卵巢癌腹腔積液中ERCC1表達(dá)與鉑劑相關(guān)性研究

卵巢癌腹腔積液中ERCC1表達(dá)與鉑劑相關(guān)性研究

孔雁1，張寧1，賈琳2，左靜1，張敏3，劉亮1，劉榮風(fēng)1，姜達(dá)1

(1.河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院,河北 石家莊 050000;2.河北省保定市第三醫(yī)院,河北 保定 071000;3.河北省邢臺(tái)市人民醫(yī)院,河北 邢臺(tái) 054000)

摘要：目的探討卵巢癌惡性腹腔積液中ERCC1表達(dá)水平與鉑類藥物化療療效及預(yù)后關(guān)系。方法存在惡性腹腔積液的晚期卵巢癌患者腹水標(biāo)本65例，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)腹水腫瘤細(xì)胞ERCC1蛋白表達(dá)水平。Kaplan Meier生存曲線分析比較不同ERCC1表達(dá)水平患者的中位生存期和無病進(jìn)展時(shí)間。結(jié)果ERCC1的陽(yáng)性率為38.5%。ERCC1低表達(dá)者含鉑方案化療效果優(yōu)于高表達(dá)者,但兩者間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);ERCC1低表達(dá)的患者總生存期(overall survival，OS)明顯長(zhǎng)于高表達(dá)者(P=0.03)。結(jié)論腹腔積液中腫瘤細(xì)胞ERCC1表達(dá)與卵巢癌預(yù)后具有相關(guān)性，與鉑劑化療療效的關(guān)系尚待進(jìn)一步明確。

關(guān)鍵詞：ERCC1；卵巢癌；腹腔積液；鉑劑

中圖分類號(hào)：R 737.31

DOI：10.3969/j.issn.1673-1492.2015.03.016

作者簡(jiǎn)介：?jiǎn)蜗不?1968-),女，河北南皮人，主治醫(yī)師，主要研究方向：宮頸病變；不孕不育。

作者簡(jiǎn)介：鄭建興(1976-)，男，河北唐山人，主治醫(yī)師，主要研究方向：肝膽胰脾疾病的診治。

Studies on Correlation between ERCC1 Expression and Platinum in Ovarian Carcinoma Ascites

KONG Yan1,ZHANG Ning1,JIA Lin2,et al

(1.The Fourth Hospital of Hebei Medical University,Shijiazhuang 050000,Hebei China;

2.The Third Hospital of Baoding,Baoding 071000,Hebei China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the expression of excision repair cross complementation group 1(ERCC1)in ovarian carcinoma ascites and explore the correlation of ERCC1 expression with therapeutic effect of cisplatin and survival time.MethodsAscites were collected from 65 patients from March 2012 to March 2014 at the Fourth Hospital of Hebei Medical University,while the expression of ERCC1 protein was studied by immunocytochemistry staining,and Kaplan Meier survival curve analysis was used to compare median overall survival time and median progression free survival time among the patients of with different expression of ERCC1.ResultsThe positive rates of ERCC1 expression in ovarian Carcinoma samples were 38.5%,while the therapeutic effect of cisplatin in patient with ERCC1 low expression was obviously better than that with ERCC1 high expression(P>0.05).The median overall survival time and progression free survival time of patients with ERCC1 low expression were obviously longer than that with high expression(P=0.03).ConclusionsThe ERCC1 expression in ascites could correlate with prognosis in ovarian carcinoma.

Key words:ERCC1；ovarian carcinoma;ascites;cisplatin

卵巢癌是女性常見惡性腫瘤，治療以含鉑方案化療為主，根據(jù)對(duì)鉑類的敏感程度，分為鉑劑敏感及鉑劑耐藥兩大類型，對(duì)鉑類藥物原發(fā)及繼發(fā)耐藥是導(dǎo)致化療失敗、病情進(jìn)展的主要原因。然而，目前缺乏鉑劑療效預(yù)測(cè)因子，在治療初期無法判斷患者對(duì)鉑劑的敏感程度，故化療方案的選擇有一定盲目性。已有研究表明，卵巢癌組織中DNA修復(fù)基因核苷酸切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因1(excision repaircross complementation group 1,ERCC1)不僅是生存預(yù)后指標(biāo)，也可能預(yù)測(cè)含鉑化療方案的療效。我們通過檢測(cè)卵巢癌患者惡性腹腔積液中ERCC1表達(dá)水平，研究了其表達(dá)情況與鉑類為主的化療方案療效及預(yù)后的關(guān)系。

1資料和方法

1.1　一般資料

2012-03—2014-03月河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院收治的存在惡性腹水的晚期卵巢上皮癌患者腹水標(biāo)本65例，臨床分期均為IV期，PS評(píng)分0~2分。一線給予紫杉醇聯(lián)合鉑劑(順鉑或卡鉑)方案化療。其中漿液性囊腺癌28例，黏液性囊腺癌15例，子宮內(nèi)膜樣癌10例，其他類型12例；高、中分化癌27例，低分化癌38例。隨訪至2014-12月,隨訪率為100%,其中死亡23例。

