ILK 和MMP-9 在胃癌及其侵襲、轉(zhuǎn)移中的表達(dá)及意義

張鳳梅，李勝水，李秀清，孫鳳莉，許 華，李雙標(biāo)

1.河北省滄州中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院病理科，河北 滄州061001;2.河北省滄州市人民醫(yī)院病理科;3.河北省滄州市中心醫(yī)院胸外科

胃癌是消化道最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一。淋巴結(jié)及網(wǎng)膜轉(zhuǎn)移是其最常見(jiàn)的轉(zhuǎn)移方式，與胃癌預(yù)后關(guān)系密切［1］。整合素連接激酶(integrin-linked kinase，ILK)是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，以依賴(lài)PI-3K 方式激活，通過(guò)磷酸化蛋白激酶B(PKB)等下游底物使細(xì)胞外信號(hào)向下游傳遞，發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)，它能促進(jìn)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移［2］?；|(zhì)金屬蛋白酶-9 (matrix metalloproteinases-9，MMP-9 )主要降解以Ⅳ型膠原為主的基底膜屏障，對(duì)于腫瘤形成是非常重要的［3-4］。近年研究表明ILK 和MMP-9 在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移中起重要作用［5］。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)ILK 和MMP-9 在胃癌組織和正常胃黏膜組織中的表達(dá)，分析二者與胃癌浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移的關(guān)系及其相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集河北省滄州中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院2010 年1 月-2013 年1 月的胃癌手術(shù)石蠟標(biāo)本共80例，男55 例，女25 例，年齡36 ～86 歲。術(shù)前均未經(jīng)放化療及其他生物治療，臨床病理資料完整。所有標(biāo)本均經(jīng)10%中性甲醛固定，石蠟包埋，3 μm 連續(xù)切片備用。另選取30 例經(jīng)胃鏡組織學(xué)檢查相對(duì)正常的胃黏膜標(biāo)本作為對(duì)照組。

1.2 主要試劑及方法 采用免疫組織化學(xué)SP 法進(jìn)行染色。ILK(兔抗人單克隆抗體)、MMP-9(兔抗人多克隆抗體)及SP 免疫組化試劑盒均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司。染色過(guò)程嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，用已知陽(yáng)性組織切片作陽(yáng)性對(duì)照，用PBS(pH7.4)代替一抗作陰性對(duì)照，染色步驟嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3 結(jié)果判定 ILK 陽(yáng)性:棕色顆粒分布于胞漿或胞膜，呈均質(zhì)狀。MMP-9 陽(yáng)性主要表達(dá)于腫瘤細(xì)胞胞漿和胞膜中，呈黃色細(xì)顆粒狀，散在點(diǎn)狀分布。陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn):按染色強(qiáng)度記分，無(wú)染色為0 分，淺黃色為1分，棕黃色為2 分，棕褐色為3 分;再按陽(yáng)性細(xì)胞所占的百分比記分，未見(jiàn)染色細(xì)胞為0 分，＜25%為1 分，25% ～50%為2 分，＞50%為3 分;兩者相加，＜3 分為陰性，≥3 分為陽(yáng)性。所有評(píng)判均由同一病理醫(yī)師完成。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0 統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。免疫組織化學(xué)結(jié)果與臨床病理參數(shù)間關(guān)系的統(tǒng)計(jì)采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性檢驗(yàn)采用Spearman 等級(jí)相關(guān)檢驗(yàn)，P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ILK 和MMP-9 在胃癌中的表達(dá) 胃癌患者中44 例(55. 0%)ILK 蛋白陽(yáng)性表達(dá)、53 例(66. 3%)MMP-9 蛋白陽(yáng)性表達(dá);對(duì)照組中ILK 和MMP-9 的陽(yáng)性率分別為6. 7% (2/30)和10. 0% (3/30);ILK 和MMP-9 在胃癌組織中較正常胃黏膜組織中的表達(dá)高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05，見(jiàn)圖1 ～2、表1)。

表1 ILK 及MMP-9 在胃癌組及對(duì)照組中的表達(dá)［例數(shù)(%)］Tab 1 Expression of ILK and MMP-9 in gastric cancer group and normal control group［n(%)］

2.2 ILK 和MMP-9 的陽(yáng)性表達(dá)與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 80 例胃癌患者中ILK 和MMP-9 陽(yáng)性表達(dá)與腫瘤的分化程度、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及大網(wǎng)膜轉(zhuǎn)移有相關(guān)性(P ＜0.05)，而與患者的年齡、性別及腫瘤大小無(wú)相關(guān)性(P ＞0.05，見(jiàn)表2)。

表2 ILK 和MMP-9 的表達(dá)與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系［例數(shù)(%)］Tab 2 The relationship between expression of ILK，MMP-9 in gastric cancer and the clinicopathological parameters［n(%)］

