• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    鈣蛋白酶抑制劑減少大鼠局灶性腦缺血再灌注模型海馬CA1區(qū)神經(jīng)元凋亡*

    2015-12-27 13:22:39匡重伸許航黃征朱桂云王勝
    中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新 2015年29期
    關(guān)鍵詞:側(cè)腦室腦缺血蛋白酶

    匡重伸許航黃征朱桂云王勝

    鈣蛋白酶抑制劑減少大鼠局灶性腦缺血再灌注模型海馬CA1區(qū)神經(jīng)元凋亡*

    匡重伸①許航①黃征①朱桂云①王勝①

    目的:研究鈣蛋白酶抑制劑calpeptin干預(yù)治療對大鼠局灶性腦缺血再灌注模型海馬CA1區(qū)神經(jīng)元凋亡的影響及其可能機制。方法:選擇健康成年雄性SD大鼠128只作為研究動物,采用隨機數(shù)字表法將其分為MACO組、calpeptin組、DMSO組及sham組,制作大鼠左側(cè)大腦中動脈缺血再灌注模型,缺血2 h后分別再灌注6、12、24 h及48 h后進(jìn)行神經(jīng)功能學(xué)評分,免疫組化檢測海馬CA1區(qū)神經(jīng)元caspase-3的表達(dá),TUNEL法檢測原位細(xì)胞凋亡,觀察海馬CA1區(qū)神經(jīng)元凋亡。結(jié)果:DMSO組的各項檢測指標(biāo)與MACO組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);calpeptin組的神經(jīng)功能評分及caspase-3表達(dá)均低于同時間點MCAO組及DMSO組,比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);再灌注12、24、48 h后,calpeptin組神經(jīng)元凋亡情況優(yōu)于同時間點MCAO組及DMSO組,比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論:calpeptin可減少大鼠局灶性腦缺血再灌注模型海馬CA1區(qū)的神經(jīng)元凋亡,對腦缺血再灌注損傷有保護(hù)作用,其機制可能與抑制caspase-3的表達(dá)有關(guān)。

    鈣蛋白酶; 缺血再灌注損傷; 凋亡; caspase-3

    隨著對缺血性腦損傷分子機制的深入了解,發(fā)現(xiàn)半胱氨酸蛋白酶家族成員鈣激活中性蛋白酶(calpain)在缺血性腦損傷中起重要作用,眾多研究表明,腦缺血后calpain大量被激活,激活后的calpain可通過多種途徑導(dǎo)致神經(jīng)元壞死,許多證據(jù)表明calpain也參與了缺血后神經(jīng)元的凋亡[1]。本實驗采用大鼠大腦中動脈栓塞實驗動物模型及側(cè)腦室注射技術(shù),研究鈣蛋白酶抑制劑calpeptin對缺血再灌注后不同時相缺血側(cè)海馬CA1區(qū)神經(jīng)元凋亡、caspase-3表達(dá)及其對大鼠神經(jīng)功能的影響,現(xiàn)具體報道如下。

    1 材料與方法

    1.1 實驗動物 健康成年雄性SD大鼠128只,體重250~280 g,由石河子大學(xué)實驗動物中心提供。采用隨機數(shù)字表法將其分為四組,即缺血再灌注對照組(MACO組)、calpeptin治療組(calpeptin組)、溶劑二甲基亞砜對照組(DMSO組)及假手術(shù)組(sham組),每組32只。每組又分為6、12、24和48 h四小組,每組8只。

    1.2 方法

    1.2.1 給藥方法 鈣蛋白酶抑制劑calpeptin購自calbiochem公司,二甲亞砜(DMSO)購自sigama公司。手術(shù)前大鼠用3.6%的水合氯醛(360 mg/kg)腹腔注射麻醉后,俯臥固定于腦立體定位儀上,暴露前囟,調(diào)節(jié)微調(diào)旋鈕,使微量注射器針尖正對左側(cè)側(cè)腦室(前囟左側(cè)1.8 mm,后0.8 mm),鉆孔,將微量注射器下移至軟腦膜,緩慢進(jìn)針4.5 mm,calpeptin組制作MACO前左側(cè)側(cè)腦室注射calpeptin 50 μg(溶于二甲基亞砜5 μL中);DMSO組MACO術(shù)前左側(cè)側(cè)腦室注射DMSO 5μL,注射時間5 min,留針5 min,注射后即進(jìn)行造模手術(shù)。

    1.2.2 MCAO模型的建立 參照Belayev等[2]改良的Longa方法,大鼠側(cè)腦室給藥后,在室溫(25 ℃)條件下,仰臥固定于手術(shù)臺上,頸部正中切口,分離左側(cè)頸總動脈(CCA)、頸外動脈(ECA)、頸內(nèi)動脈(ICA)及翼腭動脈(不結(jié)扎該動脈),保護(hù)迷走神經(jīng)、膈神經(jīng)及氣管,結(jié)扎ECA近端,結(jié)扎CCA近心端,在CCA近動脈分叉處剪一小口后插入末端沾有石蠟的直徑為0.25 mm(4-0)尼龍線,插入深度距CCA分叉處(18.0±1.0)mm,此時有輕度的阻力感,扎緊CCA及其內(nèi)的尼龍線,假手術(shù)組尼龍線插入的深度為10 mm,其余步驟相同,手術(shù)期間用100 W的白熾燈照射,保持大鼠肛溫在36.5~37.5 ℃。2 h后小心拉出尼龍線10 mm即造成再灌注模型,再次扎緊CCA及其內(nèi)的尼龍線。

