恩施土家族胃潰瘍患者M(jìn)IF-173G/C 基因多態(tài)性表達(dá)

鄧銀芝，吳明珠，羅和生，賀建華

1.恩施土家族苗族自治州中心醫(yī)院消化科，湖北 恩施445000;2.武漢大學(xué)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科;3.武漢大學(xué)人民醫(yī)院消化內(nèi)科

胃潰瘍是一種消化道較為常見的疾病，其臨床特征與幽門螺桿菌感染所致胃黏膜損傷有關(guān)，多表現(xiàn)為上腹部反復(fù)隱痛甚至出現(xiàn)上消化道大出血、幽門梗阻、穿孔等并發(fā)癥。近年來采取根除H. pylori，抑制胃酸以及胃黏膜保護(hù)藥物的綜合方案對(duì)胃潰瘍進(jìn)行治療，臨床效果令人滿意，然而少數(shù)患者臨床療效較差，患者胃黏膜上皮細(xì)胞腸上皮化生和非典型增生最終演變?yōu)槲赴?］，嚴(yán)重影響廣大人民群眾的身體健康?，F(xiàn)已經(jīng)明確胃潰瘍發(fā)病與機(jī)體免疫紊亂、遺傳、感染等因素密切相關(guān)。臨床上胃潰瘍呈現(xiàn)出一定的家族聚集性，提示胃潰瘍是一種與遺傳因素密切相關(guān)的疾?。?-4］。鑒于炎癥和遺傳因素在胃潰瘍發(fā)病中的作用，本文探討恩施地區(qū)土家族胃潰瘍患者巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(migration inhibitory factor，MIF)表達(dá)水平，分析MIF-173G/C 多態(tài)性與胃潰瘍易感性的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取恩施土家族苗族自治州中心醫(yī)院2013 年2 月-2014 年2 月收治胃潰瘍患者145 例，男71 例，女74 例，年齡19 ～85 歲，平均年齡(48.6 ±12.9)歲。選取120 名土家族健康體檢者為對(duì)照組，男55 例，女65 例，年齡20 ～80 歲，平均年齡(47. 2 ±11.3)歲，所有受試對(duì)象為恩施地區(qū)土家族，在進(jìn)入本研究之前告之患者，須取得患者同意。排除標(biāo)準(zhǔn):所有納入研究人員無明顯免疫風(fēng)濕性疾病、無高血壓、糖尿病、嚴(yán)重肝腎疾病、惡性腫瘤、慢性消耗性疾病、嚴(yán)重感染性疾病，近3 個(gè)月無服用免疫抑制劑、激素史及無其他胃鏡檢查禁忌證。

1.2 方法

1.2.1 MIF 水平測(cè)定:抽取胃潰瘍患者及正常對(duì)照者靜脈血3 ml 分離血清，血清貯藏于-20 ℃冰箱以備統(tǒng)一檢測(cè)，采用上海依科賽生物制品有限公司MIF 試劑盒，用ELASA 方法檢測(cè)血清MIF 水平，嚴(yán)格按照說明書操作。

1.2.2 MIF-173 位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性的檢測(cè):在經(jīng)患者或其家屬同意并簽署知情同意書后，取患者肘靜脈血2 ml，采用DNA 提取試劑盒(上海泛柯生化試劑公司)提取DNA，并于-20 ℃保存。按照文獻(xiàn)設(shè)計(jì)MIF-173G/C 引物及基因型分析［5］PCR 上游引物:5＇-ACTAAGAAAGACCCGAGG-3＇;下游引物:5＇-TGGCAGAAGGACCAGGAGAC-3＇，PCR 產(chǎn)物為330 bp。擴(kuò)增條件為變性95 ℃5 min 變性95 ℃30 s 退火54 ℃40 s 延伸72 ℃45 s，共34 個(gè)循環(huán)。利用SNaPshot SNP 分型技術(shù)對(duì)MIF-173G/C 位點(diǎn)進(jìn)行分型。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 基因型與等位基因型頻率采用頻率計(jì)數(shù)法計(jì)算，研究對(duì)象基因型與Hardy-Weinberg 平衡檢驗(yàn)、組間基因型與等位基因頻率的比較采用χ2檢驗(yàn)。計(jì)量資料用±s 表示，兩組間比較采用t 檢驗(yàn);胃潰瘍患者不同基因型患者M(jìn)IF 血清濃度比較采用方差分析，P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MIF-173G/C 多態(tài)性的分布與比較 MIF-173G/C 的3 種基因型頻率分別為GG:0. 428、GC:0.400、CC:0.172;對(duì)照組3 種基因型頻率分別為GG:0.617、GC:0.317、CC:0.067。進(jìn)行Hardy-Weinberg 平衡定律的吻合度檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=12.79，P=0.016，見表1)。

表1 MIF-173G/C 多態(tài)性頻率在胃潰瘍組與對(duì)照組的分布比較Tab 1 The distribution of MIF-173G/C genotypes in gastric ulcer group and control group

