張家口地區(qū)雞白痢沙門氏菌的分離鑒定及藥敏試驗

張家口地區(qū)雞白痢沙門氏菌的分離鑒定及藥敏試驗

鄭 志 新

(張家口市動物衛(wèi)生監(jiān)督所，河北 張家口 075000)

摘要：目的篩選對張家口地區(qū)雞白痢沙門氏菌的敏感藥物，更好地防治雞白痢。方法對張家口地區(qū)8個養(yǎng)殖場35只疑似為雞白痢沙門氏菌性腹瀉病雞的60份病料進行病原菌分離鑒定及藥物敏感性試驗。結果分離的18株雞白痢沙門氏菌對慶大霉素、阿米卡星、氟苯尼考敏感，對阿莫西林、鏈霉素、環(huán)丙沙星、復方新諾明不敏感，對頭孢曲松、恩諾沙星、痢特靈中度敏感。結論在雞白痢的防治中，可以選用慶大霉素、阿米卡星、氟苯尼考等藥物。

關鍵詞：張家口地區(qū)；雞白痢沙門氏菌；分離鑒定；藥敏試驗

中圖分類號：S 852.61

DOI：10.3969/j.issn.1673-1492.2015.03.008

基金項目：河北省科技廳指令性項目階段成果(14227411D)

作者簡介：王劍和(1961-),女，河北張北人，河北北方學院圖書館高級農藝師，主要研究方向為果樹栽培與管理。

Separation Identification ofPullorosisSalmonellaand Drug Susceptibility Test in Zhangjiakou Region

ZHENG Zhi-xin

(Animal Health Supervision Instiute of Zhangjiakou,Zhangjiakou,Hebei 075000,China)

Abstract:ObjectiveTo screen sensitive drug against the Zhangjiakou region Pullorosis salmonella for better prevention and treatment of pullorosis in chickens.Methods60 samples of pullorosis salmonella form 35 suspected chicken in 8 farms of Zhangjiakou region were conducted separation identification and drug sensitivity test.ResultsThe 18 separated strains of salmonella pullorosis were sensitive to gentamycin,amikacin and fluorine benzene nicol;not sensitive to amoxicillin,streptomycin,ciprofloxacin,and compound new Ming;moderately sensitive to ceftriaxone,uhand furazolidone.ConclusionIn the prevention and treatment of pullorosis,gentamicin,amikacin and,fluorine benzene nicol can be effective.

Key words:Zhangjiakou region;Pullorosissalmonella;separation identification;drug sensitive test

雞白痢是由雞白痢沙門氏菌引起的一種常見的多發(fā)性傳染病[1],該病一年四季均可發(fā)生，環(huán)境污穢、潮濕、圈舍擁擠、糞便堆積、飼料和飲水供應不良、長期運輸中氣候惡劣、疲勞和過飽、內寄生蟲和病毒感染等均可誘發(fā)本病[2-3]，各種年齡雞只都可發(fā)生。雛雞發(fā)病表現(xiàn)急性敗血經過，以發(fā)熱、拉灰白色或粘性液狀糞便為特征；成年雞白痢沙門氏菌發(fā)病以損害生殖系統(tǒng)為主的慢性或隱性感染為特征[4]。

隨著中國養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展，雞白痢成為危害養(yǎng)禽業(yè)的嚴重傳染病之一。對于該病主要是通過加強飼養(yǎng)管理并使用抗菌藥物來預防和控制，但獸醫(yī)臨床大劑量盲目使用抗菌藥，不但助長了耐藥菌的產生，給獸醫(yī)臨床治療帶來困難，而且還會造成肉食品中藥物殘留，影響人們的健康[5]。

為了更好地控制雞白痢，本研究對2014年2月至5月張家口地區(qū)雞場分離的菌株進行分離鑒定及藥物敏感性試驗，旨在了解張家口地區(qū)雞白痢沙門氏菌分布情況及藥物敏感性，為獸醫(yī)臨床合理用藥提供科學依據(jù)，為防控雞白痢沙門氏菌提供有效方法。

1材料與方法

1.1　材料

1.1.1病料選取張家口地區(qū)8個養(yǎng)殖戶癥狀比較明顯的疑似雞白痢沙門氏菌病死雞45只進行剖檢，無菌采取病雞心、肝臟、脾臟、十二指腸等60份，用一次性塑料自封袋包裝，貼上標簽，標明該病料的來源及時間，及時送檢，并對該病死雞所在的養(yǎng)殖場進行詳細檢查和記錄。

1.1.2培養(yǎng)基、染色液等營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基(批號：130206)、伊紅美蘭瓊脂培養(yǎng)基(批號：120915)均由杭州天和生物試劑有限公司生產。SS瓊脂培養(yǎng)基(批號：130104)、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基(批號：20130216)、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(批號：20120302)均由北京博奧生物技術有限責任公司生產。葡萄糖(批號：20130128)由天津市科密歐化學試劑有限公司生產。西蒙氏枸櫞酸鹽瓊脂(批號：130429)、三糖鐵瓊脂(TSI)(批號：130511)、細菌微量生化管(葡萄糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖、甘露糖、尿素)(批號：20130726)均由杭州天和微生物試劑有限公司生產。革蘭氏染色液由河北北方學院微生物實驗室提供。沙門氏菌A-F多價血清購自蘭州生物制品研究所有限責任公司。

