mmol·L-1EDTA pH8.0,1 mg·L-1Aprotinin, 100 mg·L-1PMSF)，冰上裂解1 h，12 000 r·min-1離心10 min，吸出上清液，即為細胞總蛋白。根據(jù)Bradford法，分光光度計在570 nm波長處測定光吸收值，以溶劑為空白對照，牛血清白蛋白為標準繪制曲線，依據(jù)標準曲線推算蛋白質(zhì)含量。收集蛋白，變性后經(jīng)10%SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳后轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，用含5%牛血清白蛋白的TBST(Tris-HCl 20 mmol·L-1，NaCl 137 mmol·L-1含0.1% Tween-20)封閉1h，一抗4℃孵育過夜，TBST洗3次，每次5 min;相應(yīng)的二抗孵育1 h，TBST洗3次，每次5 min，化學(xué)發(fā)光劑檢測蛋白質(zhì)印跡，薄層掃描儀測定印跡區(qū)帶的光密度值。以β-actin作為內(nèi)參，實驗重復(fù)3次。

2結(jié)果

2.1細胞群體倍增時間HL-60細胞群體倍增時間為19.14 h，隨著DADS濃度增加到60、120 μmol·L-1，細胞群體倍增時間分別延長到35.03、71.82 h(P<0.05)。Tween 80和30 μmol·L-1DADS對HL-60細胞群體倍增時間無明顯影響 (P>0.05)。

2.2DADS對HL-60細胞克隆形成的影響Fig 1顯示，30、60、90、120 μmol·L-1DADS對HL-60細胞軟瓊脂克隆形成的抑制率分別為35.06%、62.10%、93.79%、99.35%，抑制作用呈劑量依賴關(guān)系 (P<0.05)。Tween 80對HL-60克隆形成無明顯影響 (P>0.05)。

Fig 1Clone formation of HL-60 cells by DADS (×20)

A: Control HL-60 cells; B: Tween-80; C: DADS 30 μmol·L-1; D: DADS 60 μmol·L-1; E: DADS 90 μmol·L-1; F: DADS 120 μmol·L-1

2.3DADS對HL-60細胞的周期阻滯作用Fig 2顯示，60、120 μmol·L-1DADS作用HL-60細胞24 h后，G2/M期百分率增加到17.6%、22.3%，與對照組比較差異有顯著性 (P<0.05)。表明DADS可阻滯HL-60細胞于G2/M期。

Fig 2Effect of G2/M in HL-60 cells treated by

DADS at different time

A: Control; B: DADS 30 μmol·L-1; C:DADS 60 μmol·L-1; D:DADS 120 μmol·L-1

2.4DADS對HL-60細胞Chk1和磷酸化Chk1表達的影響Fig 3顯示，60 μmol·L-1DADS作用HL-60細胞1 h后，與對照組比較，p-Chk1表達呈時間依賴性上調(diào) (P<0.05)；Chk1總蛋白表達無改變 (P>0.05)。

Fig 3Expression of Chk1 and p-Chk1

in HL-60 cells treated by DADS

*P<0.05vscontrol (0 h)

2.5DADS對HL-60細胞Chk2和p-Chk2表達的影響Fig 4顯示，60 μmol·L-1DADS在作用不同時間后，與對照組比較，Chk2與p-Chk2隨時間延長表達無明顯差異 (P>0.05)。

Fig 4Expression of Chk2 and p-Chk2

in HL-60 cells treated by DADS

2.6DADS對HL-60細胞Chk下游分子Cdc25C表達的影響Fig 5顯示，60 μmol·L-1DADS處理HL-60細胞4 h后，與對照組比較，Cdc25C表達開始下降，到36 h，Cdc25C下調(diào)90.16%，DADS呈時間依賴性抑制Cdc25C表達 (P<0.05)。

Fig 5Effect of DADS on expression of Cdc25C in HL-60 cells

*P<0.05vscontrol

2.7DADS對HL-60細胞Chk下游分子Cyclin B1表達的影響Fig 6顯示，DADS處理4 h后，Cyclin B1的表達即開始下調(diào)，DADS處理12 h后，CyclinB1的表達明顯下調(diào) (P<0.05)；36 h時，與對照組比較，CyclinB1表達明顯下降89.02% (P<0.05)。

