兩種梨水提取物的體外抑菌試驗研究

項鐵男，敬思群

（1.吉林工程職業(yè)學(xué)院，吉林四平136001；2.新疆大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，新疆烏魯木齊830046）

兩種梨水提取物的體外抑菌試驗研究

項鐵男1，敬思群2

（1.吉林工程職業(yè)學(xué)院，吉林四平136001；2.新疆大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，新疆烏魯木齊830046）

采用新疆庫爾勒梨，綠梨水提取物對埃希氏大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌進行抑菌實驗。結(jié)果表明：庫爾勒梨水提取濃縮物對枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌沒有抑菌作用。綠梨水提取物均對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌沒有抑菌作用，均沒有出現(xiàn)抑菌圈，但對枯草芽孢桿菌有抑菌作用，對枯草芽孢桿菌最小抑菌濃度為50%（原液密度為1.23 g/mL），最小殺菌濃度為1/1的濃度（原液）。

新疆庫爾勒梨；新疆綠梨；抑菌實驗

新疆庫爾勒梨在漢唐時期就通過“絲綢之路”傳入印度，被譽為“西域圣果”。庫爾勒香梨營養(yǎng)價值高，含糖、氨基酸、維生素、各種碳水化合物達14%，水汁為86%。其中含糖量10%，酸0.03%，灰分0.12%，每100克香梨含VC約4.3mg，含有葡萄糖、果酸及多種微量元素，可食部分達83.6%。庫爾勒香梨不僅可以生食，而且可以做梨酒、梨膏等相關(guān)食品，并有潤肺、涼心、消痰、消炎、止咳、解瘡毒酒毒等醫(yī)療作用，維吾爾醫(yī)、蒙醫(yī)常把它作為食療佳品。

新疆綠梨在新疆來源豐富，并且民間用綠梨治療感冒，咳嗽。近幾年的研究證實，各種天然物質(zhì)如大蒜、蘆薈、茶葉等的提取物都具有不同程度的抑菌作用，與傳統(tǒng)化學(xué)抑制劑相比，這類天然抑菌物質(zhì)來源廣泛，加工低廉，且可作為輔助成分改變產(chǎn)品的風味。本研究主要對兩種梨體外抑菌試驗進行探索，提供對埃希氏大腸桿菌，枯草芽孢桿菌，金黃色葡萄球菌進行抑菌試驗。確定最佳的體外抑菌濃度。

1 材料

1.1 材料與試劑

庫爾勒梨、綠梨：市場購買。

埃希氏大腸桿菌（Escherichia col）、枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）：新疆大學(xué)微生物實驗室提供。

牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基；革蘭氏染色液；5% NaOH溶液、5%HC1溶液。

1.2 主要儀器

LHP-160L恒溫恒濕培養(yǎng)箱：常州恒睿儀器設(shè)備制造有限公司；DSX-280KB24手提式壓力蒸汽滅菌器：上海申安醫(yī)療器械廠；YJ-HS-2型雙人水平超凈工作臺：無錫一凈凈化設(shè)備廠；BXP-102普通型雙目生物顯微鏡：上海茶明光學(xué)儀器有限公司；NB-XZ10L旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：鄭州南北儀器設(shè)備有限公司；HHWY2112大型雙層恒溫搖床：上海華鄰實業(yè)有限公司。

2 方法

2.1 試驗用品的制備

2.1.1 提取物的制備[2]

取500 g新疆庫爾勒梨放入盛有適量稀堿液中浸泡30min除去果皮中蠟質(zhì)。切碎，加100mL水打漿，加熱至煮沸1 h～2 h，殘液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至60m L，再進行殺菌。用無菌蒸餾水稀釋為1∶2、1∶4、1∶6、1∶8等不同濃度備用。取800 g新疆綠梨用水洗凈切碎，加100mL水打漿，加熱熬2 h。用5層紗布過濾，濾液用4 000 r/min離心機離心。取上清液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至150mL，滅菌后用無菌蒸餾水稀釋為1∶1、1∶2、1∶3、1∶4 4種不同濃度備用。

2.1.2 細菌的復(fù)壯及培養(yǎng)

枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌于牛肉蛋白胨液體培養(yǎng)基，37℃恒溫搖床中復(fù)壯24 h。將純化后的枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌和大腸桿菌分別接種于牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)24 h，革蘭氏染色法初步鑒定后，3種菌分別接種于牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基上，每24小時更換一次。

2.1.3 紙片法[1]

取4個不同濃度的梨汁濃縮液15mL，放入Φ6mm滅菌濾紙片（10片為1組）40片，浸泡2 h。待其自然干燥后，用紫外線照射滅菌10min～15min。取滅菌后的瓊脂培養(yǎng)基15mL傾入已滅菌的平皿內(nèi)，冷卻凝固，每個平皿劃分為4區(qū)，用移液管吸取0.1mL菌液于平皿內(nèi)，用玻棒涂勻，然后貼上含有梨汁濃縮液的紙片，用生理鹽水做對照，置37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，用游標卡尺測定抑菌圈直徑，取平均值。

