動(dòng)物園野生動(dòng)物消化道寄生蟲感染調(diào)查

羅 琴,譚立娉,胡 偉,鄭國(guó)超,林麗琴,路鵬云,李國(guó)清

（華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，廣州510642）

·研究論文·

動(dòng)物園野生動(dòng)物消化道寄生蟲感染調(diào)查

羅 琴,譚立娉,胡 偉,鄭國(guó)超,林麗琴,路鵬云,李國(guó)清

（華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，廣州510642）

為了解廣州市某野生動(dòng)物園草食類及靈長(zhǎng)類野生動(dòng)物腸道寄生蟲的感染情況，采用糞便檢查法共檢查36種動(dòng)物500份糞樣，總陽性率為50.6%。其中毛圓線蟲、毛尾線蟲、蛔蟲、類圓線蟲、鉤蟲、絳蟲、片形吸蟲、球蟲的感染率分別為37.4%、5.0%、5.4%、2.0%、0.2%、2.4%、0.4%、7.8%。草食類和靈長(zhǎng)類動(dòng)物寄生蟲感染率分別為61.3%和28.4%，其中長(zhǎng)頸鹿的毛圓線蟲、猴科動(dòng)物的毛尾線蟲感染較為普遍，年平均感染率分別為64.5%和31.2%，具有明顯季節(jié)性。采用糞便培養(yǎng)法將毛圓線蟲卵培養(yǎng)至第三期幼蟲，對(duì)其進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定，結(jié)果顯示，來自長(zhǎng)頸鹿、角馬、彎角劍羚的毛圓線蟲樣品多為混合感染，其中捻轉(zhuǎn)血矛線蟲為優(yōu)勢(shì)蟲種。

野生動(dòng)物；腸道寄生蟲；捻轉(zhuǎn)血矛線蟲；毛尾線蟲；野生動(dòng)物園

由于人類的無度開采，生態(tài)環(huán)境的惡化，野生動(dòng)物資源逐漸衰竭，許多珍稀野生動(dòng)物瀕臨滅絕。野生動(dòng)物因其特有的觀賞價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值，且與人類的健康和物種保護(hù)密切相關(guān)，保護(hù)野生動(dòng)物已成為獸醫(yī)研究的重要任務(wù)[1]。越來越多的研究顯示寄生蟲病是危害野生動(dòng)物的主要疾病之一，各種寄生蟲廣泛寄生于野生動(dòng)物，以多種方式掠奪營(yíng)養(yǎng)，損害健康，降低生產(chǎn)性能，并造成飼料的浪費(fèi)[2]。圈養(yǎng)野生動(dòng)物聚集在相對(duì)局限的特定空間，種類多，密度大，活動(dòng)范圍相對(duì)減小，種間接觸機(jī)會(huì)增多，寄生蟲感染或交叉感染幾率增大，寄生蟲病在圈養(yǎng)野生動(dòng)物中凸顯，其中，消化道寄生蟲嚴(yán)重影響野生動(dòng)物的健康和活力[3]。同時(shí)，野生動(dòng)物的頻繁活動(dòng)，加之與人類的密切接觸使其不斷地向人類傳播各類寄生蟲病。

近年來，吉林省[4]、陜西省[5]、福建省[6]、安徽省[7]等相繼報(bào)道了野生動(dòng)物消化道寄生蟲的感染情況，但廣東省未見報(bào)道。為了解廣東省野生動(dòng)物消化道寄生蟲的感染情況，本研究對(duì)廣州市某野生動(dòng)物園的草食類及靈長(zhǎng)類野生動(dòng)物消化道寄生蟲感染情況進(jìn)行了調(diào)查。

1 材料與方法

1.1 樣品采集2013年3月至2014年1月，每隔2個(gè)月對(duì)廣州市某野生動(dòng)物園的草食類及靈長(zhǎng)類野生動(dòng)物進(jìn)行糞便檢查。調(diào)查動(dòng)物有36種，包括18種草食動(dòng)物和18種靈長(zhǎng)類動(dòng)物(表1)。共采集糞樣500份，分別裝入一次性采集袋，做好標(biāo)記，低溫送至實(shí)驗(yàn)室，4℃保存待檢。

1.2 漂浮法鏡檢取10～15 g糞樣加5倍自來水?dāng)噭颍?0目銅篩過濾，除去雜質(zhì)，懸液加入5 mL離心管中，1600×g離心10 min，棄上清液，在沉淀中加入等體積33.3%的硫酸鋅溶液（或飽和蔗糖/飽和NaCl），充分?jǐn)嚢瑁?00×g離心3 min，再加入飽和溶液至離心管口，其上放置一蓋玻片，使蓋玻片接觸液面，靜置5 min后，移開蓋玻片，放置于載玻片上，盧戈氏碘液染色，100倍顯微鏡下觀察。