Fig 6Effect of DADS on expression of CyclinB1 in HL-60 cells

*P<0.05vscontrol

2.8DADS對HL-60細胞Chk下游分子CDK1表達的影響Fig 7顯示，60 μmol·L-1DADS呈時間依賴性抑制HL-60細胞CDK1表達 (P<0.05)。DADS處理4 h后，CDK1表達即開始下調(diào)，處理8 h后，CDK1表達明顯下降，到36 h時，CDK1表達下調(diào)34.87% (P<0.05)。

Fig 7Effect of DADS on expression of CDK1 in HL-60 cells

*P<0.05vscontrol

2.9DADS對HL-60細胞14-3-3蛋白表達的影響60 μmol·L-1DADS處理后，隨時間的延長，14-3-3蛋白表達較對照組無明顯差異 (P>0.05)。

3討論

本研究采用細胞計數(shù)與軟瓊脂克隆形成實驗發(fā)現(xiàn)，DADS可明顯抑制白血病HL-60細胞增殖，延長細胞群體倍增時間，抑制細胞克隆形成，并隨濃度的增加而作用增強。流式細胞術(shù)分析顯示，60、120 μmol·L-1DADS作用HL-60細胞24 h后，DADS呈濃度依賴性阻滯HL-60細胞G2/M期，表明DADS抑制HL-60細胞增殖效應(yīng)與G2/M期阻滯有密切關(guān)系。

細胞周期調(diào)控在腫瘤的發(fā)生和治療中起著重要的作用。DNA損害有G1/S、S與G2/M檢查點，這些檢查點能夠使DNA容易修復(fù)和促進未修復(fù)的細胞凋亡。抑制腫瘤細胞檢查點，已成為腫瘤治療的新策略。G2/M期檢測點能防止受損的DNA和未完成復(fù)制的DNA進入有絲分裂，故G2/M期阻滯顯得更為重要。目前，已經(jīng)研發(fā)許多特異性靶向檢查點的化合物，其靶點之一是Chk1[7]。目前認為，調(diào)控細胞周期G2/M阻滯途徑主要是ATR/Chk1/Cdc25C。當(dāng)DNA發(fā)生損傷時，Chk1在絲氨酸317和345位點被ATR磷酸化?；罨腃hk1可通過特異性磷酸化Cdc25C，阻止Cdc25C對Cdc2的去磷酸化作用，從而抑制CDK1與Cyclin B復(fù)合物的活性，阻滯細胞在G2/M期[8-15]。Yu 等[8]研究顯示，mTOR抑制劑RAD001與輻射結(jié)合可通過活化Chk1，抑制CDK1與cyclin B1復(fù)合物形成，阻滯口腔癌SCC4細胞于G2/M。NSC746364可通過ATR/Chk1通路下調(diào)cyclin B1與激活caspase-3，誘導(dǎo)肺癌A549細胞G2/M阻滯與凋亡[9]。MMEQ可促進Chk1與Cdc25c表達，誘導(dǎo)膀胱癌TSGH8301細胞G2/M阻滯[10]。洋地黃毒苷及其衍生物D6-MA誘導(dǎo)肺癌NCI-H460細胞凋亡與G2/M阻滯和Chk1/2和p53相關(guān)蛋白下調(diào)有關(guān)[11]。鬼臼毒素HY-1可通過ATR-Chk1-Cdc25C通路調(diào)控結(jié)腸癌HCT116細胞G2/M阻滯[12]。雞血藤能夠通過磷酸化Chk1/Chk2抑制乳腺癌MCF-7細胞和結(jié)腸癌HT-29細胞增殖與阻滯在G2/M[13]。Glionitrin A可活化ATM-ATR-Chk1/2通路，上調(diào)p-histone 2AX，促進前列腺癌DU145細胞S與G2/M阻滯與凋亡[14]。我們研究顯示，DADS可磷酸化Chk1，而不是Chk2，下調(diào)Cdc25C與Cyclin B1，阻滯人胃癌BGC823細胞在G2/M期。并且，Chk1轉(zhuǎn)染BGC823細胞可增加G2/M阻滯，而沉默Chk1可消除DADS下調(diào)Cdc25C與Cyclin B1和G2/M阻滯。但是，Chk2高表達與沉默Chk2無此作用。表明DADS是通過特異性Chk1磷酸化，而不是Chk2，調(diào)控Chk1/Cdc25C/Cyclin B1通路誘導(dǎo) BGC823細胞G2/M阻滯[15]。

