牛屠宰廠來(lái)源的單增李斯特菌的耐藥性研究

牛屠宰廠來(lái)源的單增李斯特菌的耐藥性研究

馮曉慧1，張琳1，朱立賢2

(1.棗莊學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，山東棗莊277160；2.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，山東泰安271018)

[摘要]了解牛屠宰廠來(lái)源的單增李斯特菌的耐藥性情況.采用牛屠宰廠來(lái)源的的55株單增李斯特菌為研究對(duì)象，采用Kirby-Bauer法檢測(cè)對(duì)16種抗生素的耐藥情況.所檢55株單增李斯特菌株對(duì)青霉素G、諾氟沙星、復(fù)方新諾明等不耐藥，對(duì)頭孢噻吩、多粘菌素B、頭孢噻肟、依諾沙星的耐藥率分別為1.82%、25.45%、36.36%、38.18%，耐3種以上抗生素的有44株，其中耐3種抗生素的27株(49.09%)，耐4種抗生素的17株(30.90%).單增李斯特菌對(duì)4種抗生素存在耐藥情況，并且存在不同程度的多重耐藥情況的菌株，今后應(yīng)加強(qiáng)對(duì)單增李斯特菌的污染情況和耐藥性檢測(cè)，以保證食品安全和人類(lèi)健康.

[關(guān)鍵詞]牛肉；單增李斯特菌；耐藥性[收稿日期]2015-08-07

[基金項(xiàng)目]山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系牛創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào)：SDAIT-12-011-09).

[作者簡(jiǎn)介]馮曉慧(1986-)，女(回族)，山東棗莊人，棗莊學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院助理實(shí)驗(yàn)師，農(nóng)學(xué)碩士，主要從事食品微生物理論研究.

[中圖分類(lèi)號(hào)]O657.32 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

0引言

單核細(xì)胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes，LM，簡(jiǎn)稱(chēng)單增李斯特菌)屬于李斯特菌屬，是常見(jiàn)的食源性致病菌[1]，也是李斯特菌屬中致病力最強(qiáng)的細(xì)菌，20世紀(jì)80年代后，歐美國(guó)家曾多次發(fā)生該菌引起的食物中毒事件，死亡率達(dá)30%以上[2].LM廣泛存在各種生食和即食食品中，包括生肉及熟肉制品、速凍米面食品、奶酪、蔬菜、沙拉和海產(chǎn)品等[3]，其中肉制品的檢出率最高[4-6].

自1988年首次報(bào)道李斯特菌四環(huán)素耐受株以來(lái)[7]，不斷從食品、環(huán)境及臨床李斯特菌病病例中分離到對(duì)一種或多種抗生素耐藥菌株，包括用于治療李斯特菌病抗生素[8-10]，有關(guān)該菌耐藥性問(wèn)題應(yīng)引起重視.目前有關(guān)牛屠宰廠來(lái)源的單增李斯特菌的分子分型抗生素敏感性方面的研究較少，因此本研究對(duì)牛屠宰廠來(lái)源的單增李斯特菌的RAPD分型以及耐藥性情況進(jìn)行了分析，為單增李斯特菌的控制提供依據(jù).

1材料與方法

1.1材料

1.1.1菌株

55株單增李斯特菌實(shí)驗(yàn)室保存，分離自牛屠宰廠肉牛屠宰過(guò)程中的牛胴體及屠宰環(huán)境.單增李斯特菌標(biāo)準(zhǔn)菌株CMCC54002和CMCC54004購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)細(xì)菌保藏管理中心，金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC 25923實(shí)驗(yàn)室保存.

1.1.2培養(yǎng)基和主要試劑

M-H培養(yǎng)基、腦心浸液瓊脂(北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司)、抗生素(杭州天和微生物試劑有限公司).

1.2方法

采用WHO推薦的標(biāo)準(zhǔn)Kirby-Bauer紙片法，使用杭州天和微生物試劑有限公司生產(chǎn)的藥敏紙片及判斷標(biāo)準(zhǔn)，部分判定標(biāo)準(zhǔn)按照NCCLS手冊(cè)2005版.