    1.2.3 神經(jīng)功能評價 大鼠麻醉清醒后,參考Bederson等[3]5分制評分標(biāo)準(zhǔn)在相應(yīng)的時間點對其進(jìn)行神經(jīng)功能評定,0分:無神經(jīng)損傷體征;1分:不能完全伸展對側(cè)前爪;2分:向?qū)?cè)轉(zhuǎn)圈;3分:向?qū)?cè)傾倒;4分:不能自發(fā)行走,意識喪失。分值越高說明大鼠行為障礙越嚴(yán)重。

    1.2.4 切片標(biāo)本制備 實驗動物在設(shè)定時間點神經(jīng)功能評分后經(jīng)10%的水合氯醛腹腔麻醉后,依次用4 ℃生理鹽水200 mL及4 ℃ 4%多聚甲醛400 mL經(jīng)左心室升主動脈灌注,灌注完立即斷頭取腦,置4%多聚甲醛中后固定10 h,酒精梯度脫水,石蠟包埋,在海馬與齒狀回互抱處取材,每隔100 μm連續(xù)6 μm切片6張,切片貼附于預(yù)處理的載玻片上,用前脫蠟至水。相鄰切片分別行原位細(xì)胞凋亡、caspase-3檢測。

    1.2.5 caspase-3活性蛋白檢測 切片脫蠟至水,滴加3%H2O2室溫20 min,蒸餾水洗3 min×3次,微波修復(fù)抗原;滴加牛血清封閉液,室溫20 min,甩去多余液體,不洗;滴加Ⅰ抗(兔抗大鼠caspase-3單克隆抗體),37 ℃孵育120 min,PBS洗3 min×3次;滴加Ⅱ抗(生物素標(biāo)記羊抗兔IgG),37 ℃孵育30 min,PBS 洗3 min×3次;滴加試劑SABC,37 ℃孵育20 min,PBS洗5 min×4次;DAB顯色,PBS洗滌,蘇木素輕度復(fù)染、脫水、透明、封片、顯微鏡觀察。胞漿著色呈棕黃色為陽性細(xì)胞。

    1.2.6 原位細(xì)胞凋亡檢測 用TdT介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記技術(shù)[terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT)-mediated dUTP nick end-labeling,TUNEL]檢測大鼠缺血側(cè)海馬CA1區(qū)的神經(jīng)元凋亡,TUNEL試劑盒購自博士德公司。具體操作方法按說明書進(jìn)行,即經(jīng)過氧化氫/甲醇、檸檬酸鈉處理后,滴加TUNEL反應(yīng)混合液,37 ℃孵育60 min,隨后滴加過氧化物酶標(biāo)記的抗熒光抗體,37 ℃孵育30 min。最后滴加DAB顯色底物,室溫、避光,顯微鏡下控制染色深淺。常規(guī)脫水、透明、封片。每一批實驗中設(shè)立陽性對照和陰性對照。陽性對照為在TUNEL標(biāo)記反應(yīng)前用DNaseⅠ(1 mg/mL)37 ℃溫箱孵育切片20 min,結(jié)果細(xì)胞核呈陽性。陰性對照為TUNEL標(biāo)記反應(yīng)液中省去TUNEL反應(yīng)混合液,而只加標(biāo)記液,結(jié)果細(xì)胞不顯色。在高倍鏡(×400)下觀察海馬CA1區(qū)中相互不重疊的4個視野,計數(shù)其中陽性細(xì)胞數(shù),取均值。

    1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 所得數(shù)據(jù)用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件包進(jìn)行統(tǒng)計分析,計量資料以(±s)表示,比較采用t檢驗,以P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 大鼠神經(jīng)功能學(xué)評分比較 sham組大鼠蘇醒后未見明顯的神經(jīng)功能學(xué)缺失;MCAO組再灌注24 h神經(jīng)功能缺失最嚴(yán)重。DMSO組神經(jīng)功能評分與MCAO組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);calpeptin組神經(jīng)功能評分低于MCAO組及DMSO組,比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表1。

    2.2 各組海馬CA1區(qū)caspase-3表達(dá)情況比較 sham組的caspase-3表達(dá)很少;DMSO組caspase-3表達(dá)與同時間點MCAO組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);calpeptin組caspase-3表達(dá)低于同時間點MCAO組及DMSO組,比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表2。

    2.3 海馬CA1區(qū)神經(jīng)元凋亡情況比較 sham組的神經(jīng)元凋亡很少,MCAO組在缺血2 h再灌注6 h有少量的神經(jīng)元凋亡,在24 h達(dá)高峰,DMSO組神經(jīng)元凋亡情況與同時間點MCAO組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05);再灌注12、24、48 h后,calpeptin組神經(jīng)元凋亡情況優(yōu)于同時間點MCAO組及DMSO組,比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表3。

