日糧中添加甲基供體對妊娠母豬妊娠狀況和產(chǎn)仔數(shù)的影響

W.H.E.J.van Wettere， R.J.Smits， P.E.Hughes

（1.澳大利亞阿德萊德大學(xué)動物和獸醫(yī)科學(xué)，羅斯沃斯校區(qū)，SA 5371；2.澳大利亞克洛瓦Rivalea有限公司，新南威爾士州2646；3.澳大利亞阿德萊德大學(xué)豬和家禽生產(chǎn)研究所，羅斯沃斯校區(qū)，SA 5371)

母豬的繁殖性能主要表現(xiàn)為窩產(chǎn)仔數(shù)和年產(chǎn)胎次數(shù)，其主要受母體系統(tǒng)對胚胎發(fā)育狀況識別偏差而導(dǎo)致的流產(chǎn)、死胎（妊娠50 d前）等因素影響（Foxcroft等，2007）。雖然排卵數(shù)隨著胎齡增加而增加，但是由于4胎齡以上的母豬胚胎的死亡率也有所增加，高胎齡母豬的胚胎損失是限制其窩產(chǎn)仔數(shù)的主要因素（Town等，2005）。

妊娠母豬在妊娠前期30～60 d時對葉酸、維生素B12等B族維生素的需要量顯著增加（Matte和 Girard，1999）。然而，目前 B 族維生素的推薦用量是20～50年前給出的基于預(yù)防基因缺陷的最低劑量 （Stahly 等，2007；Matte 等，2006）。該推薦劑量建議，現(xiàn)今母豬達到最大繁殖性能所需要的B族維生素理想攝入量可能過高（Matte等，2006），同樣觀點還有，日糧葉酸的添加僅僅是為了在排卵率較高時可以減少胚胎的死亡率（Tremblay 等，1989），同時，在經(jīng)產(chǎn)母豬和初產(chǎn)母豬的妊娠期葉酸添加量相同時，其窩產(chǎn)仔數(shù)也無差異（Matte 等，2006）。

葉酸同維生素B12、甘氨酸共同參與同型半胱氨酸 （HCY）轉(zhuǎn)化蛋氨酸過程中的再次甲基化反應(yīng)，從而促進胚胎的正常發(fā)育和細胞增殖（Kwong等，2010）。HCY被證明是一類胚胎致畸因子（van Mil等，2010；Matte 等，2006）， 血漿中 HCY 含量上升，能導(dǎo)致多個物種胚胎發(fā)育畸形和胚胎死亡率增加（Di Simone 等，2004；Guay 等，2002a）。 與正常妊娠母豬比較，經(jīng)歷早期妊娠失敗的母豬血漿中HCY含量較高。維生素B12作為HCY再次甲基化反應(yīng)的酶輔助因子，若維生素B12缺乏時，可以通過補充葉酸來改善母豬的繁殖性能（Matte等，2006）。前期試驗表明，在夏季配種的高胎齡妊娠母豬日糧中添加甜菜堿，能夠增加母豬產(chǎn)仔數(shù)（van Wettere和 Herde，2009）。 在妊娠母豬日糧中提高葉酸原體、維生素B12和甜菜堿的含量對產(chǎn)仔數(shù)的影響需進一步探索。

因此，本試驗主要有兩個目的：（1）考慮在經(jīng)產(chǎn)妊娠母豬日糧中單獨添加甜菜堿或同時添加維生素B12和葉酸是否可以降低妊娠失敗率和提高母豬產(chǎn)仔數(shù)。（2）研究B族維生素和甜菜堿對血漿中HCY含量穩(wěn)定性的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗動物和飼養(yǎng)管理 試驗在澳大利亞南威爾士州一商業(yè)豬場 （Rivalea Australia Pty Ltd）進行。試驗共選取平均胎齡4.4±0.1（范圍2～9胎齡）的長×大二元經(jīng)產(chǎn)母豬1079頭，試驗開始時間共分5周，每周約有220頭。試驗?zāi)肛i的平均發(fā)情間隔為（5.2±0.1）d，在母豬斷奶后第一次發(fā)情時和隨后的24 h分別進行人工受精 （2010-3-27至2010-5-5），在試驗配種前，試驗?zāi)肛i的平均窩產(chǎn)仔數(shù)為（9.4±2.2）頭。

