內(nèi)源性甲醛及炎癥介質(zhì)在血管性癡呆中的研究

武海燕，馬麗，張力，曹萌，張守字，蘇濤，赫榮喬

血管性癡呆（vascular dementia，VaD）是由于腦血管疾病導(dǎo)致的認知功能障礙綜合征，以認知功能減退和精神障礙為主要臨床表現(xiàn)，在發(fā)展中國家發(fā)病率呈現(xiàn)逐年升高趨勢[1]。目前VaD的診斷主要依據(jù)患者的危險因素、病史、查體及影像學(xué)等指標，尚無特異性生化標志物協(xié)助臨床診斷[2]。中國科學(xué)院生物物理研究所既往研究發(fā)現(xiàn)內(nèi)源性甲醛是誘發(fā)阿爾茨海默病性癡呆發(fā)病的重要因素[3-8]，但人體內(nèi)內(nèi)源性甲醛的產(chǎn)生是否可導(dǎo)致VaD，目前尚無相關(guān)研究。國外有學(xué)者推測血清中的炎癥因子與凝血因子水平升高易導(dǎo)致血栓形成，加速動脈粥樣硬化病變進展，促進VaD的發(fā)病與進展[9-10]。本研究通過測定VaD患者尿液中的甲醛濃度及血漿炎癥因子水平，探索內(nèi)源性甲醛及炎癥因子與血管性癡呆的關(guān)系，為臨床VaD的早期診斷提供依據(jù)。

1 對象與方法

1.1 研究對象 本研究采用隨機單盲橫斷面研究，隨機抽取2014年6月-2016年6月期間在北京老年醫(yī)院精神心理科門診和病房住院VaD患者為試驗組。對照組：隨機抽取社區(qū)內(nèi)無腦血管疾病病史且符合該研究納入條件的非VaD者，盡可能選取與VaD組患者同等文化水平，年齡相似的無認知功能障礙和行為障礙等其他中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病者。

入選標準：①年齡≥60歲；②符合VaD診斷標準[11]；③患者家屬同意并簽署知情同意書。排除標準：①阿爾茨海默?。ˋlzheimer’s disease，AD）、先天性愚型、頭顱外傷、癲癇等其他疾病導(dǎo)致的認知功能障礙；②患有惡性腫瘤、嚴重肝腎功能異常、急性心肌梗死和嚴重心力衰竭患者。

研究對象入選后收集其受教育程度、吸煙史、飲酒史、體質(zhì)指數(shù)（body mass index，BMI）等一般臨床資料。

1.2 診斷標準 VaD符合美國神經(jīng)病學(xué)、語言障礙和卒中-老年性癡呆和相關(guān)疾病學(xué)會的VaD診斷標準[11]，其中采用簡易智能量表（Mini-Mental State Examination，MMSE）進行癡呆篩選，MMSE在相應(yīng)教育程度分值以下為癡呆（文盲≤17分，小學(xué)文化≤20分，初中以上文化≤24分）。對癡呆患者的嚴重程度界定為：18～24分為輕度癡呆；16～17分為中度程度；≤15分為重度癡呆[11]。原發(fā)性高血壓的診斷標準：在未服用降壓藥物情況下，按照標準的血壓測量方法，同日不同時間2次或不同日2次測量收縮壓＞140 mmHg和（或）舒張壓＞90 mmHg[12]，排除腎動脈狹窄、腎功能不全或衰竭、嗜鉻細胞瘤、甲狀腺功能亢進、主動脈縮窄等繼發(fā)性高血壓疾病。

吸煙史是指既往連續(xù)或累積吸煙6個月或以上者。BMI=體重（kg）/身高2（m2）。冠狀動脈粥樣硬化性疾病和高脂血癥的診斷參考美國心臟病學(xué)會指南推薦的標準[13]。

1.3 炎性因子與甲醛濃度測定 采集入選對象清晨空腹靜脈血3 ml，注于肝素抗凝管中搖勻，1 h內(nèi)離心后置于-80℃冰箱。

留取觀察對象清晨中段尿液8 ml，隨機編碼后送至中科院生物物理所，測定尿液內(nèi)源性甲醛（formaldehyde，F(xiàn)A）的含量，以尿液中甲醛濃度除以血肌酐（creatinine，Cr）濃度值（FA/Cr）作為內(nèi)源性甲醛校正濃度。