2.2 最小抑菌濃度的測定[2]（MIC）

采用二倍稀釋法，用滅菌蒸餾水將梨濃縮液稀釋為1∶1、1∶2、1∶4、1∶8 4個濃度。取試管6支，每管加相應(yīng)的液體培養(yǎng)基3mL，然后分別加入九個不同濃度的梨濃縮液各0.5mL，菌液0.5mL，混勻。各管的梨濃縮液終濃度分別為1∶1、1∶2、1∶4、1∶8，含菌量為3.9×107CFU/mL；同時每組設(shè)不含梨濃縮液只含等量菌液的陽性對照管，以及不含梨濃縮物也不含菌的陰性對照管各一支。放入37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)36 h。取出后根據(jù)試管內(nèi)梨濃縮液菌液的混濁度判斷菌體生長情況。對于藥液混濁肉眼無法判斷的試管，做進一步平板涂布，37℃培養(yǎng)24 h，以無菌生長的最小梨濃縮液濃度為梨濃縮物對該菌的最小抑菌濃度。

2.3 最小殺菌濃度的測定（MBC）

將MIC濃度及高于MIC濃度的各管在無梨濃縮液平板上涂布，37℃培養(yǎng)48 h，以菌落少于10個的相應(yīng)梨濃縮液濃度為梨濃縮物對該菌種的最低殺菌濃度。

2.4 判定標準

紙片法判定標準：抑菌直徑≥20mm為極敏，在15mm～19mm之間為高敏，在10mm～14mm之間的為中敏，直徑在10m L以下的為低敏。無抑菌圈為鈍敏試管。二倍稀釋法判定標準：培養(yǎng)液完全清亮，表示無細菌生長，記為（-）；培養(yǎng)液混濁，表示有細菌生長，記為（+）。

3 結(jié)果

3.1 庫爾勒梨水提取濃縮物的抑菌實驗結(jié)果[3-5]

庫爾勒水提取濃縮物對枯草芽孢桿菌，金黃色葡萄球菌，大腸桿菌沒有抑菌作用，均沒有抑菌圈出現(xiàn)。具體情況見表1。

表1 庫爾勒梨濃縮液對試驗菌的抑菌作用Table 1 Inhibitory effect Korla pear concentrate on test bacteria

3.2 綠梨水提取物的抑菌實驗結(jié)果

綠梨水提取物對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌均沒有出現(xiàn)抑菌圈，無抑菌作用。但是對枯草芽孢桿菌有抑菌作用，出現(xiàn)大小不同的抑菌圈，抑菌結(jié)果為中敏。具體情況見表2。

表2 綠梨濃縮液對試驗菌的抑菌作用Table2 Inhibitory effect of green pear concentrate on the test bacteria

3.3 綠梨水提取物對枯草芽孢桿菌最小抑菌濃度（MIC）

采用二倍稀釋法，用滅菌蒸餾水將梨濃縮液稀釋為1∶1、1∶2、1∶4、1∶8 4個濃度，含菌量為3.9× 107CFU/m L。將制備好的試管放入37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)36 h。從表3可見，綠梨水提取物濃縮液對枯草芽孢桿菌最小抑菌濃度為50%（原液密度約為1.23 g/m L）。

3.4 綠梨水提取物對枯草芽孢桿菌最小殺菌濃度（MBC）

將MIC濃度及高于MIC濃度的各管在無梨濃縮液平板上涂布，37℃培養(yǎng)48 h，以菌落少于5個的相應(yīng)梨濃縮液濃度為梨濃縮物對該菌種的最低殺菌濃度。因此，選擇1/1和1/2濃度的試管進行涂布培養(yǎng)48 h，培養(yǎng)溫度為37℃。結(jié)果濃度1/1的培養(yǎng)皿上長菌落數(shù)為8個、7個、9個。綠梨水提取物對枯草芽孢桿菌最小殺菌濃度為1/1的濃度。

表3 綠梨濃縮液對枯草芽孢桿菌最小抑菌濃度Table3 Green pear concentrate on the minimum inhibitory concentration of Bacillus subtilis

4 結(jié)論

庫爾勒水提取濃縮物對枯草芽孢桿菌，金黃色葡萄球菌，大腸桿菌沒有抑菌作用。綠梨水提取物均對大腸桿菌，金黃色葡萄球菌沒有抑菌作用，均沒有出現(xiàn)抑菌圈。但是對枯草芽孢桿菌有抑菌作用，對枯草芽孢桿菌最小抑菌濃度為50%（原液密度為1.23 g/mL），菌最小殺菌濃度為1/1的濃度（原液）。

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Study On Two Kinds of Pear Water Extract in Vitro Bacteriostasis Experiment

XIANG Tie-nan1，JING Si-qun2
（1.Jilin Engineering Vocational College，Siping 136001，Jilin，China；2.XinJiang University College of Life Science and Technology，Urumqi830046，Xinjiang，China）

In this paper，Xinjiang Korla Pear and Green pear extract on Escherichia coli，Bacillus subtilis，Staphylococcus aureus fungistasis.The results show：Korla Pear water extract concentrate had no inhibitory effect on Bacillus subtilis，Staphylococcus aureus，Escherichia.Green pears water extract also had no inhibitory effect on Escherichia coli，Staphylococcus aureus，but it had antibacterial effects on Bacillus subtilis.Bacillus subtilis minimum inhibitory concentration of 50%（Liquid density was about 1.23 g/mL），The minimum bactericidal concentration of bacteria concentration of1/1（stock solution）.

Xinjiang Korla pear；Xinjiang green pear；fungistasis

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.01.009

2014-08-19

項鐵男（1968—），男（漢），副教授，碩士研究生，研究方向：食品工程與檢驗。