    表1 各組大鼠不同時間點神經(jīng)功能評分情況比較(±s) 分

    表1 各組大鼠不同時間點神經(jīng)功能評分情況比較(±s) 分

    *P<0.05,**P<0.01,與MCAO組同時間點比較;△P<0.05,△△P<0.01,與DMSO組同時間點比較

    組別 6 h 12 h 24 h 48 h MCAO組(n=32) 2.50±0.53 2.63±0.52 2.75±0.46 2.38±0.52 DMSO組(n=32) 2.63±0.52 2.50±0.76 2.63±0.74 2.38±0.74 calpeptin組(n=32) 1.75±0.71*△ 1.75±0.46*△ 1.50±0.53**△△ 1.63±0.74*△

    表2 各組不同時間點caspase-3表達(dá)情況比較(±s)

    表2 各組不同時間點caspase-3表達(dá)情況比較(±s)

    *P<0.05,**P<0.01,與MCAO組同時間點比較;△P<0.05,△△P<0.01,與DMSO組同時間點比較

    組別 6 h 12 h 24 h 48 h sham組(n=32) 1.75±0.41 1.68±0.35 1.82±0.45 1.71±0.38 MCAO組(n=32) 13.75±4.23 30.13±6.33 50.13±12.92 36.13±10.67 DMSO組(n=32) 14.50±4.38 29.63±5.51 52.63±13.18 37.5±12.44 calpeptin組(n=32) 9.25±3.73*△ 22.63±7.48* 35.75±11.93**△△ 24.38±10.46*△

    表3 各組不同時間點神經(jīng)元凋亡情況比較(±s)

    表3 各組不同時間點神經(jīng)元凋亡情況比較(±s)

    *P<0.05,**P<0.01,與MCAO組同時間點比較;△P<0.05,△△P<0.01,與DMSO組同時間點比較

    組別 6 h 12 h 24 h 48 h sham組(n=32) 1.55±0.38 1.48±0.32 1.61±0.41 1.57±0.35 MCAO組(n=32) 4.63±1.58 26.50±7.19 44.75±13.44 33.50±9.65 DMSO組(n=32) 4.15±1.78 27.75±6.23 45.63±13.15 31.25±8.07 calpeptin組(n=32) 2.75±1.82 16.75±5.63**△△ 30.75±11.79*△ 21.25±5.97**△

    3 討論

    大量研究表明,腦缺血可引起如下神經(jīng)損傷級聯(lián)反應(yīng):興奮性氨基酸自突觸前膜大量釋放;谷氨酸受體過度激活引起大量Ca2+釋放入胞漿;導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)Ca2+超載;細(xì)胞內(nèi)Ca2+超載使依賴于Ca2+的胞內(nèi)蛋白類(包括鈣調(diào)蛋白、蛋白激酶C、calpain、磷脂酶C和A2、一氧化氮合酶)被過度激活;激活的蛋白與酶類啟動或參與細(xì)胞病理損傷,最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡[4]。calpain在缺血性腦損傷中起著重要的作用而倍受關(guān)注,是近年來研究的熱點之一[5]。calpain是半胱氨酸異二聚體蛋白酶,由一個催化亞單元(80 kD)和一個調(diào)節(jié)亞單元(29 kD)組成,分為calpainⅠ(又稱μ-calpain)和calpainⅡ(m-calpain)兩種類型,二者的調(diào)節(jié)亞單元相同,催化亞單元不同,激活所需的Ca2+濃度不同,可分別被微摩爾和毫摩爾水平的Ca2+激活[6]。在生理狀態(tài)下,calpain以酶原的形式存在于細(xì)胞質(zhì)中,在病理情況下(如缺血等),細(xì)胞內(nèi)Ca2+超載,Ca2+與calpain催化區(qū)的特異性鈣調(diào)蛋白樣位點結(jié)合引起構(gòu)象改變,從而使其激活[7]。激活后的calpain可水解關(guān)鍵的細(xì)胞骨架蛋白(如MAP2、spectrin、tubulin以及ankylin)而導(dǎo)致細(xì)胞死亡[8]。Yamashima等[9]研究發(fā)現(xiàn)猴子短暫性全腦缺血后,海馬CA1區(qū)神經(jīng)元內(nèi)μ-calpain大量激活,激活后的μ-calpain可水解溶酶體膜連接蛋白(lamp-1),導(dǎo)致溶酶體破裂,導(dǎo)致水解酶大量釋放,造成神經(jīng)元壞死。激活后的calpain還可引起線粒體滲透性轉(zhuǎn)變(MTP),導(dǎo)致細(xì)胞死亡[10]。

    以往一直認(rèn)為calpain主要參與細(xì)胞壞死,但越來越多的證據(jù)表明它也在凋亡中也起著重要作用。Jordan等[11]研究發(fā)現(xiàn)鈣蛋白酶抑制劑calpeptin及MDL28170可顯著抑制培養(yǎng)的神經(jīng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞及海馬神經(jīng)元的凋亡,說明calpain參與了神經(jīng)元的凋亡的發(fā)生。以往的研究發(fā)現(xiàn)側(cè)腦室注射鈣蛋白酶抑制劑calpeptin可顯著減少MCAO術(shù)后大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的凋亡,進(jìn)一步證實calpain參與了腦缺血后神經(jīng)元凋亡[12]。calpain參與腦缺血后神經(jīng)元凋亡的機制目前尚不清楚,本研究發(fā)現(xiàn)calpeptin可減少MCAO術(shù)后大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元caspase-3的表達(dá),caspase-3是執(zhí)行細(xì)胞凋亡的最重要的蛋白,因此推測calpeptin可能是通過抑制caspase-3的表達(dá)而抑制神經(jīng)元凋亡。有研究發(fā)現(xiàn)calpain可切割pro-caspase-3和pro-caspase-9等,促進(jìn)caspase-3的激活[13]。calpain可促進(jìn)caspase-3的激活從而促進(jìn)caspase-3介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡[14]。Samantaray等[15]的研究發(fā)現(xiàn):calpain抑制劑CX295可顯著抑制大鼠單側(cè)低氧缺血后caspase-3的表達(dá),進(jìn)一步研究表明pro-caspase-3可被calpain裂解,形成29 kDa的片段,該片斷很容易被進(jìn)一步的裂解而激活。本實驗中,calpeptin抑制caspase-3的表達(dá)的具體機制不明,有待于進(jìn)一步的研究。