試驗采用2×2×2析因法試驗設(shè)計，試驗因素水平分別是兩個添加量水平的甜菜堿（0、3g/kg）、B 族維生素（0、20 mg/kg 葉酸+150 μg/kg 維生素B12）以及兩個胎齡母豬（2～3胎齡、4胎齡及以上），甜菜堿和葉酸、維生素B12的添加含量分別參考 van Wettere和 Herde（2009）和 Guay等（2002a）推薦劑量。基礎(chǔ)日糧中葉酸和維生素B12的含量分別為5 mg/kg和20 μg/kg，分別高于NRC（1998）的推薦劑量 0.3 mg/kg 和 10 μg/kg。試驗日糧從配種后第一天開始飼喂到妊娠112天止，表1為日糧組成和營養(yǎng)水平。所有的試驗?zāi)肛i在妊娠第1～42、43～84、85～112天的日飼喂量分別為2.5、2.7、3.0 kg。試驗?zāi)肛i在妊娠第一天起至妊娠第112天進入產(chǎn)房前均單獨飼喂在妊娠限位欄中，每排限位欄有55個欄位，各欄位采用一排相同的食槽和飲水槽。每天7：00時用標準量斗（量程為200 g）喂料一次，同一處理組為一排，避免不同處理組日糧間相互干擾。在配種后第18～24天，用查情公豬在母豬欄外與母豬接觸來鑒別母豬發(fā)情，若母豬這時表現(xiàn)發(fā)情被認為是正常返情。在配種第30天后，采用5-MHz腹式超聲波儀對母豬進行妊娠檢查 （A-gri-Scan A-7，ECM）。為確保診斷準確，對診斷為妊娠失敗的母豬，在一周后進行復(fù)查。返情和經(jīng)超聲波檢查為妊娠失敗的母豬需轉(zhuǎn)出限位欄，并進行登記。若試驗?zāi)肛i突然死亡或者母豬體況較差，也同樣進行登記。試驗?zāi)肛i經(jīng)超聲波檢查為妊娠成功，但在產(chǎn)房并未生產(chǎn)的，被視為后期流產(chǎn)。

在試驗?zāi)肛i妊娠第112天時轉(zhuǎn)入產(chǎn)房，所有試驗?zāi)肛i飼喂相同的哺乳期日糧 （消化能14.9 MJ/kg、總賴氨酸 9 g/kg、粗蛋白質(zhì) 185 g/kg），每天7：00喂食一次，共3 kg，直至2 d后分娩。

表1 妊娠期基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平

1.2 生產(chǎn)性能測定 母豬配種后前3周返情數(shù)（返情）、早期（小于配種后30天）或后期（大于配種后30天）妊娠失敗數(shù)、后期流產(chǎn)數(shù)等均視為非繁殖因素影響母豬而排除。母豬分娩時，記錄總產(chǎn)仔數(shù)、產(chǎn)活仔數(shù)、產(chǎn)死仔數(shù)、產(chǎn)木乃伊數(shù)。每個處理組隨機選取50窩仔豬，在仔豬出生后24 h內(nèi)，對活豬仔進行逐只稱重并作為窩重統(tǒng)計。

1.3 血樣采集、激素含量和血液代謝成分分析每個處理組選取20頭試驗?zāi)肛i，分別在妊娠期第3、30、107天早上空腹采集血樣分析 HCY含量（人工受精后24 h為妊娠0天計）。采用前腔頸靜脈采血法采集血樣，血樣放在9 mL氯化鋰覆膜離心管中，將血樣放冰塊上靜置約1 h，用常溫離心機2000 g離心15 min，收集上層血漿于2 mL離心管中，-20℃環(huán)境下保存，供后續(xù)分析。

表2 不同胎齡母豬妊娠日糧中添加葉酸+維生素B12、甜菜堿對總產(chǎn)仔數(shù)、產(chǎn)活仔數(shù)、產(chǎn)死胎數(shù)和木乃伊數(shù)的影響