用接種環(huán)挑取經(jīng)純化、傳代的LM接種于3～5ml M-H肉湯中，35℃培養(yǎng)24 h，用生理鹽水校正菌液濃度至0.5麥?zhǔn)媳葷針?biāo)準(zhǔn)，用無(wú)菌棉拭蘸取已準(zhǔn)備好的菌液，均勻涂布接種于M-H瓊脂平板表面，置室溫干燥3～5 min后用鑷子將含藥片貼于含菌瓊脂平板表面.平板經(jīng)室溫放置15 min再倒放于35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h后，測(cè)量抑菌環(huán)直徑并記錄結(jié)果.每次實(shí)驗(yàn)均用金黃色葡萄球菌ATCC 25923做質(zhì)控.

2結(jié)果與分析

屠宰廠中單增李斯特菌耐藥性監(jiān)測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1、表2.由表1中可以看出單增李斯特菌對(duì)頭孢噻吩、多粘菌素B、頭孢噻肟和依諾沙星耐藥，其耐藥率分別為1.82%，25.45%、36.36%和38.18%；對(duì)青霉素G、諾氟沙星、復(fù)方新諾明、氯霉素、環(huán)丙沙星、四環(huán)素、卡那霉素、紅霉素、慶大霉素、頭孢唑啉、氨芐西林、呋喃妥因均敏感，其中對(duì)諾氟沙星(20%)、氯霉素(1.82%)、環(huán)丙沙星(21.82%)、多粘菌素B(60%)、頭孢噻吩(7.27%)、頭孢噻肟(60%)、呋喃妥因(18.18%)及依諾沙星(49.09%)存在一定程度的中度敏感情況，而對(duì)青霉素G、復(fù)方新諾明、頭孢唑啉、氨芐西林、四環(huán)素、卡那霉素、紅霉素、慶大霉素均為100%敏感，因此推薦為臨床使用時(shí)首選藥物；雖然肉牛屠宰廠中分離的單增李斯特菌對(duì)多數(shù)抗生素耐藥性不高，但是均存在著不同程度的耐藥及多重耐藥性，在55株單增李斯特菌中(表2)，耐3種以上抗生素的有44株，其中耐3種抗生素的27株(49.09%)， 耐4種抗生素的17株(30.90%).

表1　55株單增李斯特菌的抗生素敏感性

表2　55株單增李斯特菌的多重耐藥情況

3討論

由于抗生素的大量濫用，各類(lèi)食源性病原菌的耐藥菌株日益增多，導(dǎo)致多種抗菌藥物治療效果不顯著，食源性致病菌的耐藥性對(duì)食品安全及人類(lèi)健康的影響已經(jīng)引起許多國(guó)家的警惕.有研究報(bào)道，單增李斯特菌可以從質(zhì)?；蚱渌?xì)菌中獲得耐藥性基因[1,2].本研究中55株單增李斯特對(duì)青霉素G、諾氟沙星、復(fù)方新諾明、氯霉素、環(huán)丙沙星、四環(huán)素、卡那霉素、紅霉素、慶大霉素、頭孢唑啉、氨芐西林、呋喃妥因敏感，對(duì)頭孢噻吩、多粘菌素B、頭孢噻肟、依諾沙星部分耐藥，這與其他地方的單增李斯特菌耐藥性相似[3].潘軍航[4]從食品中分離的單增李斯特菌對(duì)多數(shù)抗生素耐藥性不高，對(duì)氨芐青霉素、丁胺卡那霉素、慶大霉素等10種抗生素的耐藥性<5%，尤其是對(duì)甲氧芐氨嘧啶完全敏感.然而陳偉偉[5]調(diào)查泉州市食品中單增的耐藥性發(fā)現(xiàn)，單增李斯特菌對(duì)環(huán)丙沙星中度敏感，對(duì)呋喃妥因耐藥.余淑冰[6]也發(fā)現(xiàn)單增李斯特菌對(duì)依諾沙星和呋妥因耐藥.炊慧霞[7]檢測(cè)河南省34株單增李斯特菌中，有2株對(duì)環(huán)丙沙星耐藥，1株對(duì)氯霉素耐藥，1株對(duì)復(fù)方新諾明耐藥.Pesavento[8]對(duì)生肉及便利店中所檢出的168株單增進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)30.4%的菌株耐三種及以上的抗生素；張麗萍[9]檢測(cè)食品中的單增李斯特菌的耐藥性，15種抗生素有9種產(chǎn)生了耐藥性，并且出現(xiàn)了2株多重耐藥菌株.石磊[10]檢測(cè)豬肉樣本中分離出的78株菌，耐受一種抗生素的有13(16.67%)株，耐受三種或三種以上的抗生素有5(6.41%)株.本研究中牛屠宰廠來(lái)源的單增李斯特菌雖然對(duì)多數(shù)抗生素耐藥性不高，但是存在著不同程度的耐藥及多重耐藥性.多重耐藥性的出現(xiàn)，不僅導(dǎo)致其耐藥性能夠通過(guò)食物鏈、人畜接觸或環(huán)境散播而在人與人，或人獸之間進(jìn)行傳遞，給食源性疾病的防治工作造成較大的困難.

