高效液相色譜法測定消炎利膽沖劑中芍藥苷的含量

（寶雞文理學院化學化工學院，陜西寶雞721013）

消炎利膽沖劑主要是由白芍、厚樸、金錢草、五味子等18味中藥提取加工而成的復(fù)方制劑，具有消炎利膽、活血化瘀、行氣止痛、排石等作用［1］。方中主藥白芍的指標成分為芍藥苷。用HPLC 法測定芍藥苷含量［2－4］，操作簡便、專屬性強，適用于該制劑在生產(chǎn)中的質(zhì)量控制。

1 實驗

1.1 材料、試劑與儀器

芍藥苷對照品（批號：112426－201011），中國藥品生物制品檢定所；消炎利膽沖劑（批準文號：陜藥管制字［2001］第3674號），延安市中醫(yī)醫(yī)院制劑室。

甲醇、乙腈，均為色譜純；自制二次蒸餾水。

Agilent 1200 型高效液相色譜儀；UV mini－1240型紫外可見分光光度計；離心機；超聲清洗機。

1.2 色譜條件

色譜柱：Agilent ZORBAX SB－C18（250mm×4.6 mm，5μm）；柱溫：26 ℃；流動相：0.2%磷酸溶液－甲醇（58∶42，體積比）；流速：1.0mL·min－1；進樣量：20μL；檢測波長：230nm。

1.3 方法

1.3.1 供試品和對照品溶液的制備

取消炎利膽沖劑一小袋置于研缽中研成粉末狀，精密稱定，混勻，取細粉1g置于50mL 量瓶中，加入適量甲醇，超聲處理20 min，自然冷卻至室溫，用0.45μm的微孔膜過濾得供試品溶液。

另取芍藥苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成0.336mg·mL－1的芍藥苷對照品溶液。

按處方工藝制備不含白芍的供試品，加甲醇制成陰性對照品溶液。

1.3.2 芍藥苷含量的測定

參照芍藥苷國家標準中有關(guān)物質(zhì)的測定方法，采用HPLC測定消炎利膽沖劑中芍藥苷的含量。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 流動相的選擇

分別選擇水－甲醇、0.1%冰乙酸溶液－甲醇、0.2%磷酸溶液－甲醇（58∶42，體積比）作為流動相，最終根據(jù)理論塔板數(shù)和峰形，確定0.2%磷酸溶液－甲醇（58∶42）作為流動相。

2.1.2 檢測波長的選擇

通過全波長掃描，發(fā)現(xiàn)芍藥苷對照品的最大吸收波長為230nm，確定230nm 為檢測波長。

2.2 藥品提取方法的選擇

分別考察了索氏提取、超聲提取和加熱回流提取3種方法，結(jié)果顯示20 min超聲提取效果最好，故確定提取方法為超聲提取法。

2.3 HPLC測試

芍藥苷對照品、供試品及陰性對照品的HPLC 圖譜如圖1所示。

圖1 芍藥苷對照品（a）、供試品（b）及陰性對照品（c）的HPLC圖譜Fig.1 HPLC Chromatograms of paeoniflorin reference substance（a），the sample（b）and negative reference substance（c）

2.4 方法學考察

2.4.1 線性關(guān)系

精密量取芍藥苷對照品溶液適量，配制成濃度（μg·mL－1）分別為2.016、10.08、33.6、168、336的系列對照品溶液，用進樣針吸取20μL 進樣。以對照品溶液濃度（x）為橫坐標、色譜峰面積（y）為縱坐標繪制標準曲線，擬合得到回歸方程為：y＝28142x－29.842，R＝0.9998（n＝5）。說明芍藥苷在2.016～336μg·mL－1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4.2 穩(wěn)定性

取同一批次供試品（20100326）粉末5份，制備供試品溶液，在相同色譜條件下于0h、2h、4h、8h、24h重復(fù)進樣，結(jié)果測得芍藥苷平均峰面積為564.24，RSD 為0.89%，表明24h內(nèi)樣品溶液穩(wěn)定性較好。

2.4.3 重復(fù)性

取同一批次供試品（20100512）粉末6份，制備供試品溶液，精密量取20μL進樣測定，結(jié)果測得芍藥苷的平均含量為0.1124mg·g－1，RSD 為0.68%，表明重復(fù)性良好。

2.4.4 精密度

取同一批次供試品（20100914）粉末6份，制備供試品溶液，精密量取20μL，連續(xù)進樣6次，平均峰面積為547.58，RSD 為0.82%，表明精密度良好。

2.4.5 陰性對照品

將方中白芍去除后組成的各味藥，依據(jù)醫(yī)院此方的制備工藝及處方比例制成空白樣品，按1.3.1方法處理該樣品制備陰性對照品溶液。精密量取20μL進樣測定，結(jié)果表明基本無干擾。

2.4.6 回收率

取消炎利膽沖劑樣品6 份，研細，每份稱取約0.5g置于容量瓶中，用移液管加入3種不同濃度的芍藥苷對照品貯備液，按照樣品溶液制備方法操作，精密量取20μL溶液進樣測定，結(jié)果見表1。

表1 芍藥苷回收率實驗結(jié)果Tab.1 Results of recovery experiment of paeoniflorin

由表1 可知，芍藥苷的平均回收率為100.42%，RSD 為0.97%。

2.4.7 樣品測定

按擬定的含量測定方法測定消炎利膽沖劑中芍藥苷的含量，結(jié)果如表2所示。

表2 芍藥苷含量測定結(jié)果Tab.2 Results of content determination of paeoniflorin

3 結(jié)論

采用超聲法提取消炎利膽沖劑中的芍藥苷，建立了高效液相色譜法測定芍藥苷含量的方法。采用Agilent ZORBAX SB－C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5μm），柱溫26 ℃，流動相為0.2%磷酸溶液－甲醇（58∶42，體積比），流速1.0mL·min－1，檢測波長230nm。結(jié)果表明：在2.016～336μg·mL－1的范圍內(nèi)芍藥苷濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系，平均回收率為100.42%，RSD 為0.97%。該方法簡便、準確、重復(fù)性好，可用于消炎利膽沖劑中有效成分芍藥苷的含量測定。

［1］張紅梅，艾秀娥.消炎利膽沖劑的制備及薄層鑒別［J］.延安大學學報（醫(yī)學科學版），2004，2（3）：41.

［2］馮秋紅.HPLC 法測定胃瘍靈顆粒中芍藥苷的含量［J］.甘肅中醫(yī)，2006，19（3）：31－32.

［3］張黎娟，張雪梅，王蓉，等.HPLC 法檢測腦心通片中芍藥苷含量［J］.安徽醫(yī)藥，2011，15（8）：958－959.

［4］汪正宇，趙向陽.HPLC 法測定安胎益母丸中芍藥苷的含量［J］.中國現(xiàn)代醫(yī)生，2011，49（34）：90－91.