2.2 兩組血清中MIF 的比較 胃潰瘍患者血清中MIF 濃度(823.25 ±61.45)pg/ml 明顯高于正常對(duì)照組(345.49 ±56. 96)pg/ml，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t =6.07，P=0.001)。

2.3 不同173G/C 基因表型胃潰瘍患者血清中MIF含量的比較 GG、GC、CC 三種基因型患者M(jìn)IF 表達(dá)量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F =28.60，P =0.041)，3種基因型血清濃度最大者為GC(993. 27 ± 54. 49)pg/ml，最小者為GG(537.95 ±71.66)pg/ml。

3 討論

研究表明炎癥介質(zhì)相關(guān)基因及表達(dá)的蛋白在胃潰瘍的發(fā)生、發(fā)展過程中起到至關(guān)重要的作用［5-6］。MIF是一個(gè)關(guān)鍵的前炎癥因子，含有115 個(gè)氨基酸殘基，其相對(duì)分子量約為125 kDa，其編碼基因位于22 號(hào)染色體長(zhǎng)臂(22q11.2)的保守區(qū)［7］。正常情況下機(jī)體垂體及單核巨細(xì)胞也會(huì)分泌少量的MIF［8-9］。MIF 具有眾多生物學(xué)效應(yīng)，其主要效應(yīng)有免疫調(diào)節(jié)功能、促進(jìn)血管新生、酶學(xué)活性［10］。近年來，隨著對(duì)MIF 研究的深入，國(guó)內(nèi)外學(xué)者發(fā)現(xiàn)MIF 在細(xì)胞增殖及分化調(diào)節(jié)方面發(fā)揮重要作用，還參與細(xì)胞惡性腫瘤發(fā)生［11-12］。

張雙霞等［13］在研究慢性胃炎和胃潰瘍組織中MIF 蛋白表達(dá)時(shí)發(fā)現(xiàn)慢性胃炎和胃潰瘍組織中MIF 陽(yáng)性率明顯高于正常組織，這一結(jié)果提示MIF 在胃潰瘍發(fā)生及發(fā)展中發(fā)揮著重要作用?；贛IF 分子主要生物效應(yīng)可能在胃潰瘍發(fā)生、發(fā)展中起潛在作用，本研究旨在探討恩施地區(qū)土家族胃潰瘍患者M(jìn)IF-173G/C多態(tài)性與胃潰瘍發(fā)病關(guān)聯(lián)性MIF 基因173G/C 基因型和等位基因頻率在兩組間分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這一結(jié)果提示MIF-173G/C 可能是恩施地區(qū)土家族胃潰瘍易感基因，目前為止，尚不明確MIF-173G/C 多態(tài)性影響胃潰瘍等疾病發(fā)病分子機(jī)制。本研究發(fā)現(xiàn)，胃潰瘍組MIF 水平明顯高于對(duì)照組。同時(shí)也發(fā)現(xiàn)MIF-173G/C 基因型的胃潰瘍患者血清中MIF 含量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，在胃潰瘍組3 種基因型血清濃度最大者為GC，最小者為GG，而胃潰瘍組GC 基因頻率高于對(duì)照組，而胃潰瘍GG 基因頻率小于對(duì)照組。上述結(jié)果提示血清MIF 濃度增高在胃潰瘍發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著重要作用，且MIF-173G/C 的基因多態(tài)性直接影響著MIF 分泌，該發(fā)現(xiàn)與既往研究MIF-173G/C 的基因多態(tài)性影響其表達(dá)水平類似［14-15］?；蚨鄳B(tài)性與疾病的相關(guān)性近來成為基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的一個(gè)研究熱點(diǎn)，MIF 基因存在多個(gè)位點(diǎn)基因多態(tài)性，其中MIF 的cDNA 序列中第173 位堿基單核苷酸多態(tài)性研究較為廣泛。國(guó)外學(xué)者發(fā)現(xiàn)MIF-173G/C 多態(tài)性與其他系統(tǒng)性紅斑狼瘡、炎性腸疾病等免疫性疾病有關(guān)［16-17］。

本研究提示MIF 基因變異可能參與了胃潰瘍的發(fā)生、發(fā)展，其對(duì)胃潰瘍的早期篩查、基因型診斷、早期治療可能有一定的輔助作用，但其確切分子機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。本研究還存在一些不足，流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)發(fā)病年齡、職業(yè)與環(huán)境因素是影響胃潰瘍發(fā)病的相關(guān)因素，本研究的研究對(duì)象在發(fā)病年齡、環(huán)境因素與職業(yè)等方面資料不全，而且本研究的樣本量較小，需進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量，完善相關(guān)背景資料以進(jìn)一步深入探討MIF 基因的遺傳多態(tài)性在胃潰瘍發(fā)生、發(fā)展過程中可能的生物學(xué)機(jī)制。

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