1.3 幼蟲培養(yǎng)與鑒定取鏡檢感染毛圓線蟲的20份新鮮糞便30 g，玻棒搗碎，于直徑15 cm的培養(yǎng)皿中塑成錐形，使糞便中間部分稍高出培養(yǎng)皿1～2 mm，四周低于培養(yǎng)皿10～15 mm。噴蒸餾水剛好沒過培養(yǎng)皿底部，維持糞便濕潤(rùn)，27℃恒溫箱中培養(yǎng)，每天取培養(yǎng)皿蓋，加少量蒸餾水鏡檢，觀察各期幼蟲形態(tài)并獲取圖片數(shù)據(jù)，直到第三期幼蟲出現(xiàn)，鑒定蟲種。

2 結(jié)果

2.1 草食動(dòng)物和靈長(zhǎng)動(dòng)物糞便檢查結(jié)果廣州市某野生動(dòng)物園各種野生動(dòng)物消化道寄生蟲感染情況見表1。結(jié)果顯示，總陽性率為50.6%，其中毛圓線蟲、毛尾線蟲、蛔蟲、類圓線蟲、鉤蟲、絳蟲、片形吸蟲、球蟲的感染率分別為37.4%（187/500）、5.0% （25/500）、5.4%（27/500）、2.0%（10/500）、0.2%（1/500）、2.4%（12/500）、0.4%（2/500）、7.8%（39/500）。靈長(zhǎng)類野生動(dòng)物主要感染毛尾線蟲、類圓線蟲和球蟲，其中猴科動(dòng)物毛尾線蟲感染率較高。草食類野生動(dòng)物主要感染毛圓線蟲、毛尾線蟲、蛔蟲、絳蟲、球蟲。

草食類和靈長(zhǎng)類野生動(dòng)物消化道寄生蟲感染動(dòng)態(tài)見圖1。

圖1 廣州市某野生動(dòng)物園草食類和靈長(zhǎng)類野生動(dòng)物寄生蟲感染動(dòng)態(tài)Fig.1 The dynamic of parasites infection of herbivores and primates in a wildlife park in Guangzhou

表1 廣州市某野生動(dòng)物園各種野生動(dòng)物消化道寄生蟲感染情況Table1 Gastrointestinal parasites infection in variouswild animals in awildlife park in Guangzhou

蟲球Coccidia2---------------1 39蟲吸Fasciola-----------------2 蟲worm絳Tape-----2-----------12蟲worm鉤Hook-----------------1 線yloides 蟲圓---1-1------1-1 3-10類Strongm 蟲or蛔R(shí)oundw2----1-----------27蟲線尾毛Trichuris-2 2 3 3 4 1-------1 2-25蟲ylus線7 圓-----------------18毛Trichostrong陽Positiverate)(%率% % % % % % % % % % %% 性33.315.442.950.030.033.320.00 0 0 0 0 50.00 33.375.020.050.6bers數(shù)性3 2 3 4 3 7 1 0 0 0 0 0 1 0 2 3 1 陽Positivenum253 品mple數(shù)樣Sambers nu9 137 8 10215 1 7 7 8 5 2 3 6 4 5 500 稱e 猩gm猴猴紫pithecusvetulusalnam猴aeusPresbytis leucocephalus 猴maeus 爪pithecusdelacouri猴猴Trachypithecusfrancoisi猴Mandrillussphinx 猿Chlorocebus aethiops猿ico goeldii名葉葉Chiropotessatanas猴葉mur fulvusrufus猴yi魈尾 尾 猴猴吼臂臂猿猩面Pongo py物頭葉哇Anim彩山Pygathrix ne猴長(zhǎng)狐葉蛛鼠尾面長(zhǎng)長(zhǎng)趾節(jié)36黃白動(dòng)七綠黑褐蜘Callim黑叢松iri sciureusAtelesgeoffro白紅Saim帽合AlouattapigraTrachymphalangus戴銀TrachyHylobates molochLeHylobates pileatusSysyndactylus 別al類計(jì)物動(dòng)Animcategory總

對(duì)長(zhǎng)頸鹿毛圓線蟲和猴科動(dòng)物（包括黑葉猴、白頭葉猴、紫面葉猴、七彩葉猴、爪哇葉猴、山魈、綠長(zhǎng)尾猴）毛尾線蟲感染情況進(jìn)行全年監(jiān)測(cè)，結(jié)果見圖2和圖3。