    [1] Sheldon R A,Sadjadi R,Lam M,et al.Alteration in downstream hypoxia gene signaling in neonatal glutathione peroxidase overexpressing mouse brain after hypoxia-ischemia[J].Developmental Neuroscience,2015,37(4-5):398-406.

    [2] Belayev L,Alonso O F,Busto R,et al.Middle cerebral artery occlusion in the rat by intraluminal suture:neurological and pathological evaluation of an improved model[J].Stroke,1996,27 (9):1616-1623.

    [3] Bederson J B,Pitts L H,Tsuj M,et al.Rat middle cerebral artery occlusion evaluation of the model and development of a neurologic evaluation[J].Stroke,1986,17(3):472-476.

    [4] Suzuki S,Murotomi K,Nakajima Y,et al.Development of an artificial calcium-dependent transcription factor to detect sustained intracellular calcium elevation[J].ACS Synthetic Biology,2014,3 (10):717-722.

    [5] Ding Z J,Chen X,Tang X X,et al.Calpain inhibitor PD150606 attenuates glutamate induced spiral ganglion neuron apoptosis through apoptosis inducing factor pathway in vitro[J].PloS One,2015,10 (4):e0123130.

    [6] Park J Y,Jang S Y,Shin Y K,et al.Calcium-dependent proteasome activation is required for axonal neurofilament degradation[J].Neural Regen Res,2013,8(36):3401-3409.

    [7] Jordan J,Galindo M F,Miller R J.Role of calpain and interleukin-1-beta converting enzyme-like proteases in the beta-amyloid-induced death of rat hippocampal neurons in culture[J].J Neurochem,1997,68(4):1612-1621.

    [8] Peng S,Kuang Z,Zhang Y,et al.The protective effects and potential mechanism of Calpain inhibitor Calpeptin against focalcerebral ischemia-reperfusion injury in rats[J].Mol Biol Rep,2011,38(2):905-912.

    [9] Yamashima T,Tonchev A B,Tsukada T,et al.Sustained calpain activation associated with lysosomal rupture executes necrosis of the postischemic ca1 neurons in primates[J].Hippocampus,2003,13 (7):791-800.

    [10] Müller G J,Hasseldam H,Rasmussen R S,et al.Dexamethasone enhances necrosis-like neuronal death in ischemic rat hippocampus involving μ-calpain activation[J].Exp Neurol,2014,261(1):711-719.

    [11] Jordan J,Galindo M F,Miller R J.Role of calpain and interleukin-1-beta converting enzyme-like proteases in the beta-amyloidinduced death of rat hippocampal neurons in culture[J].J Neurochem,1997,68(4):1612-1621.

    [12] Li H,Zhang N,Sun G,et al.Inhibition of the group I mGluRs reduces acute brain damage and improves long-term histological outcomes after photothrombosis-induced ischaemia[J].ASN Neuro,2013,5(3):195-207.

    [13] Kim C,Yun N,Lee Y M,et al.Gel-based protease proteomics for identifying the novel calpain substrates in dopaminergic neuronal cell[J].J Biol Chem,2013,288(51):36 717-36 732.

    [14] Song Y J,Li D,Pan L P,et al.The suppression of epileptiform discharges in cultured hippocampal neurons is regulated via alterations in full-length tropomyosin-related kinase type B receptors signalling activity[J].The European Journal of Neuroscience,2014,40(3):2564-2575.

    [15] Samantaray S,Patel K S,Knaryan V H,et al.Calpain inhibition prevents ethanol-induced alterations in spinal motoneurons[J]. Neurochem Res,2013,38(8):1734-1741.

    醫(yī)學(xué)論文表與圖的寫作要求

    一、制表的基本要求

    1.重點突出,簡單明了,主謂分明,層次清楚。

    2.結(jié)構(gòu)完整,有自明性,表的內(nèi)容不要與文字、插圖重復(fù)。

    3.表中的量、單位、符號、縮略語等須與正文一致。

    二、圖應(yīng)具有自明性,即只看圖、圖題和圖例,不閱讀正文,就可理解圖意;內(nèi)容不要與文字、表格重復(fù);類型應(yīng)與資料性質(zhì)匹配。

    1.線條圖要求線條均勻、主輔線分明,并使數(shù)軸上刻度值的標(biāo)法符合數(shù)學(xué)原則。

    2.照片圖要求有良好的清晰度和對比度,層次分明,反差適中,沒有雜亂的背景。

    3.圖高度與寬度的比例一般掌握在5∶7左右。

    4.圖中的量、單位、符號、縮略語等須與正文一致。

    Effect of Calpain Inhibitor in Reducing Neuron Apoptosis of Hippocampal CA1 Section of the Focal Cerebral Ischemia-Reperfusion Model in Rats/