1.2　方法

1.2.1應(yīng)用腫瘤細(xì)胞采集器收集腫瘤細(xì)胞通過腹腔穿刺引流收集腹水標(biāo)本500 mL,全部用腫瘤細(xì)胞采集器收集細(xì)胞，取出濾膜涂片兩張,通過HE染色進(jìn)行細(xì)胞學(xué)診斷。然后將濾膜放入盛有10 mL PBS離心管中涮洗濾膜,1 000 r·min-1離心5 min,棄上清。加入適量PBS調(diào)整細(xì)胞濃度為1×106/mL，制成單細(xì)胞懸液,進(jìn)行流式檢測(cè)。如不能及時(shí)檢測(cè),可加入70%乙醇固定,4 ℃冰箱長(zhǎng)期保存。

1.2.2流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)ERCC1的蛋白表達(dá)取單細(xì)胞懸液0.1 mL,加入單克隆抗體ERCC1工作液0.1 mL，室溫孵育30 min,加入PBS緩沖液10 mL洗滌1次(去除未與細(xì)胞結(jié)合的一抗),離心棄上清,加入二抗工作液100 μL,避光室溫孵育30 min,加入PBS緩沖液10 mL離心,棄上清(除去未與一抗結(jié)合的二抗),然后加入PBS 1 mL經(jīng)500目銅網(wǎng)過濾后上機(jī)檢測(cè)熒光的強(qiáng)弱。該實(shí)驗(yàn)需設(shè)細(xì)胞懸液只加入一抗或二抗作陰性對(duì)照或本底對(duì)照。

1.2.3ERCC1蛋白表達(dá)量判定以熒光指數(shù)(fluoresence index,FI)表示相對(duì)含量,公式為：FI=(樣品蛋白表達(dá)的平均熒光強(qiáng)度-對(duì)照樣品平均熒光強(qiáng)度)/正常對(duì)照樣品平均熒光強(qiáng)度。如果FI>1.0為陽(yáng)性表達(dá),FI≤1.0為陰性表達(dá)。

1.3　療效評(píng)價(jià)

療效按實(shí)體瘤評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)(RECIST 1.1):完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、疾病穩(wěn)定(SD)、疾病進(jìn)展(PD)。近期客觀有效為RR=CR+PR,有效者1個(gè)月后檢查確認(rèn)。毒性反應(yīng)按照NCI抗癌藥物毒副反應(yīng)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)?？偵嫫?overall survival，OS)為自治療開始到患者死亡或失訪,若末次隨訪仍然存活則定為截尾值。無進(jìn)展生存期(progression free survival，PFS)為自治療開始到疾病進(jìn)展,均以月為單位計(jì)算。

1.4　統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件包處理數(shù)據(jù),蛋白表達(dá)水平與臨床病理指標(biāo)采用χ2檢驗(yàn),采用Kaplan Meier生存分析法進(jìn)行單因素生存分析，并進(jìn)行Log-rank時(shí)序檢驗(yàn),P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1　ERCC1表達(dá)情況及與臨床病理特征的關(guān)系

65例NSCLC患者中，ERCC1陽(yáng)性表達(dá)25例，陽(yáng)性表達(dá)率為38.5%(25/65)。經(jīng)χ2檢驗(yàn)，與年齡、分化程度、組織類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無相關(guān)性(P>0.05)(表1)。

表1　ERCC1與臨床病理特征的關(guān)系　( n)

2.2　ERCC1表達(dá)情況與化療療效的關(guān)系

65例患者中一線紫杉醇聯(lián)合鉑劑(順鉑或卡鉑)方案化療CR者1例,35例PR(53.8%),10例SD(15.4%),19例PD(29.2%)。總客觀緩解率RR(CR+PR)為55.38%。ERCC1表達(dá)陽(yáng)性患者中，RR為44%(11/25);表達(dá)陰性患者中，RR為62.5%(25/40)，兩組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表2　ERCC1蛋白表達(dá)與化療敏感性的關(guān)系(%)

2.3　ERCC1表達(dá)情況與生存的關(guān)系

65例患者中23例死亡，中位OS為18個(gè)月，中位PFS為6個(gè)月。ERCC1陽(yáng)性表達(dá)組中位OS為9個(gè)月，中位PFS為4.1個(gè)月;ERCC1陰性表達(dá)組中位OS為18.9個(gè)月，中位PFS為6.8個(gè)月，OS比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.75，P=0.03)。