圖2 廣州市某野生動(dòng)物園長(zhǎng)頸鹿毛圓線蟲感染動(dòng)態(tài)Fig.2 The dynamic of Trichostrongylus infection in Giraffa cameleopardalis in a wildlife park in Guangzhou

圖3 廣州市某野生動(dòng)物猴科動(dòng)物毛尾線蟲感染動(dòng)態(tài)Fig.3 The dynamic of Trichuris infection in Ceropithecidae in a wildlife park in Guangzhou

2.2 幼蟲蟲種鑒定結(jié)果將待檢毛圓線蟲蟲卵培養(yǎng)至d2，鏡檢發(fā)現(xiàn)第一期幼蟲（圖4A）。培養(yǎng)至d5，鏡檢發(fā)現(xiàn)第二期幼蟲（圖4B）。培養(yǎng)至d8，發(fā)現(xiàn)大量第三期幼蟲（圖4C）。

通過觀察比較發(fā)現(xiàn)，第一期、第二期幼蟲處于動(dòng)態(tài)的變化之中，不能作為鑒定依據(jù)。而第三期幼蟲達(dá)到了外界環(huán)境中的最高發(fā)育階段，同一種類形態(tài)大小基本不變，種間差異較大，具有形態(tài)鑒定意義。待檢蟲體的第三期幼蟲形態(tài)特征多數(shù)與捻轉(zhuǎn)血矛線蟲形態(tài)相符，蟲體長(zhǎng)度為（763.86～764.00）μm，尾長(zhǎng)與尾寬在（4.04～4.61）μm且小于5 μm，尾鞘長(zhǎng)（84.48～71.31）μm，腸細(xì)胞數(shù)為16個(gè)，尾鞘呈波浪狀，末端兩個(gè)腸細(xì)胞膨大部交錯(cuò)排列，因此確定捻轉(zhuǎn)血矛線蟲為感染的優(yōu)勢(shì)蟲種。

圖4 毛圓線蟲的三期幼蟲（100×）Fig.4 Three stage larvae of Trichostrongylus（100×）

3 討論

本次野生動(dòng)物腸道寄生蟲流行病學(xué)調(diào)查針對(duì)18種草食類和18種靈長(zhǎng)類動(dòng)物。調(diào)查的草食動(dòng)物包括亞洲象、列氏水羚、羚牛、南非劍鈴、白跳羚、大羚羊、角馬、斑馬、藏羚羊、梅花鹿、駝羊、駱駝、彎角劍羚、彎角大羚羊、白面牛羚、高角羚，以上動(dòng)物均列入《世界自然保護(hù)聯(lián)盟》（IUCN）紅色名錄。IUCN紅色名錄是根據(jù)嚴(yán)格準(zhǔn)則去評(píng)估數(shù)以千計(jì)物種及亞種的絕種風(fēng)險(xiǎn)所編制而成的，準(zhǔn)則是根據(jù)物種及地區(qū)厘定，旨在向公眾及決策者反映保育工作的迫切性，并協(xié)助國(guó)際社會(huì)避免物種滅絕。此外，長(zhǎng)頸鹿、小龍馬（即矮馬）雖未列入相關(guān)保護(hù)名單，但屬于特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)物，具有獨(dú)特觀賞性與不菲經(jīng)濟(jì)價(jià)值。調(diào)查的靈長(zhǎng)類動(dòng)物包括黑猩猩、黃猩猩、紫面葉猴、白頭葉猴、爪哇葉猴、七彩葉猴、黑葉猴、山魈、綠長(zhǎng)尾猴、節(jié)尾猴、黑叢尾猴、褐狐猴、蜘蛛猴、松鼠猴、紅面吼猴、銀白長(zhǎng)臂猿、戴帽長(zhǎng)臂猿、合趾猿，均已列入《瀕危野生動(dòng)植物種國(guó)際貿(mào)易公約》（CITES）附錄I中，附錄I的物種明確規(guī)定禁止其國(guó)際性交易，若再進(jìn)行國(guó)際貿(mào)易會(huì)導(dǎo)致滅絕。因此，針對(duì)這些野生動(dòng)物進(jìn)行胃腸道寄生蟲調(diào)查，對(duì)于動(dòng)物園野生動(dòng)物保護(hù)和人類健康以及公共衛(wèi)生具有重要意義。