    KUANG Zhong-shen,XU Hang,HUANG Zheng,et al.//Medical Innovation of China,2015,12(29):015-018

    Objective:To study the influence and mechanism of calpain inhibitor calpeptin in neuron apoptosis of hippocampal CA1 section in rats with focal cerebral ischemia-reperfusion.Method:128 health adult male SD rates were selected as the research animals.They were divided into the MACO group,the calpeptin group,the DMSO group and the sham group.The left middle cerebral artery(MCA) occlusion model was performed.2 hours after the left middle cerebral artery occlusion,recirculations of 6,12,24 hours and 48 hours were given to the rates.6,12,24 hours and 48 hours after the recirculations,the neurological functions of the rats were evaluated,immunohistochemistry was used to detect the expression of caspase-3 in hippocampal CA1 section and the neuronal apoptosis in hippocampal CA1 section was detected by the method of terminal deoxynucleotidyl transferase(TdT)-mediated dUTP nick end-labelling(TUNEL).Result:The differences in the indexes between the MCAO group and the MACO group were not statistically significant (P>0.05).The scores of neurological functions and the expression of caspase-3 in the calpeptin group were lower than those in the MCAO group and the MACO group,the differences were statistically significant(P<0.05).12,24 hours and 48 hours after the recirculations,the situations of neuronal apoptosis in the calpeptin group were better than those in the MCAO group and the MACO group,the differences were statistically significant(P<0.05).Conclusion:Calpeptin can reduce the neuronal apoptosis of hippocampal CA1 section in rats with ischemia-reperfusion injury and the mechanism may be related to the inhibition of the expression of caspase-3.

    Calpain; Ischemia-reperfusion injury; Apoptosis; Caspase-3

    10.3969/j.issn.1674-4985.2015.29.005

    2015-07-03) (本文編輯:王利)

    國家自然科學(xué)基金地區(qū)基金(81360203)

    ①石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院 新疆 石河子 832008

    匡重伸

    First-author’s address:The First Affiliated Hospital of Medical School of Shihezi University,Shihezi 832008,China