吸取25 μL血漿樣品，選用BioRad試劑盒，按照操作說明，采用酶聯(lián)免疫法測定血漿中HCY含量。試驗原理如下：蛋白質(zhì)結(jié)合的HCY被分解為游離HCY，后者在酶聯(lián)免疫檢測前，被分解轉(zhuǎn)化為s-腺苷-L-高半胱氨酸。組間檢測的變異系數(shù)遠低于5%，組內(nèi)的變異系數(shù)在10.8 μmol/L和20.6 μmol/L時分別為8.2%和6.4%。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析 試驗數(shù)據(jù)以 “平均值±標準差”表示，采用多因素方差分析對試驗區(qū)組數(shù)據(jù)進行顯著性檢驗，研究日糧組成和母豬胎齡對其生產(chǎn)性能的影響，前胎仔豬斷奶頭數(shù)和母豬發(fā)情間隔作為協(xié)變量。處理組間差異用LSD法檢驗，對各因素的主效應(yīng)進行分析，當因素間存在交互效應(yīng)時，也進行了相應(yīng)標注。血漿中HCY含量采用線性混合模型進行分析，每頭母豬作為一個獨立試驗單位，固定模型包括區(qū)組、配種胎齡、血漿樣本采集時間等。應(yīng)用卡方檢驗法分析處理因素對母豬妊娠率的影響。除卡方檢驗外，所有的數(shù)據(jù)統(tǒng)計均采用GENSTAT軟件進行分析（第8版，英國洛桑試驗站統(tǒng)計委員會）。

2 結(jié)果

2.1 生產(chǎn)性能指標 表2表明，未添加葉酸與維生素B12處理的母豬配種胎齡和日糧添加甜菜堿這兩因素在窩產(chǎn)仔數(shù)指標上有極顯著的交互作用，4胎齡以上的日糧中添加甜菜堿較4胎齡以上對照組母豬（未加甜菜堿）在總產(chǎn)仔數(shù)和產(chǎn)活仔數(shù)上都顯著提高，分別為 11.7±0.18、11.1±0.19 和10.8±0.17、10±0.18。相比較，同樣在妊娠日糧中添加葉酸和維生素B12，2～3胎齡母豬較4胎齡以上母豬產(chǎn)更多仔豬，分別為12.3±0.30和11.0±0.34。未加B族維生素及甜菜堿的不同胎齡的母豬（2～3胎齡和4胎齡以上）在窩初生仔豬總數(shù)和活仔數(shù)等指標上差異顯著。

表3結(jié)果顯示，妊娠日糧中添加葉酸和維生素B12等B族維生素的母豬較未添加組的母豬能夠降低早期流產(chǎn)率，但妊娠日糧中添加甜菜堿與否對母豬早期流產(chǎn)率沒有影響，B族維生素和甜菜堿對母豬返情、后期流產(chǎn)、非繁殖因素未產(chǎn)等發(fā)生率無影響。

表3 妊娠日糧添加甜菜堿和葉酸+維生素B12對母豬返情、早期流產(chǎn)和后期流產(chǎn)、非繁殖因素未產(chǎn)數(shù)的影響

妊娠日糧中添加甜菜堿與否對仔豬初生重[（1.48±0.02）kg 和（1.51±0.02）kg]及初生重變異系數(shù)[（0.20 ±0.01）和（0.20 ±0.01）]均無影響，同樣，B族維生素添加與否對仔豬初生重[（1.49±0.02 kg）和（1.51±0.02）kg]及初生重變異系數(shù)（0.20 ±0.01）和（0.20±0.01）也無影響。然而，高胎齡母豬（4胎齡以上）的仔豬初生重較低胎齡母豬（2～3胎齡）的輕 80 g，分別為（1.48±0.02）kg 和（1.56±0.03）kg，差異顯著（P<0.05），與初生重相似，高胎齡母豬的仔豬窩初生重變異系數(shù)顯著高于低胎齡母豬，分別為 0.21±0.01 和 0.18±0.01。

2.2 血漿中同型半胱氨酸 圖1是妊娠日糧中添加甜菜堿和B族維生素對母豬血漿中HCY含量的影響。總體看來，添加B族維生素能夠顯著降低血漿HCY含量（P＜0.001），而添加甜菜堿無顯著影響。妊娠天數(shù)對血漿HCY含量影響明顯，妊娠第 3 天[（14.6±0.27）μmol/L]、第107 天[（14.0±0.27）μmol/L]顯著高于妊娠第 30 天[（12.8±0.28）μmol/L]。妊娠日糧組成與妊娠天數(shù)在HCY含量上有明顯的交互作用。添加B族維生素組母豬在妊娠第3天和第107天的血漿HCY含量較未添加組分別降低2.2 μmol/L和2.8 μmol/L（P ＜0.001），但對妊娠第30天的HCY影響不大 （圖2）。同樣，添加甜菜堿降低妊娠第3天血漿HCY含量1.2 μmol/L，但對第30天和第107天的血漿HCY含量無影響（圖3）。