1.1.3藥敏紙片阿莫西林(10 μg/片)、頭孢曲松(30 μg/片)、慶大霉素(10 μg/片)、阿米卡星(30 μg/片)、鏈霉素(10 μg/片)、恩諾沙星(5 μg/片)、環(huán)丙沙星(5 μg/片)、復方新諾明(23.75 μg/片)、氟苯尼考(30 μg/片)、痢特靈(300 μg/片)均由杭州天和生物試劑有限公司生產。

1.2　方法

1.2.1細菌分離培養(yǎng)將病料樣品劃線接種于營養(yǎng)瓊脂、麥康凱瓊脂、SS瓊脂平板、伊紅美蘭瓊脂平板，37 ℃培養(yǎng)24 h。

1.2.2染色鏡檢用細菌培養(yǎng)物進行涂片，經革蘭氏染色鏡檢，觀察細菌的形態(tài)及染色特征。

1.2.3生化試驗從分離純化的細菌中釣菌，分別接種于葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露糖、蔗糖、尿素、甘露醇等生化管中，置于37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2～5 d，每24 h觀察一次結果并記錄，并取純化菌分別做MR試驗、吲哚試驗、V-P試驗、枸櫞酸鹽利用試驗、H2S試驗等，置37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2～5 d觀察其反應并詳細記錄。

1.2.4血清型鑒定取疑似雞白痢沙門氏菌抗原1滴滴在干凈的玻璃板上，然后再加入等量標準陽性A-E型多價血清進行玻板凝集反應，同時做生理鹽水和陽性抗原對照。

1.2.5藥敏試驗將細菌純培養(yǎng)物接種于普通培養(yǎng)基平皿，用無菌鑷子將藥敏紙片(阿莫西林、頭孢曲松、恩諾沙星、痢特靈、環(huán)丙沙星、阿米卡星、慶大霉素、復方新諾明、氟苯尼考、鏈霉素試紙)貼于平皿上，紙片與紙片中心距離不小于24 mm，紙片與平皿邊緣的距離不少于15 mm。貼好紙片的平皿倒放在37 ℃恒溫箱中，培養(yǎng)24 h后觀察結果，按照購買藥敏片附贈的說明書進行高敏、中敏、耐藥的標準判定。

2結果

2.1　分離培養(yǎng)結果

從張家口部分地區(qū)采集的病料中，分離出126株細菌。其中分離出的細菌經37 ℃培養(yǎng)24 h，分別選擇在：①營養(yǎng)瓊脂平板上生長貧瘠的菌落；②在SS瓊脂平板上無色半透明、中等大小、表面光滑的菌落的菌株；③在麥康凱瓊脂平板上為無色菌落的菌株進行染色鏡檢。

2.2　細菌形態(tài)及染色特性

雞白痢沙門氏菌為革蘭氏陰性短桿菌，兩端鈍圓，多散在，少數(shù)成對或短鏈狀排列。經分離鑒定及染色鏡檢，33株初步確定為雞白痢沙門氏菌。

2.3　生化實驗結果

對33株疑似雞白痢沙門氏菌進行12種生化試驗鑒定，根據(jù)其生化特性(表1)，其中有18株為雞白痢沙門氏菌。

表1　雞白痢沙門氏菌的生化特性

2.4　血清型鑒定結果

通過玻板凝集試驗，確定該地區(qū)18株雞白痢沙門氏菌的血清型為D型。

2.5　藥敏試驗結果

用紙片擴散法檢測了18株雞白痢沙門氏菌分離株對10種抗菌藥物的敏感性，結果見表2。

表2　18株雞白痢沙門氏菌對10種藥物的敏感性(%)

3討論與結論

本實驗對所采病料進行病原菌的分離培養(yǎng)、染色鏡檢、生化試驗[6-9]，鑒定結果表明：該地區(qū)病雞是由雞白痢沙門氏菌所引起的，且該地區(qū)雞白痢沙門氏菌的血清型為D型。

藥敏試驗結果顯示：該菌株對慶大霉素、阿米卡星和氟苯尼考敏感，可為臨床治療該病的選擇用藥；此外對阿莫西林、鏈霉素、復方新諾明不敏感，由此可見，該菌株對上述藥物已產生嚴重耐藥性。查閱有關文獻[10]，分離病原菌由于不同地方、不同時間、不同雞群，故細菌對各種藥物產生的耐藥性不同，原因是長期使用這些抗生素而導致耐藥性的產生。建議在使用藥物治療時，應先做藥敏試驗，制定有效用藥方案。

參考文獻：

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[責任編輯：劉守義英文編輯：劉彥哲]