采用酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）方法統(tǒng)一測定血漿白介素-2（interleukin-2，IL-2）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和尿液內(nèi)源性甲醛濃度，試劑盒由晶美生物工程有限公司提供。血液標本也由中科院生物物理所進行生化檢測。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行處理，計量資料服從正態(tài)分布，用表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗，P＜0.05認為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般資料 研究共納入9 6例研究對象，其中VaD組42例，對照組54例。VaD組患者的平均年齡為（77.05±1.61）歲，對照組為（76.41±1.07）歲，VaD組男性22例（52.38%），對照組男性22例（40.74%），VaD組MMSE得分為（14.85±3.55）分。兩組患者年齡、性別比例、吸煙史、冠狀動脈粥樣硬化性心臟病和高脂血癥均無顯著性差異。VaD組患者中合并高血壓者比例顯著高于對照組（表1）。

2.2 尿液甲醛濃度對照結(jié)果 VaD組患者尿液中的內(nèi)源性甲醛校正濃度較對照組（6.31±0.53vs4.40±0.31）顯著增高。VaD組患者血漿IL-2、TNF-α水平均較對照組高，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（表2）。

表1 觀察對象一般臨床資料

表2 兩組炎癥介質(zhì)及內(nèi)源性甲醛校正濃度比較

3 討論

有統(tǒng)計資料顯示我國VaD的患病率為1.1%～3.0%，主要為60歲以上的老年人群，且呈逐年升高趨勢[12]。VaD已成為僅次于AD的導(dǎo)致老年人癡呆的重要原因，嚴重影響老年人的生存質(zhì)量。國外已有研究顯示，VaD的發(fā)病和高血壓、高脂血癥等血管性危險因素高度相關(guān)[1]。本研究發(fā)現(xiàn)與正常對照組相比較，VaD組患者中合并高血壓者較多（85.71%vs55.56%），而VaD組患者中合并高脂血癥并沒有明顯升高。國人VaD患者的發(fā)病是否與高血壓、高血脂存在相關(guān)性有待于進一步大規(guī)模臨床病例研究結(jié)果來證實。

本研究結(jié)果顯示，與正常對照組相比較，VaD組患者血液中炎性因子（TNF-α和IL-2）水平并沒有明顯升高，而VaD組患者尿液中內(nèi)源性甲醛校正濃度明顯升高。由此可推測尿內(nèi)源性甲醛濃度升高可能是誘導(dǎo)VaD發(fā)病的危險因素。VaD患者體內(nèi)內(nèi)源性甲醛濃度升高可能參與了VaD的發(fā)病與進行性加重等病變過程，其機制有待于進一步深入研究。已有研究表明，內(nèi)源性甲醛代謝失衡在老年認知損傷的發(fā)生發(fā)展中扮演了重要的角色[14]。隨著衰老的進程，機體調(diào)節(jié)內(nèi)源性甲醛的功能下降，尿甲醛隨著衰老的進程而升高，并且與認知功能損害的程度有一定的關(guān)系，因此，由于不同原因而造成內(nèi)源性甲醛水平的長期增高，對中樞神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生的危害加大，造成神經(jīng)細胞功能障礙、變性死亡，可能導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)的甲醛慢性損傷[3]。國內(nèi)已有學(xué)者研究證實，內(nèi)源性甲醛與AD發(fā)病存在相關(guān)性，并闡明了內(nèi)源性甲醛誘導(dǎo)AD發(fā)病及其病程進展的可能機制[15]。

有學(xué)者觀察VaD患者血液中炎性因子水平升高[16]，認為炎癥反應(yīng)參與了VaD發(fā)病的認知功能損害過程，本實驗也檢測了VaD患者血液中的炎性因子（TNF-α、IL-2）的濃度，發(fā)現(xiàn)其水平較對照組稍有增高，但無統(tǒng)計學(xué)意義，可能與本實驗樣本量少有關(guān)。另外，受到觀察對象樣本例數(shù)較少的限制，本研究并沒有進行多因素回歸分析，具體證實高血壓、尿甲醛濃度升高與VaD是否存在相關(guān)性有待于進一步研究。

總之，本研究結(jié)果提示血管性癡呆患者尿甲醛濃度較正常認知老年人明顯升高，今后可進行深入研究，揭示內(nèi)源性甲醛誘導(dǎo)VaD疾病發(fā)病及其進展的機制，以期待內(nèi)源性甲醛有望作為診斷VaD的生物標志物，為臨床VaD的診斷提供早期依據(jù)。

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【點睛】通過對照研究顯示，血管性癡呆患者尿液中內(nèi)源性甲醛校正濃度顯著升高，可能作為尋找血管性癡呆生物標志物的參考。