圖1 妊娠日糧組成對血漿中HCY含量的影響

圖2 B族維生素添加量對不同妊娠階段母豬血漿中HCY含量的影響

圖3 甜菜堿添加量對不同妊娠階段母豬血漿中HCY含量的影響

3 討論

母豬的繁殖能力由初生仔豬數(shù)量來衡量。在母豬妊娠期日糧中添加B族維生素（葉酸和維生素B12）和甜菜堿（三甲基甘氨酸）能夠改善母豬繁殖性能。本試驗研究證實在妊娠母豬日糧中同時添加葉酸和維生素B12，可以增加窩產(chǎn)仔數(shù)和降低早期妊娠失敗率。與前期研究結(jié)果一致（van Wettere和 Herde，2009；Matte 等，2006）。母豬配種時的胎齡可以影響添加B族維生素和甜菜堿作用，特別是葉酸和維生素B12能夠增加低胎齡母豬的窩產(chǎn)仔數(shù)，而甜菜堿能夠增加高胎齡母豬的窩產(chǎn)仔數(shù)。添加B族維生素和甜菜堿能夠改變?nèi)焉锲谀肛i血漿HCY原體的代謝過程。妊娠日糧添加B族維生素，母豬在妊娠第30天，其血漿HCY含量降低了8%，在妊娠第3天和第107天，則分別降低了18%和17%。

妊娠期的特征之一是機體代謝對B族維生素的需求急劇增加，同樣需要B族維生素的還有血液系統(tǒng) HCY 含量的改變（Holmes，2003；Matte等，2006）。在妊娠前期55～60 d，血漿中葉酸含量快速下降33% ～42%（Harpe等，1994）。子宮對葉酸和維生素B12的大量吸收以及轉(zhuǎn)運至子宮腔，以在妊娠前15～25 d促進胚胎發(fā)育（Guay等，2002a；Vallet等，1999）。HCY 含量的動態(tài)平衡與B族維生素原體的含量水平密切相關(guān)（Matte等，2006），在孕婦體內(nèi)HCY含量與甜菜堿含量呈反比（Velzing-Aarts等，2005）。 重要的是，血液中HCY的含量過高則表明機體甲基化途徑失衡（Ikeda等，2010），將引起多種生物的妊娠異常和胚胎定植失?。↖keda 等，2010；Matte等，2006）。因此，血液系統(tǒng)的HCY水平可以作為試驗處理效應(yīng)指標，來確定胚胎定植前（妊娠第3天）和定植后（妊娠第30天）、妊娠后期（妊娠第107天）母體和胎兒蛋氨酸循環(huán)情況。與相關(guān)報道一致（Simard等，2007；Guay 等，2002a），本試驗添加葉酸和維生素B12，妊娠期第3天血漿中的HCY含量降低了14%。葉酸和甜菜堿為HCY再甲基化提供碳單位（Solanky 等，2010；Matte 等，2006），同時本試驗研究表明甜菜堿能降低妊娠早期機體的HCY含量，甲基的有效利用率可以制約妊娠早期蛋氨酸再甲基化。

本研究表明，未添加B組維生素或甜菜堿的母豬在妊娠期前30 d，其血漿HCY含量逐漸下降，而在妊娠107 d時恢復(fù)至圍產(chǎn)期水平。近期研究也表明，相同的變化趨勢也發(fā)生在日糧添加有葉酸和維生素 B12的母豬上（Simard 等，2007），同樣日糧添加有甜菜堿的母豬也有同樣變化趨勢。因此，這似乎說明，HCY的變化是一正常的生理現(xiàn)象，與B族維生素的缺乏和甲基供體的利用率無關(guān)。與妊娠相關(guān)的血液稀釋性和血漿白蛋白的變化都不能夠解釋母豬體內(nèi)HCY含量下降現(xiàn)象（Simard 等，2007）。 因此，Holmes （2003） 提出了HCY的胎盤轉(zhuǎn)移學(xué)說，統(tǒng)一于胎兒的代謝循環(huán)系統(tǒng)而被逐漸利用，這也許是在循環(huán)過程中HCY含量降低的原因。