關(guān)于白血病的研究，Yuan 等[16]發(fā)現(xiàn)，Pim 激酶可在Ser 280磷酸化Chk1誘導(dǎo)急性髓系白血病細胞凋亡與G2/M阻滯。Chk1在熱應(yīng)激誘導(dǎo)白血病Jurkat細胞凋亡與G2/M阻滯起著重要作用，Chk1抑制劑與干擾Chk1可廢除熱應(yīng)激誘導(dǎo)白血病Jurkat細胞凋亡與G2/M檢查點活化，有趣的是，ATR-Chk1途徑優(yōu)先活化，而不是ATR-Chk2[17]。本研究結(jié)果顯示，DADS處理HL-60細胞后，p-Chk1表達上調(diào)，而p-Chk2沒有改變，表明DADS激活Chk1，而不是Chk2，并且，Cdc25C呈時間依賴性表達下降，隨即Cyclin B1和CDK1幾乎同時下調(diào)，表明Chk1活化可抑制Cdc25C活性，影響CDK1與Cyclin B1復(fù)合物的活化，從而導(dǎo)致G2/M阻滯，提示DADS通過Chk1/Cdc25C/CyclinB1/CDK1通路導(dǎo)致HL-60細胞阻滯于G2/M期。本研究發(fā)現(xiàn)14-3-3蛋白表達沒有改變，其是否與Cdc25C結(jié)合調(diào)控Cdc25C活性，影響Cyclin B1和CDK1作用尚待進一步研究。

參考文獻:

[1]Jemal A, Bray F, Center M M, et al. Global cancer statistics [J].CACancerJClin, 2011, 61(2):69-90.

[2]Yi L, Su Q. Molecular mechanisms for the anti-cancer effects of diallyl disulfide [J].FoodChemToxicol,2013, 57:362-70.

[3]Tan H, Ling H, He J, et al. Inhibition of ERK and activation of p38 are involved in diallyl disulfide induced apoptosis of leukemia HL-60 cells[J].ArchPharmRes, 2008, 31(6): 786-93.

[4]Yi L, Ji X X, Tan H, et al. Involvement of Mcl1 in diallyl disulfide-induced G2/M cell cycle arrest in HL-60 cells.OncolRep, 2012, 27(6):1911-7.

[5]Yi L, Ji X X, Lin M, et al. Diallyl disulfide induces apoptosis in human leukemia HL-60 cells through activation of JNK mediated by reactive oxygen[J].Pharmazie, 2010, 65(9): 693-8.

[6]Yi L, Ji X X, Tan H, et al. Role of Ras-related C3 botulinum toxin substrate 2 (Rac2), NADPH oxidase and reactive oxygen species in diallyl disulphide-induced apoptosis of human leukaemia HL-60 cells [J].ClinExpPharmacolPhysiol, 2010, 37(12):1147-53.

[7]Bucher N,Britten C D. G2checkpoint abrogation and checkpoint kinase-1 targeting in the treatment of cancer [J].BrJCancer,2008, 98(3):523-8.

[8]Yu C C,Hung S K,Liao H F,et al. RAD001 enhances the radiosensitivity of SCC4 oral cancer cells by inducing cell cycle arrest at the G2/M checkpoint [J].AnticancerRes,2014, 34(6):2927-35.

[9]Chung Y L,Pan C H,Liou W H,et al. NSC746364, a G-quadruplex-stabilizing agent, suppresses cell growth of A549 human lung cancer cells through activation of the ATR/Chk1-dependent pathway [J].JPharmacolSci,2014, 124(1):7-17.

[10]Hsu S C, Yu C C, Yang J S, et al. A novel synthetic 2-(3-methoxyphenyl)-6,7-methylenedioxoquinolin-4-one arrests the G2/M phase arrest via Cdc25c and induces apoptosis through caspase-and mitochondria-dependent pathways in TSGH8301 human bladder cancer cells [J].IntJOncol, 2012, 40(3):731-8.

[11]Elbaz H A, Stueckle T A, Wang H Y, et al. Digitoxin and a synthetic monosaccharide analog inhibit cell viability in lung cancer cells [J].ToxicolApplPharmacol, 2012, 258(1):51-60.

[12]Zhao Y, Wu Z, Zhang Y, et al. HY-1 induces G(2)/M cell cycle arrest in human colon cancer cells through the ATR-Chk1-Cdc25C and Weel pathways [J].CancerSci, 2013, 104(8):1062-6.

[13]Wang Z Y, Wang D M, Loo T Y, et al. Spatholobus suberectus inhibits cancer cell growth by inducing apoptosis and arresting cell cycle at G2/M checkpoint[J].JEthnopharmacol, 2011, 133(2):751-8.