續(xù)表2

2.3 ILK 與MMP-9 表達(dá)之間的關(guān)系 80 例胃癌組織中，ILK 和MMP-9 表達(dá)均陽(yáng)性的患者41 例，ILK 陽(yáng)性、MMP-9 陰性者3 例，ILK 陰性、MMP-9 陽(yáng)性者12例，兩者均陰性24 例。經(jīng)Spearman 等級(jí)相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，胃癌組織ILK 表達(dá)與MMP-9 表達(dá)呈顯著正相關(guān)(r=0.553，P ＜0.01，見(jiàn)表3)。

表3 胃癌組織中ILK 與MMP-9 蛋白表達(dá)的關(guān)系Tab 3 The relationship between ILK and MMP-9 expressions in gastric cancer

3 討論

ILK 是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，其N(xiāo) 端具有4 個(gè)錨蛋白重復(fù)序列，其下是一個(gè)磷酸肌醇結(jié)合基序。PI3K 是在1984 年發(fā)現(xiàn)的一種胞內(nèi)磷脂酰肌醇激酶，其產(chǎn)物包括PIP2 和PIP3 等。PIP3 與ILK 的磷酸肌醇結(jié)合基序結(jié)合后活化，并磷酸化激活PKB/Akt，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、黏著及侵襲，抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)細(xì)胞增殖［6］。因此ILK 的表達(dá)和活性的微小改變，就可能導(dǎo)致人類(lèi)腫瘤的發(fā)生［7］。ILK 在子宮內(nèi)膜癌［8］、乳腺癌［9］等多種惡性腫瘤中高表達(dá)，且表達(dá)程度與腫瘤的惡性程度及預(yù)后不良有關(guān)。本研究顯示，ILK 在80例胃癌中陽(yáng)性率55.0%，顯著高于對(duì)照組(P ＜0.05)，且腫瘤浸潤(rùn)越深，ILK 表達(dá)越高;有淋巴結(jié)及大網(wǎng)膜轉(zhuǎn)移組中的ILK 表達(dá)分別明顯高于無(wú)淋巴結(jié)及大網(wǎng)膜轉(zhuǎn)移組，提示ILK 可能胃癌的發(fā)病密切相關(guān)，并在胃癌的浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移中起重要作用。

基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteniase，MMPs)是鋅離子依賴(lài)性?xún)?nèi)肽酶，它能降解細(xì)胞外基質(zhì)所有成分，MMP-9 是MMPs 中降解基底膜最重要的蛋白酶之一，能有效降解細(xì)胞基底膜中的Ⅳ、V 膠原和明膠，致使癌細(xì)胞突破基底膜向周?chē)?rùn)轉(zhuǎn)移［10］。大量研究表明，MMP-9 在多種惡性腫瘤中呈現(xiàn)過(guò)度表達(dá)，在惡性腫瘤浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移過(guò)程中扮演著重要角色［11］。本研究顯示，MMP-9 的高表達(dá)與胃癌腫瘤浸潤(rùn)深度、有無(wú)淋巴結(jié)及大網(wǎng)膜轉(zhuǎn)移有關(guān)。腫瘤浸潤(rùn)越深，MMP-9 表達(dá)越高;有淋巴結(jié)及大網(wǎng)膜轉(zhuǎn)移組中的MMP-9 表達(dá)分別明顯高于無(wú)淋巴結(jié)及大網(wǎng)膜轉(zhuǎn)移組，提示MMP-9 與胃癌的浸潤(rùn)性生長(zhǎng)即發(fā)展、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。與劉紹晨等［12］對(duì)胃癌的研究結(jié)果一致，證實(shí)MMP-9 過(guò)表達(dá)者胃癌細(xì)胞的侵襲性和轉(zhuǎn)移性均升高，提示MMP-9 可作為反映胃癌惡性程度的指標(biāo)之一，用于預(yù)測(cè)胃癌患者的預(yù)后。

目前國(guó)內(nèi)有關(guān)ILK 和MMP-9 二者在胃癌中關(guān)系的研究未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。本研究發(fā)現(xiàn)ILK 與MMP-9 在胃癌組織中的表達(dá)呈顯著正相關(guān)(r = 0.553，P ＜0.01)，41 例患者(51.25%)兩者表達(dá)均為陽(yáng)性時(shí)，相應(yīng)地出現(xiàn)深度浸潤(rùn)、高臨床分期和有淋巴結(jié)及大網(wǎng)膜轉(zhuǎn)移的機(jī)會(huì)也大為增加，提示ILK 和MMP-9 在促進(jìn)胃癌的發(fā)生、發(fā)展及浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移中可能存在某種時(shí)間或空間上的協(xié)同作用，可能的機(jī)制為高表達(dá)的ILK 誘導(dǎo)MMP-9 表達(dá)增加以促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜的降解，從而增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲力，并預(yù)示聯(lián)合檢測(cè)兩項(xiàng)指標(biāo)有助于胃癌生物學(xué)行為的判斷和預(yù)后的估計(jì)。

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