添加B族維生素，母豬在配種后前30 d的流產(chǎn)比例降低了57%，同時對于2～3胎齡的母豬，其窩產(chǎn)子數(shù)提高了5%。妊娠日糧中添加葉酸對窩產(chǎn)仔數(shù)的影響還有爭議，在葉酸的添加量相近時，窩產(chǎn)仔數(shù)增加了 10%（Lindemann和Ko rnegay，1989）和窩產(chǎn)仔數(shù)無變化等均有相關(guān)報道（Harper等，1994；Thaler等，1989）。 添加葉酸能夠增加母豬窩產(chǎn)仔數(shù)可能是葉酸能夠減少妊娠前30天的胚胎死亡率（Tremblay等，1989）。胚胎死亡數(shù)量的減少與胚胎定植時和定植后的前列腺素E2含量變化相關(guān) （Matte等，2006；Guay等，2004），胚胎定植前的發(fā)育率增加也是如此（Guay等，2002b ；Duquette等，1997）。 目前研究揭示，母體對妊娠的識別過程引起的前列腺素E2含量變化，可以對減少母豬早期流產(chǎn)進行解釋。Lindemann 和 Kornegay（1989）也指出，母豬日糧中添加葉酸降低了產(chǎn)仔數(shù)。同樣，妊娠失敗能夠引起妊娠前期母豬體內(nèi)HCY含量上升，推測由B族維生素引起的HCY含量降低或許是因為母豬流產(chǎn)數(shù)的減少。

添加葉酸能夠提高窩產(chǎn)子數(shù)表明基礎(chǔ)日糧葉酸不能夠滿足母豬的最佳繁殖性能，對于2胎齡和2胎齡以上母豬及待配的后備母豬，其窩產(chǎn)子數(shù)的增加僅源于較高的排卵率 （Town等，2005）。多數(shù)流產(chǎn)發(fā)生在胚胎定植前和定植后，主要是因為個體間的形態(tài)和發(fā)育的多樣性而導(dǎo)致的次成熟胚胎未能存活（van Wettere等，2005）。胚胎發(fā)育不同步性的自然現(xiàn)象揭示卵泡發(fā)育和排卵時卵母細胞成熟度的差異，這種情況在排卵率較高時更為明顯（vanWettere 等，2005；Xie 等，1990）。 一般認為添加葉酸能夠促進次成熟胚胎生長和發(fā)育成熟，使得其成功定植。日糧中添加相近水平的葉酸（15 mg/kg）和維生素 B12（160 μg/kg），子宮液中HCY的含量降低30%（Guay等，2002a）。葉酸是細胞分裂和增殖過程中合成核酸的重要輔助因子，胚胎的快速發(fā)育對葉酸的需求量巨大（Solanky等，2010）。在子宮內(nèi)，葉酸和 HCY 含量的反比關(guān)系是顯而易見的（Solanky等，2010）。體外試驗表明，葉酸能夠促進豬胚囊的生長發(fā)育（Kim等，2009）。子宮腔內(nèi)較高的B族維生素含量，可以為胚胎和胎盤的代謝和發(fā)育所利用，同時HCY含量也下降，這大概是母豬妊娠日糧補加葉酸和維生素B12改善其繁殖性能的原因。

與本研究結(jié)果一致，前期研究發(fā)現(xiàn)葉酸對繁殖力的作用受胎齡影響（Matte等，2006）。近期的報道表明，B族維生素并不能讓2～3胎齡母豬獲得理想的胚胎發(fā)育和胚胎存活率。Town等（2005）研究認為，排卵率在2～3胎齡和4胎齡及以上的母豬之間并無明顯差異。因此，排卵率與胚胎發(fā)育的差異并不能歸咎于葉酸對提高高胎齡母豬窩產(chǎn)仔數(shù)無效。暫不論試驗處理和相關(guān)文獻的差異，Mahan（1998）報道窩產(chǎn)仔數(shù)在第3胎齡達到最高，之后一直穩(wěn)定至第6胎齡。曾有報道認為，第4胎齡以后窩產(chǎn)仔數(shù)是下降的，導(dǎo)致窩產(chǎn)仔數(shù)下降的原因目前還不清楚，可能是因為子宮功能受損或者與年齡相關(guān)的卵母細胞發(fā)育能力的衰弱（Armstrong，2001）。