    猜你喜歡
    側(cè)腦室腦缺血蛋白酶
    147例側(cè)腦室增寬胎兒染色體核型分析
    思鄉(xiāng)與蛋白酶
    文苑(2018年22期)2018-11-19 02:54:30
    多胚蛋白酶 高效養(yǎng)畜禽
    IgA蛋白酶在IgA腎病治療中的潛在價值
    原花青素對腦缺血再灌注損傷后腸道功能的保護(hù)作用
    側(cè)腦室內(nèi)罕見膠質(zhì)肉瘤一例
    磁共振成像(2015年1期)2015-12-23 08:52:21
    血必凈對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其機制
    細(xì)胞外組蛋白與腦缺血再灌注損傷關(guān)系的初探
    側(cè)腦室注射DIDS對缺血再灌注腦損傷大鼠神經(jīng)元凋亡的拮抗作用
    冷卻豬肉中產(chǎn)蛋白酶腐敗菌的分離鑒定
    国产精品久久视频播放| 免费一级毛片在线播放高清视频| 一本久久中文字幕| 在线免费观看不下载黄p国产| 国产久久久一区二区三区| 久久久久久久久中文| 欧美最新免费一区二区三区| 国产一区二区三区av在线 | 国产精品人妻久久久影院| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 中国美白少妇内射xxxbb| 亚洲电影在线观看av| 最新中文字幕久久久久| 嫩草影院入口| 欧美另类亚洲清纯唯美| 成年版毛片免费区| 精华霜和精华液先用哪个| or卡值多少钱| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 日本色播在线视频| 日韩欧美免费精品| 精品午夜福利视频在线观看一区| 白带黄色成豆腐渣| 色综合亚洲欧美另类图片| 日日摸夜夜添夜夜爱| 国产精品伦人一区二区| 又黄又爽又免费观看的视频| 亚洲自拍偷在线| 乱人视频在线观看| 男人狂女人下面高潮的视频| 欧美激情国产日韩精品一区| 午夜福利18| 一进一出好大好爽视频| 日韩高清综合在线| 亚洲av不卡在线观看| 一个人看视频在线观看www免费| 日本黄色视频三级网站网址| 久久精品影院6| 给我免费播放毛片高清在线观看| 丝袜喷水一区| 成年女人看的毛片在线观看| 亚洲精品粉嫩美女一区| 久久人人爽人人片av| 日本在线视频免费播放| 丰满乱子伦码专区| 亚洲国产精品成人综合色| 特大巨黑吊av在线直播| 国产成人a∨麻豆精品| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 国产高清有码在线观看视频| 国产一区二区激情短视频| 在线观看一区二区三区| 国产精品av视频在线免费观看| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄 | 国产精品嫩草影院av在线观看| 可以在线观看的亚洲视频| 日本黄色片子视频| 级片在线观看| 在线国产一区二区在线| 婷婷精品国产亚洲av| 久久精品人妻少妇| 深夜a级毛片| 亚洲精品日韩av片在线观看| 欧美日韩综合久久久久久| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 国产综合懂色| 老司机福利观看| 国产v大片淫在线免费观看| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 在线看三级毛片| 干丝袜人妻中文字幕| 国产亚洲精品久久久com| 日韩高清综合在线| 国产淫片久久久久久久久| 夜夜夜夜夜久久久久| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 免费av观看视频| 九九在线视频观看精品| 色5月婷婷丁香| 黄色视频,在线免费观看| 亚洲成人久久性| 国语自产精品视频在线第100页| 免费观看在线日韩| 成人特级黄色片久久久久久久| 嫩草影视91久久| 精品人妻视频免费看| 一进一出抽搐动态| 午夜影院日韩av| 久久亚洲精品不卡| 天堂动漫精品| 久久久精品94久久精品| 偷拍熟女少妇极品色| 欧美在线一区亚洲| 国产亚洲av嫩草精品影院| 国产单亲对白刺激| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 国产精品一区二区性色av| avwww免费| 亚洲av成人av| av在线播放精品| 在线免费十八禁| 内地一区二区视频在线| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 中文字幕久久专区| 久久久久久久久久成人| 国产在线男女| 国产伦一二天堂av在线观看| 亚洲不卡免费看| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 晚上一个人看的免费电影| av黄色大香蕉| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 欧美三级亚洲精品| 日韩成人伦理影院| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 婷婷精品国产亚洲av| 中文亚洲av片在线观看爽| 国产精品精品国产色婷婷| 九九热线精品视视频播放| 美女高潮的动态| 日日干狠狠操夜夜爽| 欧美成人a在线观看| 亚洲av不卡在线观看| 日韩成人伦理影院| 日韩欧美在线乱码| 精品久久久久久久久久久久久| 国产免费男女视频| h日本视频在线播放| 精华霜和精华液先用哪个| 国产av不卡久久| 99久久无色码亚洲精品果冻| 简卡轻食公司| 色尼玛亚洲综合影院| 男插女下体视频免费在线播放| 日本一二三区视频观看| 成年av动漫网址| 午夜久久久久精精品| 免费观看精品视频网站| 午夜激情欧美在线| 成人av在线播放网站| 深夜精品福利| 久久欧美精品欧美久久欧美| 国产精品,欧美在线| 久久6这里有精品| 色视频www国产| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 婷婷色综合大香蕉| 99九九线精品视频在线观看视频| 男人和女人高潮做爰伦理| 成熟少妇高潮喷水视频| 91狼人影院| 国产三级中文精品| 日本精品一区二区三区蜜桃| 一区二区三区免费毛片| 国产精品久久电影中文字幕| 精品福利观看| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 在线看三级毛片| 最近最新中文字幕大全电影3| 日本黄色片子视频| 日韩 亚洲 欧美在线| 欧美xxxx性猛交bbbb| 免费在线观看成人毛片| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 中文资源天堂在线| 国产探花在线观看一区二区| 青春草视频在线免费观看| 看黄色毛片网站| 国产极品精品免费视频能看的| 久久这里只有精品中国| 99国产精品一区二区蜜桃av| 又爽又黄无遮挡网站| 久久久久久久久中文| 亚洲精品在线观看二区| 久久久久久大精品| 国产人妻一区二区三区在| 99热这里只有是精品50| 亚洲国产精品合色在线| 国产乱人视频| 精品久久国产蜜桃| 最近在线观看免费完整版| 淫妇啪啪啪对白视频| 国产精品1区2区在线观看.