金胺O熒光染色法輔助診斷結(jié)核抗酸桿菌感染的價(jià)值分析*

廖子龍，徐加譽(yù)，陳寶玉，李勇

（1.廣東省深圳市鹽田區(qū)人民醫(yī)院 病理科，廣東 深圳 518000；2.中南大學(xué)湘雅醫(yī)院 病理科，湖南 長沙 410008）

結(jié)核病是危害性極大的一種傳染性疾病，近年來發(fā)病率日益升高，針對結(jié)核病的診斷受到越來越廣泛的重視，目前結(jié)核病的主要確診方式包括抗酸染色發(fā)、病理組織學(xué)等方法，抗酸染色法雖然特異性高，但鏡檢時(shí)間長、敏感性低，無法滿足診斷需求，因此探索一種更佳的診斷方式意義重大[1-3]。為進(jìn)一步提高結(jié)核抗酸桿菌感染的診斷效果，本研究通過對照分析金胺O熒光染色法應(yīng)用于病理組織切片的診斷價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇本院2017年6月-2018年6月收治的接受金胺O熒光染色、抗酸染色、痰涂片抗酸染色及血清學(xué)結(jié)核抗體金標(biāo)法聯(lián)合檢測的病理組織切片患者195例，所有患者均對本次研究知情，簽署了知情同意書，研究經(jīng)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。195例患者包括男103例，女92例；年齡35～69歲，平均（48.37±5.24）歲。

1.2 方法

檢測儀器包括：常規(guī)顯微鏡、電熱恒溫水槽及熒光顯微鏡。主要試劑包括：抗酸染液、金胺O熒光染液。抗酸染液按照齊爾-尼爾森（Ziehl-Neelsen）抗酸染色法相關(guān)規(guī)程配制，金胺O熒光染液采用1 g金胺O放入95%乙醇10 ml中再加5%石炭酸液90 ml；脫色劑采用3%鹽酸乙醇液；復(fù)染劑采用2.5%高錳酸鉀。試劑盒由珠海貝索生物技術(shù)有限公司提供。

金胺O熒光染色法：將石蠟切片脫蠟至水，然后取金胺O熒光染液，將組織切片放入其中，以65℃電熱恒溫水槽進(jìn)行15 min的染色，再以室溫繼續(xù)15 min染色，洗凈后取3%鹽酸乙醇進(jìn)行1～2 min脫色處理，至外觀無黃色呈現(xiàn)。最后使用2.5%高錳酸鉀進(jìn)行3～5 min的復(fù)染，洗凈后烤干，中性樹膠封固后待檢?？顾崛旧ǎ阂猿Ｒ?guī)的標(biāo)準(zhǔn)操作流程，對樣本進(jìn)行染色處理，包括病理組織切片抗酸染色、痰涂片抗酸染色。血清學(xué)結(jié)核抗體金標(biāo)法：按照試劑盒說明書進(jìn)行操作及判斷。

1.3 觀察指標(biāo)

①觀察計(jì)算金胺O熒光染色法、組織抗酸法、痰涂抗酸法及血清學(xué)結(jié)核抗體金標(biāo)法的陽性檢出情況。金胺O熒光染色法采用熒光顯微鏡20 倍物鏡觀察切片，背景為黑色，有時(shí)背景殘留物呈淡黃色，而抗酸性菌呈明亮的橘黃色；抗酸染色法采用普通光學(xué)顯微油鏡、10倍目鏡、100倍物鏡進(jìn)行觀察，結(jié)核桿菌呈亮紅色，其他組織呈淡粉紅色或淺藍(lán)色；金標(biāo)法利用結(jié)核桿菌特異性外膜抗原，采用斑點(diǎn)免疫金滲濾試驗(yàn)原理進(jìn)行檢測，硝酸纖維膜上出現(xiàn)顏色深淺表示陽性程度。②觀察計(jì)算上述方法診斷結(jié)核抗酸桿菌感染的敏感性和特異性，敏感性=真陽性例數(shù)/（真陽性例數(shù) +假陰性例數(shù)）×100%，即正確判斷感染率；特異性=真陰性例數(shù)/（真陰性例數(shù)+假陽性例數(shù)）×100%，即正確判斷非感染率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 21.00分析，計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)以百分比（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 4種染色方法陽性率對比