4結(jié)論

55株單增李斯特菌對(duì)4種抗生素存在耐藥性，并且存在不同程度的多重耐藥情況的菌株，今后應(yīng)加強(qiáng)對(duì)單增李斯特菌的污染情況和耐藥性檢測(cè)，以保證食品安全和人類(lèi)健康.

參考文獻(xiàn)

[1]Pintado C M B S,Oliveira A,Pampulha M E,Ferriera M A S S.Prevalence and characterization of Listeria monocytogenes isolated from soft cheese [J].Food Microbiology,2005,22,79-85.

[2]Pourshaban M,Ferrini A M,Cannoni V,Oliva B, Aureli P.Transferable tetracycline resistance in Listeria monocytogenes from food in Italy [J].Journal of Medicine Microbiology,2002,51(7):564-566.

[3]王紅,張正東,陳燕梅,等.自貢市食品中單核細(xì)胞增生李斯特菌污染狀況的調(diào)查及藥敏結(jié)果分析[J]. 四川:現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué),2008,35(23):4679-4683.

[4]潘軍航,梅玲玲,等.食品中單增李斯特菌血清型及耐藥性監(jiān)測(cè)[J].遼寧:中國(guó)公共衛(wèi)生,2008,24(1): 107-108.

[5]陳偉偉,楊育紅,楊毓環(huán),等.泉州市食品中單核細(xì)胞增生李斯特氏菌的定性、定量及耐藥性分析[J].北京:中國(guó)食品衛(wèi)生雜志,2003,15(1):43-45.

[6]余淑冰,梁景濤,周強(qiáng)忠,等.食品中單核細(xì)胞增生李斯特菌分離及藥敏試驗(yàn)的研究[J].北京:中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué),2004,4(4):515-534.

[7]炊慧霞,李文杰,張秀麗,等.2012年河南省食源性單核細(xì)胞增生李斯特菌血清分型及耐藥性分析[J].北京:中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2014,24(12):1800-1803.

[8]Pesavento G,Ducci B,Nieri D,Comodo N,Lo Nostro A.Prevalence and antibiotic susceptibility of Listeria spp.isolated from raw meat and retail foods [J].Food Control,2010,21:708-713.

[9]張麗萍,張克儉,高濤,等.食源性單增李斯特菌血清分型及耐藥性的研究[J].北京:實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué),2013, 20(5): 611-613.

[10]石磊,王文燕,閆鶴.豬肉中單核細(xì)胞增生李斯特菌的分離與耐藥性研究[J].廣東:現(xiàn)代食品科技,2013, 29(12): 2826-2829.

[責(zé)任編輯：閆昕]

Antimicrobial Susceptibility of Listeria monocytogenes from Beef Cattle Processing Plants

FENG Xiao-hui1,ZHANG Lin1, ZHU Li-xian2

(1.College of life science, zaozhuang university, zaozhuang, 277160, China；

2.College of Food Science and Engineering, Shandong Agricultural University, Taian 271018, China)

Abstract：[Objective] Listeria monocytogenes isolates from beef cattle processing plants were examined for antibiotic resistance. [Methods] Antimicrobial susceptibility to 16 kinds of antibiotics of 55 Listeria monocytogenes were determined by Kirby-Bauer method, respectively. [Results] The 55 strains of Listeria monocytogenes were sensitive to penicillin G, norfloxacin, cotrimoxazole etc. Among the 55 Listeria monocytogenes isolates, 1.82% were resistant to cephalothin, followed by resistant to polymyxin B (25.45%), cefotaxime (36.36%), enoxacin (38.18%). 44 strains were resistant to more than 3 kinds of antibiotic, among them 27 strains were resistant to 3 kinds of antibiotic(49.09%), 17 strains were resistant to 4 kinds of antibiotic(30.90%). [Conclusion] Listeria monocytogenes isolates were resistant to 4 antibiotics. Listeria monocytogenes appeared multidrug resistance in different degree. So the contamination and drug resistance of Listeria monocytogenes should be monitored to ensure food safety and human health in the future.

Key words：beef; Listeria monocytogenes; Antimicrobial resistance