3討論

鉑類藥物是卵巢癌治療的基石，目前尚缺乏明確的可以預(yù)測(cè)化療療效及毒副作用的生物標(biāo)記物，造成化療的盲目性及過度性，給患者帶來經(jīng)濟(jì)及身體上的負(fù)擔(dān)。近年來，有關(guān)鉑類藥物化療標(biāo)記物的研究較多，其中ERCC1作為參與DNA修復(fù)的關(guān)鍵基因是目前研究的熱點(diǎn)。鉑類藥物主要作用于腫瘤細(xì)胞DNA分子的鳥嘌呤，通過與DNA結(jié)合形成鉑類-DNA復(fù)合物，干擾腫瘤細(xì)胞DNA的合成，并且產(chǎn)生細(xì)胞毒性作用[1]。ERCC1是核苷酸切除修復(fù)(nucleotide excision repair，NER)途徑的關(guān)鍵基因，而NER途徑是DNA修復(fù)的主要途徑[2]，通過這條通路能夠阻斷鉑類和DNA結(jié)合，并且能修復(fù)DNA鏈間的交聯(lián)，最終導(dǎo)致耐藥的發(fā)生。

多項(xiàng)研究表明卵巢癌組織中ERCC1表達(dá)水平與鉑劑為主的化療方案的療效具有相關(guān)性，體外試驗(yàn)也證實(shí)惡性胸腔/腹腔積液中腫瘤細(xì)胞的ERCC1 mRNA的表達(dá)水平與順鉑體外藥物敏感性相關(guān)，臨床可將其作為含鉑類方案化療敏感性及預(yù)測(cè)預(yù)后的指標(biāo)之一[3]。晚期腫瘤患者組織標(biāo)本常不易取得，但多易出現(xiàn)惡性腹腔積液，其中含有大量腫瘤細(xì)胞，有關(guān)惡性腹腔積液中ERCC1表達(dá)水平與鉑類藥物化療療效關(guān)系的臨床研究甚少。

我們收集卵巢癌腹腔積液中的腫瘤細(xì)胞，測(cè)定ERCC1蛋白表達(dá)情況，研究結(jié)果提示ERCC1蛋白的陽(yáng)性表達(dá)與分化程度、年齡、組織學(xué)類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)，與梁夢(mèng)等[4]報(bào)道一致。ERCC1與鉑劑療效的關(guān)系已有許多報(bào)道，周英瓊等[5]研究證實(shí),封閉或下調(diào)ERCC1基因，可減弱卵巢癌耐藥細(xì)胞的增殖及侵襲能力，增強(qiáng)其對(duì)順鉑的敏感性。張自森等[6]研究發(fā)現(xiàn)腹腔積液中ERCC1 mRNA的表達(dá)與腹腔熱灌注順鉑療效顯著相關(guān)，順鉑治療有效患者腹腔積液中ERCC1 mRNA存在低表達(dá)。本研究提示，ERCC1陰性表達(dá)者疾病緩解率較陽(yáng)性者高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，仍需擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步證實(shí)。有關(guān)ERCC1與預(yù)后的報(bào)道較少，本研究提示ERCC1陰性表達(dá)者較陽(yáng)性表達(dá)者可獲得更長(zhǎng)的PFS和OS，差異有統(tǒng)計(jì)意義，與肺癌內(nèi)的研究結(jié)論一致[7]。劉小麗等[8]研究發(fā)現(xiàn)ERCC1陽(yáng)性表達(dá)與預(yù)后密切相關(guān)，認(rèn)為高表達(dá)患者臨床分期較早，術(shù)后生存期較長(zhǎng)。研究結(jié)論存在分歧的原因可能與DNA修復(fù)能力在不同期別腫瘤作用不同有關(guān)。DNA修復(fù)能力是與腫瘤易感性和化療敏感性密切相關(guān)的雙刃劍，在腫瘤早期，DNA修復(fù)能力強(qiáng)，腫瘤易感性低，然而在腫瘤治療過程中，DNA修復(fù)能力的增加卻阻礙了療效的發(fā)揮[9]。

綜上所述，我們的研究發(fā)現(xiàn)腹腔積液中腫瘤細(xì)胞ERCC1表達(dá)與卵巢癌的預(yù)后具有相關(guān)性，與鉑劑化療療效的關(guān)系仍待開展多中心、隨機(jī)化、前瞻性的臨床研究進(jìn)一步明確。對(duì)于伴有惡性腹腔積液而無法獲得組織標(biāo)本的卵巢癌患者而言,以腹腔積液為基礎(chǔ)對(duì)相關(guān)預(yù)后、療效預(yù)測(cè)分子分析是一條可行的途徑。

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[責(zé)任編輯：李薊龍英文編輯：謝利峰]

通信作者：張國(guó)志(1964 -)， 男，吉林雙遼人，主任醫(yī)師，教授，碩士生導(dǎo)師，主要研究方向：普外科各類疾病的診治。