饑餓對(duì)鯽魚前腸形態(tài)影響研究

[摘 要] " 用石蠟切片的方法研究饑餓對(duì)鯽魚消化系統(tǒng)的形態(tài)結(jié)構(gòu)和組織學(xué)的影響。本文將通過(guò)實(shí)驗(yàn)，對(duì)饑餓不同時(shí)間鯽魚前腸切片的觀察，研究饑餓對(duì)鯽魚前腸直徑、前腸微絨毛和腸壁的影響，并運(yùn)用組織切片的方法研究饑餓對(duì)鯽魚消化系統(tǒng)組織結(jié)構(gòu)的影響。

[關(guān)鍵詞] 鯽魚 " "饑餓 " "前腸 " "消化系統(tǒng)

[中圖分類號(hào)] S917 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1003-1650 （2015）04-0288-01

1 " 材料與方法

1.1 " 材料來(lái)源

實(shí)驗(yàn)用魚為鯽魚，取健康鯽魚30尾進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。所取鯽魚體長(zhǎng)18.9～20.9cm，體重210～265g，分別置于室內(nèi)8個(gè)1.0m×0.8m×0.6m水族箱內(nèi)，并用增氧機(jī)充氣，水溫11～13℃，pH7.0左右，每天換水一次。

1.2 " 實(shí)驗(yàn)方法

操作期間不投餌，對(duì)饑餓魚體進(jìn)行解剖，并取其前腸3～5mm置于95%福爾馬林溶液中保存，每三天取樣一次，每次2～3尾。

對(duì)不同時(shí)間段的八組饑餓魚體所取前腸進(jìn)行切片觀察。切片制作方法如下：

1.2.1試劑配制

1.2.1.1透明劑的配制

（1）3：1酒精二甲苯溶液500ml " 純酒精375ml加純二甲苯125ml

（2）1：1酒精二甲苯溶液500ml " 純酒精250ml 加純二甲苯250ml

（3）1：3酒精二甲苯溶液500ml " 純酒精125ml 加純二甲苯375ml

1.2.1.2酸酒精500ml

發(fā)煙HCL（36%～40%）5ml加純酒精100ml加蒸餾水400ml

1.2.1.3堿酒精500ml

NaOH2.5g加純酒精100ml加蒸餾水400ml

1.2.1.4伊紅酸溶液500ml

伊紅2.5g加95%酒精500ml

1.2.1.5 貼附劑130ml

65ml雞蛋清加65ml甘油加1g水楊酸鈉

1.2.1.6Delafieled蘇木精

依次加入冰醋酸5ml純酒精50ml 后加入蘇木精1g然后加甘油50ml并以5g鉀明礬50ml蒸餾水的熱溶液混合

1.2.2操作步驟

1.2.2.1前腸的截?。?/p>

將不同饑餓程度的鯽魚解剖后，在前腸同一位置截取3-5mm。

1.2.2.2石蠟切片的一般步驟：

（1）采集標(biāo)本與固定.

將前腸放入95%的福爾馬林中。

（2）沖洗

將前腸取出放入廣口瓶中，用微流水沖洗12小時(shí)以上，洗去固定劑。

（3）脫水

將沖洗好的標(biāo)本放入35%、50%、75%、85%、95%、100%、100%的酒精溶液中脫水，每次脫水1-2小時(shí)。

（4）透明

將脫完水的標(biāo)本依次放入1：3的酒精二甲苯溶液、2：2的酒精二甲苯溶液、3：1的酒精二甲苯溶液、純二甲苯溶液、純二甲苯溶液中浸泡，每步浸泡約30分鐘。

（5）透蠟

標(biāo)本依次放入3：1的二甲苯石蠟溶液、2：2的二甲苯石蠟溶液、1：3的二甲苯石蠟溶液、純石蠟溶液、純石蠟溶液中浸泡，每次約30分鐘，且放入恒溫箱中。

（6）包埋

用硬紙做成小盒，將石蠟和組織一起放入，待冷卻后將石蠟修成一定大小，放在蠟座上。

（7）切片

第一部粗切，其厚度在50～100微米左右，直至組織全部暴露后，再細(xì)切，直至組織表面均勻一致，無(wú)白點(diǎn)，再將切的蠟片放入溫水中。

（8）展片、貼片

將切好的組織片放人45℃的恒溫水浴鍋中讓其展開，然后將組織切片貼在粘有粘附劑的載玻片上直至切片自然干燥。

（9）染色

a.脫蠟

將載玻片放入純二甲苯浸泡5-6分鐘依氣溫而定直至石蠟完全溶解為止

b.脫脂

放入二甲苯與純酒精等量混合液5分鐘，然后放入純酒精中5分鐘

c.下行復(fù)水

依次放入95%酒精浸泡3分鐘、85%酒精浸泡3分鐘、75%酒精浸泡3分鐘、50%酒精浸泡3分鐘、35%酒精浸泡3分鐘

d.水洗

放入水中片刻

e.染色

放入Delafieled蘇木精10-30分鐘或更長(zhǎng)

f.水洗

放入流水中洗5分鐘

g.分色

將組織片放入酸酒精1-2分鐘

h.水洗

水洗片刻

i.中和

放入堿酒精約1-2分鐘

j.水洗

水洗片刻

k.上行脫水與復(fù)染

依次放入35%酒精浸泡3分鐘、50%酒精浸泡3分鐘、75%酒精浸泡3分鐘、85%酒精浸泡3分鐘

l.透明

依次放入純酒精與等量二甲苯混合液5分鐘、二甲苯溶液5分鐘

（10）封片 " 用加拿大樹脂封片

2 " 結(jié)果

實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2-1

表2-1 鯽魚前腸短軸長(zhǎng)、絨毛長(zhǎng)、前腸壁厚和前腸徑隨饑餓天數(shù)的變化：

3 " 討論

研究顯示，饑餓使鯽魚產(chǎn)生明顯的組織學(xué)衰退，特別是消化道系統(tǒng)。隨饑餓程度加深，其前腸徑逐漸變短，直接原因?yàn)轸~體長(zhǎng)期處于饑餓狀態(tài)，營(yíng)養(yǎng)吸收不充分。

通過(guò)實(shí)驗(yàn)中，對(duì)饑餓鯽魚前腸切片的進(jìn)一步觀察測(cè)量發(fā)現(xiàn)，由于長(zhǎng)期饑餓導(dǎo)致的營(yíng)養(yǎng)不足使前腸絨毛高度下降，且密度變小。另外，從對(duì)切片的觀察可以得到：隨著鯽魚饑餓程度的加深，紋狀緣變得不明顯，絨毛不整齊，個(gè)別地方萎縮、斷裂或脫落，顯著區(qū)別于正常形態(tài)。

參考文獻(xiàn)

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