然而，B族維生素對增加高胎齡母豬的窩產(chǎn)仔數(shù)作用不明顯，表明B族維生素被有效利用并不是限制高胎齡母豬潛在的繁殖能力的因素。相反，對于低胎齡母豬，B族維生素能夠提高窩產(chǎn)仔數(shù)，表明其體內(nèi)B族維生素不足，尤其是維生素B12。葉酸對快速生長的初產(chǎn)母豬的窩產(chǎn)仔數(shù)增加作用不明顯，因為葉酸主要是作為HCY再次甲基化反應(yīng)酶促因子和參與母體生長對維生素B12的競爭性吸收（Matte等，2006）。前期試驗表明，母豬的體重和背膘厚是持續(xù)增加的，直至第4胎齡達到成熟的體重和體組成，因此對于低胎齡母豬，其仍然處于生長階段，相較于年齡較大、生理更成熟的母豬，其對維生素B12的需求將持續(xù)增加。

相比B族維生素，妊娠日糧中添加甜菜堿能夠增加高胎齡母豬的窩產(chǎn)仔數(shù)，這與前人試驗結(jié)果一致（van Wettere和 Herde，2009）。 甜菜堿的主要功能是作為甲基供體參與HCY再次甲基反應(yīng)，至少在妊娠前期，其作用體現(xiàn)在能夠降低妊娠第3天血漿中HCY含量，然而，甜菜堿的正效應(yīng)為什么僅限于高胎齡母豬，目前的研究尚不完全明確。在生長豬日糧中添加甜菜堿，其生長激素（GH）和生長激素脈沖振幅分別提高了42%和35%（Huang等，2007）。 在妊娠前期，母體生長激素能夠增加胎盤養(yǎng)分轉(zhuǎn)運至胚胎，促進妊娠28 d時較小胚胎的生長和提高妊娠50 d胎兒總重，同時也可以提高胚胎的成活率 （Gatford等，2009；Rehfeldt等，2001）。 另外，Gatford 等（2010）指出母體生長激素對經(jīng)產(chǎn)母豬的影響較初產(chǎn)母豬更明顯，由于初產(chǎn)母體需要營養(yǎng)來維持生長限制了胎盤對GH的應(yīng)答，可以認為甜菜堿能夠促進母體GH的分泌或增加GH的分泌方式，從而增加高胎齡母豬的窩產(chǎn)仔數(shù)。

4 結(jié)論

本試驗研究表明，添加B族維生素可以增加低胎齡母豬的窩產(chǎn)仔數(shù)和減少各胎齡母豬早期胚胎流產(chǎn)發(fā)生率。低胎齡母豬因缺乏B族維生素，其繁殖性能受到影響。另外，在高胎齡母豬日糧中添加甜菜堿能夠提高其窩產(chǎn)仔數(shù)。

（致謝：本項目由CRC的Internationally Competitive Pork Industry提供資金支持，項目編號：2D-129，在此表示衷心感謝。同時對Paul Herde和David Cadogan博士為本試驗提供的幫助表示謝意。）

[1]Armstrong D T.Effects of maternal age on oocyte developmental competence[J].Theriogenology，2001，55：1303 ～ 1322.

[2]Di Simone N，Riccardi P，Maggiano N，et al.Effect of folic acid on homocysteine-induced trophoblast apoptosis[J].Molecular Human Reproduction，2004，10：665 ～ 669.

[3]Duquette J，Matte J J，F(xiàn)armer C，et al.Pre-and postmating dietary supplements of folic acid and uterine secretory activity in gilts[J].Canadian Journal of Animal Science，1997，77：415 ～ 420.

[4]Foxcroft G R，Vinsky M D，Paradis F，et al.Macroenvironment effects on oocytes and embryos in swine[J].Theriogenology，2007，68（1），：S30 ～ S39.