| 在线观看一区二区三区| 色播亚洲综合网| 真实男女啪啪啪动态图| 国产男靠女视频免费网站| 男女之事视频高清在线观看| 最新在线观看一区二区三区| 国产在视频线在精品| 免费看光身美女| av在线蜜桃| 色哟哟哟哟哟哟| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 精品人妻视频免费看| 亚洲中文字幕日韩| 可以在线观看毛片的网站| 亚洲av二区三区四区| 少妇被粗大猛烈的视频| 免费看美女性在线毛片视频| 国产日本99.免费观看| 18+在线观看网站| 永久网站在线| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 99久久无色码亚洲精品果冻| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 国产黄片美女视频| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 午夜福利在线观看吧| 日本三级黄在线观看| 小说图片视频综合网站| 美女免费视频网站| 97在线视频观看| 97热精品久久久久久| 亚洲四区av| 99热6这里只有精品| 成熟少妇高潮喷水视频| 不卡视频在线观看欧美| 亚洲欧美精品自产自拍| 久久精品国产自在天天线| 日韩精品有码人妻一区| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 男女边吃奶边做爰视频| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 成人美女网站在线观看视频| 国产免费一级a男人的天堂| 人人妻人人看人人澡| 看片在线看免费视频| 国产精品亚洲美女久久久| 老女人水多毛片| 国产单亲对白刺激| 特级一级黄色大片| 波野结衣二区三区在线| 国产精品无大码| 亚洲内射少妇av| 美女 人体艺术 gogo| 啦啦啦韩国在线观看视频| 国产乱人视频| 欧美性感艳星| 91精品国产九色| 国产毛片a区久久久久| 97碰自拍视频| 亚洲18禁久久av| 春色校园在线视频观看| 成年女人毛片免费观看观看9| 简卡轻食公司| 国产av一区在线观看免费| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 国内精品美女久久久久久| 日本色播在线视频| 露出奶头的视频| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 中文字幕av在线有码专区| 欧美+亚洲+日韩+国产| 一个人免费在线观看电影| 亚洲精品456在线播放app| 国产精品99久久久久久久久| 大型黄色视频在线免费观看| 精品国产三级普通话版| 亚洲18禁久久av| 午夜福利在线观看吧| 99热全是精品| 波多野结衣巨乳人妻| 在线a可以看的网站| 香蕉av资源在线| 麻豆国产av国片精品| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 国产精品嫩草影院av在线观看| av专区在线播放| 国产高潮美女av| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 亚洲综合色惰| 网址你懂的国产日韩在线| 中文字幕久久专区| 在线播放国产精品三级| 麻豆乱淫一区二区| 日本三级黄在线观看| 国产免费男女视频| 亚洲真实伦在线观看| 嫩草影院新地址| 欧美丝袜亚洲另类| 日韩成人伦理影院| av在线蜜桃| 久久久久久久久久黄片| 日韩 亚洲 欧美在线| 国产免费男女视频| 男女下面进入的视频免费午夜| 午夜老司机福利剧场| 国产av麻豆久久久久久久| 国产三级在线视频| 久久久国产成人免费| av天堂中文字幕网| 我要搜黄色片| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 男人舔女人下体高潮全视频| 午夜福利成人在线免费观看| 精品久久久久久久久亚洲| 久久精品夜色国产| 三级国产精品欧美在线观看| 男人和女人高潮做爰伦理| 成人精品一区二区免费| 欧美日韩在线观看h| 国产精品日韩av在线免费观看| 波多野结衣高清作品| 色播亚洲综合网| 国产精品久久电影中文字幕| 国产精品久久久久久久电影| 久久精品91蜜桃| 婷婷精品国产亚洲av在线| 一级毛片久久久久久久久女| 老司机午夜福利在线观看视频| 国产精品国产高清国产av| 久久人人爽人人爽人人片va| 久久久国产成人精品二区| 欧美最新免费一区二区三区| 国产一区二区在线观看日韩| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 国产视频一区二区在线看| 男女下面进入的视频免费午夜| 黑人高潮一二区| 在线免费十八禁| 国产免费男女视频| 国产精品久久久久久精品电影| 日韩欧美精品免费久久| 十八禁国产超污无遮挡网站| 国产三级中文精品| or卡值多少钱| 亚洲人成网站在线播| 国产一级毛片七仙女欲春2| 国产精品,欧美在线| 深爱激情五月婷婷| 成人二区视频| 日本-黄色视频高清免费观看| 岛国在线免费视频观看| 久久久欧美国产精品| 在线观看一区二区三区| 美女高潮的动态| 国产极品精品免费视频能看的| 超碰av人人做人人爽久久| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 国产免费一级a男人的天堂| 成人午夜高清在线视频| 啦啦啦韩国在线观看视频| 日韩一本色道免费dvd| 欧美成人a在线观看| 亚洲在线观看片| 亚洲自拍偷在线| 久久九九热精品免费| 国产色婷婷99| ponron亚洲| 露出奶头的视频| 亚洲第一电影网av| 国产一级毛片七仙女欲春2| 亚洲七黄色美女视频| 欧美潮喷喷水| 99久久精品热视频| 听说在线观看完整版免费高清| 国产精品伦人一区二区| 黄色日韩在线| 欧美+日韩+精品| 村上凉子中文字幕在线| 亚州av有码| 国产视频内射| 国产成人freesex在线 | 亚洲av第一区精品v没综合| 99热这里只有是精品50| 欧美bdsm另类| 麻豆精品久久久久久蜜桃| av.在线天堂| 校园人妻丝袜中文字幕| 亚洲在线自拍视频| 色在线成人网| 一个人观看的视频www高清免费观看| 国产精品99久久久久久久久| 天堂√8在线中文| 成人亚洲精品av一区二区| 中国美白少妇内射xxxbb| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 给我免费播放毛片高清在线观看| 淫妇啪啪啪对白视频| 日韩中字成人| 久久精品夜色国产| h日本视频在线播放| 乱人视频在线观看| 看片在线看免费视频| 国产亚洲91精品色在线| 午夜爱爱视频在线播放| 久久久久久久久久成人| 国产成年人精品一区二区| 午夜精品国产一区二区电影 | 午夜福利成人在线免费观看| 欧美+亚洲+日韩+国产| 69av精品久久久久久| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 老熟妇仑乱视频hdxx| 欧美性猛交黑人性爽| 免费观看人在逋| 国内精品久久久久精免费| 久久久久久久久大av| 中出人妻视频一区二区| 寂寞人妻少妇视频99o| 亚洲精品国产成人久久av| 亚洲人成网站在线播| 日韩人妻高清精品专区| 国产黄色小视频在线观看| 国产精品电影一区二区三区| 深夜a级毛片| 亚洲精品久久国产高清桃花| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 长腿黑丝高跟| 国产单亲对白刺激| 老熟妇仑乱视频hdxx| 在现免费观看毛片| 又黄又爽又免费观看的视频| 高清日韩中文字幕在线| 久久人人爽人人片av| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 久久精品影院6| 成年av动漫网址| 亚洲美女黄片视频| 人妻少妇偷人精品九色| 熟女电影av网| 一区二区三区免费毛片| 欧美+日韩+精品| 99久久精品热视频| 女人被狂操c到高潮| 免费无遮挡裸体视频| 校园人妻丝袜中文字幕| 乱码一卡2卡4卡精品| 一区福利在线观看| 久久精品国产亚洲网站| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 少妇的逼好多水| 最近最新中文字幕大全电影3| 3wmmmm亚洲av在线观看| 成人鲁丝片一二三区免费| 12—13女人毛片做爰片一| 午夜老司机福利剧场| 国产成人freesex在线 | 免费观看精品视频网站| 丰满人妻一区二区三区视频av| 久久久久久久久久久丰满| avwww免费| 人妻久久中文字幕网| 国产男靠女视频免费网站| 男女视频在线观看网站免费| 成人亚洲精品av一区二区| 男人舔奶头视频| 日本爱情动作片www.