經(jīng)病理與臨床明確診斷為陽性87例，金胺O熒光染色法檢出60例陽性，陽性率為68.97%（60/87）；組織抗酸法陽性檢出率為29.89% （26/87）；痰涂抗酸法陽性檢出率為10.34%（9/87）；血清學(xué)結(jié)核抗體金標(biāo)法檢出13 例陽性，陽性率14.94%（13/87）。明確診斷為陰性80例，金胺O熒光染色法檢出4例陽性，陽性率為5.00%；組織抗酸法、痰涂抗酸法、血清學(xué)結(jié)核抗體金標(biāo)法均未檢出陽性。臨床診斷為結(jié)核抗酸桿菌感染而病理未確診28例，金胺O熒光染色法檢出14例陽性，陽性率為50.00%（14/28）；組織抗酸法陽性檢出率為17.86%（5/28）；痰涂抗酸法陽性檢出率為17.86%（5/28）；血清學(xué)結(jié)核抗體金標(biāo)法檢出4例陽性，陽性率14.29%（4/28）。金胺O熒光染色法各方面診斷陽性率比組織抗酸法、痰涂抗酸法及血清學(xué)結(jié)核抗體金標(biāo)法陽性率均明顯更高（確診為陽性：χ2=37.79/76.53/65.59，P=0.000/0.000/0.000；確診為陰性：χ2=4.10，P=0.043；臨床診斷為陽性而病理未確診：χ2=6.45/6.45/8.18，P=0.011/0.011/0.004）。

2.2 4種染色方法敏感性和特異性對比

金胺O熒光染色法的特異性與組織抗酸法、痰涂抗酸法及血清學(xué)結(jié)核抗體金標(biāo)法比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），金胺O熒光染色法的敏感性則比其他方法顯著更高（P＜0.05），見表1。

表1 4種染色方法敏感性和特異性對比 %

3 討論

臨床在診斷結(jié)核抗酸桿菌感染中，結(jié)核樣結(jié)節(jié)及干酪樣壞死等是其主要病理表現(xiàn)，不過結(jié)合抗酸桿菌感染也存在不典型的病變，因此將結(jié)核抗酸桿菌直接在病變處找到是確診結(jié)核病的重要途徑[4-6]。目前臨床通常采取痰涂片結(jié)核血清學(xué)金標(biāo)法檢測，病理組織也是確診結(jié)核抗酸桿菌感染的重要方法，該方法作為金標(biāo)準(zhǔn)，具有很高的診斷準(zhǔn)確性，不過在特殊情況下也需要采用特殊染色法進(jìn)行輔助診斷，染色法則一般行Ziehl-Neelsen抗酸染色配合常規(guī)顯微鏡，但是檢出率較低[7-9]。

金胺O熒光染色法與上述染色法原理相同，不過前者在低倍鏡下可觀察菌體呈亮綠色，背景黑暗，具有清晰的形態(tài)特征，不容易出現(xiàn)漏檢情況，使鏡檢效率顯著提高[10-12]。本研究中通過對195 例病理組織標(biāo)本進(jìn)行抗酸染色檢測、血清學(xué)結(jié)核抗體檢測及金胺O熒光染色檢測，結(jié)果顯示經(jīng)病例與臨床診斷確診為陽性的87例病理組織切片中金胺O熒光染色法檢測陽性率為68.97%，明顯高于組織抗酸法（29.89%）、痰涂抗酸法（10.34%）、血清學(xué)結(jié)核抗體金標(biāo)法（14.94%）。不過在確診為陰性的80例病理切片之中，金胺O熒光染色法檢出4例陽性，其他方法未檢出陽性，該假陽性結(jié)果考慮與組織切片、染色等過程中雜質(zhì)影響密切相關(guān)，雜質(zhì)在熒光顯微鏡藍(lán)色激發(fā)后，可產(chǎn)生亮綠色熒光，與抗酸桿菌相似，容易與之混淆，從而造成誤診。針對該類情況，筆者經(jīng)驗(yàn)為如果在低倍鏡下見形似抗酸桿菌，尤其是少量分布的形似抗酸桿菌，應(yīng)調(diào)至高倍鏡，或者由經(jīng)驗(yàn)豐富的鏡檢人員確認(rèn)。雖然金胺O熒光染色法有假陽性結(jié)果出現(xiàn)，但其特異性仍較高，與其他方法比較無明顯差異，充分體現(xiàn)出金胺O熒光染色法輔助診斷結(jié)核抗酸桿菌感染的顯著優(yōu)勢。

綜合上述，臨床診斷結(jié)核抗酸桿菌感染采用金胺O熒光染色法輔助診斷可促進(jìn)陽性率提高，具有較高的敏感性和特異性，值得推廣。