本次調(diào)查36種野生動(dòng)物中，28種野生動(dòng)物均有胃腸道寄生蟲感染，其中草食類動(dòng)物15種，靈長(zhǎng)類動(dòng)物13種，表明草食類和靈長(zhǎng)類野生動(dòng)物寄生蟲感染較為普遍。此外，草食類野生動(dòng)物主要感染毛圓線蟲、毛尾線蟲、蛔蟲、絳蟲、球蟲，偶有類圓線蟲、鉤蟲、片形吸蟲感染。靈長(zhǎng)類野生動(dòng)物主要感染毛尾線蟲、類圓線蟲和球蟲，偶有蛔蟲、絳蟲感染，檢查結(jié)果符合上述寄生蟲的宿主生物學(xué)特性，與以往的報(bào)道相符[8-11]。根據(jù)季節(jié)動(dòng)態(tài)觀察，草食類野生動(dòng)物在7月感染最嚴(yán)重，感染率達(dá)100.0%；靈長(zhǎng)類野生動(dòng)物在5月感染率最高，達(dá)到62.5%。感染高峰均為夏季，此時(shí)廣州溫度、濕度較高。相反，在11月、1月采集的樣品感染率均為最低水平，此時(shí)廣州市溫度最低，不適宜寄生蟲的生長(zhǎng)發(fā)育，可能與線蟲的滯育現(xiàn)象有關(guān)[12]。

該野生動(dòng)物園靈長(zhǎng)類野生動(dòng)物中，猴科毛尾線蟲感染較嚴(yán)重。根據(jù)季節(jié)動(dòng)態(tài)觀察，年平均感染率為31.2%，5月感染率高達(dá)83.3%，11月和1月糞檢均為陰性。同時(shí)，草食類野生動(dòng)物毛圓線蟲感染較為普遍，其中，長(zhǎng)頸鹿的感染尤為嚴(yán)重，年平均感染率為64.5%，5月與7月感染率最高，分別達(dá)97.7%和100.0%，11月與1月感染率最低時(shí)，也達(dá)到了14.6% 和46.0%。令人困惑的是該園每季度均用史克腸蟲清（阿苯達(dá)唑片）對(duì)園內(nèi)動(dòng)物實(shí)施驅(qū)蟲，說明可能由于給藥方案不合理、蟲體產(chǎn)生抗藥性或藥物失效等原因，驅(qū)蟲失效。

采用糞便培養(yǎng)法將蟲卵培養(yǎng)至第三期幼蟲以鑒定蟲種，培養(yǎng)溫度在王治才等[13]的基礎(chǔ)上稍作改進(jìn)，采用27℃培育，d8即孵育出大量三期幼蟲。摒棄貝爾曼法、廣口罐法和紗布袋浸泡法，將培養(yǎng)液置于倒置顯微鏡下，鏡檢觀察，再用10 μL移液槍吸取幼蟲至載玻片，加蓋玻片，放置顯微攝像系統(tǒng)拍照獲得圖片資料，從而對(duì)其進(jìn)行蟲種鑒定。由于毛圓科線蟲科內(nèi)蟲卵較為相似，同時(shí)與鉤蟲、結(jié)節(jié)蟲蟲卵難以區(qū)分，需要借助其他方法鑒別到種。雖然采用幼蟲培養(yǎng)能夠定種[14]，但費(fèi)時(shí)費(fèi)力，需要尋找快速高效的分子鑒定方法。

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INVESTIGATION OF PARASITIC INFECTION IN GASTROINTESTINAL TRACTS OF WILD ANIMALS IN A WILDLIFE PARK

LUO Qin, TAN Li-ping, HU Wei, ZHENG Guo-chao, LIN Li-qin, LU Peng-yun, LI Guo-qing
(College of Veterinary Medicine, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China)

To understand the infection status of gastrointestinal parasites in herbivores and primates in a wildlife park in Guangzhou, 500 fecal samples were collected from 36 species of wild animals and examined using fl otation and Lugol′s staining.Total positive rate was 50.6%, in which the infection rates of trichostrongyle, whipworm, roundworm, Strongyloides, hookworm, cestode, Fasciola and coccidia were 37.4%, 5.0%, 5.4%, 2.0%, 0.2%, 2.4%, 0.4% and 7.8%, respectively.The infection rates of herbivores and primates were 61.3% and 28.4%.Giraffa cameleopardalis and Ceropithecidae were severely infected with Trichostrongylus and Trichuris with average infection rates at 64.5% and 31.2% and noticeable seasonality.In addition, parasite eggs from Trichostrongylus positive feces developed into the third stage larvae (L3) for morphological identifi cation.The results showed that samples from Giraffa cameleopardalis, wildebeest and Oryx dammah were infected with several trichostrongyles, among which Haemonchus contortus was predominant.

Wild animal; gastrointestinal parasite; Haemonchus contortus; Trichuris; wildlife park

S858.927

：A

：1674-6422（2015）01-0027-06

2014-08-27

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（31272551）

羅琴，女，碩士研究生，預(yù)防獸醫(yī)學(xué)專業(yè)

李國(guó)清，E-mail∶ gqli@scau.edu.cn