在线观看 | 国产一区二区在线av高清观看| 午夜福利成人在线免费观看| 久久热精品热| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 国产精品99久久久久久久久| a级毛片免费高清观看在线播放| av黄色大香蕉| 国产三级中文精品| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 免费av不卡在线播放| 免费搜索国产男女视频| 搞女人的毛片| 偷拍熟女少妇极品色| 精品久久久久久久久久久久久| 日韩精品有码人妻一区| 成熟少妇高潮喷水视频| 久久热精品热| 精品人妻熟女av久视频| 伦理电影大哥的女人| 国产精品人妻久久久影院| 别揉我奶头 嗯啊视频| 亚洲国产精品sss在线观看| 高清毛片免费观看视频网站| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 久久精品综合一区二区三区| 亚洲丝袜综合中文字幕| 高清日韩中文字幕在线| 亚洲第一电影网av| 国产精品一区二区免费欧美| 国产片特级美女逼逼视频| 午夜视频国产福利| 97超视频在线观看视频| 成年女人毛片免费观看观看9| av中文乱码字幕在线| 国产精品久久久久久av不卡| 久久久久久久久中文| 免费高清视频大片| 国产精品伦人一区二区| 国产高潮美女av| 春色校园在线视频观看| 久久精品91蜜桃| 日本免费a在线| 成人美女网站在线观看视频| 成人三级黄色视频| 亚洲国产精品成人久久小说 | 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 国产高清激情床上av| 热99re8久久精品国产| 在线观看66精品国产| a级毛片a级免费在线| 国产乱人偷精品视频| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 看十八女毛片水多多多| 日日干狠狠操夜夜爽| 国产精品亚洲美女久久久| 超碰av人人做人人爽久久| 成人永久免费在线观看视频| 日本爱情动作片www.在线观看 | 国产伦在线观看视频一区| 最近中文字幕高清免费大全6| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 国产黄a三级三级三级人| 国产乱人偷精品视频| 国产一区亚洲一区在线观看| 精品午夜福利在线看| 国产精品野战在线观看| 国产黄a三级三级三级人| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 一进一出好大好爽视频| 日本三级黄在线观看| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 成年av动漫网址| 99热网站在线观看| 日本在线视频免费播放| 国产一区二区在线观看日韩| 亚洲欧美精品综合久久99| 精华霜和精华液先用哪个| 国产91av在线免费观看| 成人国产麻豆网| 在线播放国产精品三级| 国产私拍福利视频在线观看| 国产成人a区在线观看| 哪里可以看免费的av片| 亚洲av电影不卡..在线观看| 午夜福利18| 能在线免费观看的黄片| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 亚洲国产精品成人综合色| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 亚洲av成人av| av在线老鸭窝| 亚洲美女视频黄频| 91精品国产九色| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 秋霞在线观看毛片| 伦理电影大哥的女人| 中国美女看黄片| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| or卡值多少钱| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 久久久精品94久久精品| av专区在线播放| 久久久精品94久久精品| 免费观看精品视频网站| 免费电影在线观看免费观看| 观看免费一级毛片| 日韩三级伦理在线观看| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 婷婷六月久久综合丁香| 又爽又黄a免费视频| 国产精品av视频在线免费观看| 国产乱人偷精品视频| 丰满人妻一区二区三区视频av| 国产在线精品亚洲第一网站| 91麻豆精品激情在线观看国产| 亚洲三级黄色毛片| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 岛国在线免费视频观看| 国产精品人妻久久久久久| 免费观看人在逋| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 精品久久久久久久末码| 成人亚洲欧美一区二区av| 美女cb高潮喷水在线观看| 午夜福利高清视频| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 国产爱豆传媒在线观看| 女人被狂操c到高潮| 精品人妻视频免费看| 国产v大片淫在线免费观看| 搡老岳熟女国产| 99久国产av精品| 欧美bdsm另类| 午夜精品国产一区二区电影 | 舔av片在线| 国产精品亚洲美女久久久| 丝袜美腿在线中文| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 亚洲国产精品成人久久小说 | 日韩精品有码人妻一区| 99热这里只有是精品50| 91久久精品国产一区二区三区| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 国产精品久久视频播放| 日韩欧美 国产精品| 在线免费观看不下载黄p国产| 亚洲精品一区av在线观看| 欧美一级a爱片免费观看看| 男女视频在线观看网站免费| 2021天堂中文幕一二区在线观| 亚洲三级黄色毛片| 久久午夜福利片| 午夜福利18| 国产精品野战在线观看| 亚洲精品国产av成人精品 | 免费观看精品视频网站| videossex国产| 一级a爱片免费观看的视频| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 国产亚洲精品久久久com| 国产高清激情床上av| 欧美激情国产日韩精品一区|