[14]Kim Y J, Park H B, Yoo J H, et al. Glionitrin A, a new diketopiperazine disulfide, activates ATM-ATR-Chk1/2 via 53BP1 phosphorylation in DU145 cells and shows antitumor effect in xenograft model [J].BiolPharmBull, 2014, 37(3): 378-86.

[15]Bo S, Hui H, Li W, et al. Chk1, but not Chk2, is responsible for G2/M phase arrest induced by diallyl disulfide in human gastric cancer BGC823 cells [J].FoodChemToxico, 2014, 68:61-70.

[16]Yuan L L, Green A S, Bertoli S, et al. Pim kinases phosphorylate Chk1 and regulate its functions in acute myeloid leukemia [J].Leukemia, 2014, 28(2): 293-301.

[17]Furusawa Y, Iizumi T, Fujiwara Y, et al. Inhibition of checkpoint kinase 1 abrogates G2/M checkpoint activation and promotes apoptosis under heat stress [J].Apoptosis, 2012, 17(1):102-12.

網(wǎng)絡(luò)出版時間：2015-1-9 13:37網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/doi/10.3969/j.issn.1001-1978.2015.02.015.html

DADS induces G2/M arrest through Chk1/Cdc25C/CyclinB1/

CDK1 pathway in human leukemia HL-60 cells

JI Xiao-xia1,2, ZENG Ying2, HE Jie2, TAN Hui2, YI Lan2, HUANG Wei-guo2, WU You-hua3, SU Qi2

(1.DeptofPathology,YunchengCentralHospital,YunchengShanxi044000,China; 2.CancerResearchInstitute,

KeyLaboratoryofCancerCellularandMolecularPathologyofHunanProvincialUniversity,HengyangHunan421002,China;

3.DeptofOncology,theFirstAffiliatedHospital,UniversityofSouthChina,HengyangHunan421002,China)

AbstractAimTo study the effects of cycle arrest and molecular mechanism in human leukemia HL-60 cells induced by diallyl disulfide (DADS). MethodsCell count, colony formation in soft agar experiments and flow cytometry analysis were employed to observe the DADS-induced cell growth inhibition and the effect of cycle arrest in HL-60 cells. The expressions of Chk1/2 and its downstream element in HL-60 cells were detected by Western blot. ResultsCell count revealed that population doubling time increased to 35.03 h and 71.82 h, respectively, from 19.14 h in HL-60 cells treated with 60 and 120 μmol·L-1DADS (P<0.05). Colony formation in soft agar experiments showed that colony formation inhibition rate of HL-60 cells exposed to 30, 60, 90 and 120 μmol·L-1DADS increased to 35.06%, 62.10%, 93.79% and 99.35%, respectively (P<0.05). Flow cytometry analysis exhibited that HL-60 cells treated with 60 and 120 μmol·L-1DADS for 24 h and 48h arrested in G2/M phase in a concentration-and time-dependent manner (P<0.05). Western blot disclosed that the expression of p-Chk1 increased in a time-dependent manner (P<0.05); however, Chk1, Chk2 and p-Chk2 were not changed in HL-60 cells treated with 60 μmol·L-1DADS (P>0.05). The expression of Cdc25C, CyclinB1 and CDK1 decreased after treated with 60 μmol·L-1DADS in a time-dependent manner (P<0.05), but the expression of 14-3-3 protein did not change (P>0.05). ConclusionDADS can inhibit the proliferation of HL-60 cells, and induce G2/M arrest through Chk1/Cdc25C/CyclinB1/CDK1 pathway.

Key words:diallyl disulfide; leukemia HL-60 cells; growth inhibition; G2/M arrest; Chk1/Cdc25C/CyclinB1/CDK1 pathway; molecular mechanism

通訊作者伍尤華(1962-)，男，主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師，研究方向：惡性腫瘤的化學(xué)治療，，E-mail: 330270372@qq.com; 蘇琦(1945-)，男，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向：腫瘤發(fā)生及防治的分子機制，，Tel/Fax: 0734-8281547，E-mail:suqi1945@163.com

作者簡介：曾穎(1979-)，女，博士，副教授，研究方向：腫瘤防治的分子機制，并列第一作者，E-mail: zengying2003@126.com;

基金項目：國家自然科學(xué)基金資助項目(No 31201027, 81100375)；湖南省教育廳科學(xué)研究項目(No 10C1184)

收稿日期:2014-11-09,修回日期:2014-12-08

文獻標志碼：中國圖書分類號：R329.24；R329.28；R733.7；R916.4；R979.1

doi:10.3969/j.issn.1001-1978.2015.02.015