[5]Gatford K L，De Blasio M J，Roberts C T，et al.Responses to maternal GH or ractopamine during early-mid pregnancy are similar in primiparous and multiparous pregnant pigs[J].The Journal of Endocrinology，2009，203：143 ～154.

[6]Gatford K L，Smits R J，Collins C L，et al.Maternal responses to daily maternal porcine somatotropin injections during early-mid pregnancy or earlylate pregnancy in sows and gilts[J].Journal of Animal Science，2010，88：1365 ～1378.

[7]Guay F，Matte J J，Girard C L，et al.Effects of folic acid and vitamin B12 supplements on folate and homocysteine metabolism in pigs during early pregnancy[J].The British Journal of Nutrition，2002a，88：253 ～ 263.

[8]Guay F，Matte J J，Girard C L，et al.Effect of folic acid and glycine supplementation on embryo development and folate metabolism during early pregnancy in pigs[J].Journal of Animal Science，2002b，80：2134 ～ 2143.

[9]Guay F，Matte J J，Girard C L，et al.Effect of folic acid plus glycine supplement on uterine prostaglandin and endometrial granulocyte-macrophage colony-stimulating factor expression during early pregnancy in pigs[J].Theriogenology，2004，61：485 ～ 498.

[10]Harper A F，Lindemann M D，Chiba L I，et al.An assessment of dietary folic acid levels during gestation and lactation on reproductive and lactational performance of sows：a cooperative study.S-145 Committee on Nutritional Systems for Swine to Increase Reproductive Efficiency[J].Journal of Animal Science，1994，72：2338 ～ 2344.

[11]Holmes V A.Changes in haemostasis during normal pregnancy：does homocysteine play a role in maintaining homeostasis?[J].Proceedings of the Nutrition Society，2003，62（2）：479 ～ 493.

[12]Huang Q C，Xu Z R，Han X Y，et al.Effect of betaine on growth hormone pulsatile secretion and serum metabolites in finishing pigs[J].Journal of Animal Physiology and Animal Nutrition，2007，91：85 ～ 90.

[13]Ikeda S，Namekawa T，Sugimoto M，et al.Expression of methylation pathway enzymes in bovine oocytes and preimplantation embryos[J].Journal of Experimental Zoology.Part A，Ecological Genetics and Physiology，2010，313A：129 ～ 136.

[14]Kidd M T，F(xiàn)erket P R，Garlich J D.Nutritional and osmoregulatory functions of betaine.World’s[J].Poultry Science Journal，1997，53：125 ～ 139.

[15]Kim E S，Seo J S，Eum J H，et al.The effect of folic acid on in vitro maturation and subsequent embryonic development of porcine immature oocytes[J].Molecular Reproduction and Development，2009，76：120 ～ 121.

[16]Kwong W Y，Adamiak S J，Gwynn A，et all.Endogenous folates and single-carbon metabolism in the ovarian follicle，oocyte and pre-implantation embryo[J].Reproduction（Cambridge，England），2010，139：705 ～ 715.

[17]Lindemann M D，Kornegay E T.Folic acid supplementation to diets of gestating-lactating swine over multiple parities[J].Journal of Animal Science，1989，67：459 ～ 464.

[18]Mahan D C.Relationship of gestation protein and feed intake level over a five-parity period using a high-producing sow genotype[J].Journal of Animal Science，1998，76：533 ～ 541.

[19]Matte J J，Girard C L.An estimation of the requirement for folic acid in gestating sows：the metabolic utilization of folates as a criterion of measurement[J].Journal of Animal Science，1999，77：159 ～ 165.

[20]Matte J J，Guay F，Girard C L.Folic acid and vitamin B12in reproducing sows：new concepts[J].Canadian Journal of Animal Science，2006，86：197 ～205.

[21]Murphy M M，Scott J M，McPartlin J M，et al.The pregnancy-related decrease in fasting plasma homocysteine is not explained by folic acid supplementation，hemodilution，or a decrease in albumin in a longitudinal study[J].The American Journal of Clinical Nutrition，2002，76：614 ～ 619.

[22]National Research Council.‘Nutrient requirements of swine.’ 10th edn[S].National Academy Press：Washington DC，1998.

[23]Rehfeldt C，Kuhn G，Nurnberg G，et al.Effects of exogenous somatotropin during early gestation on maternal performance，fetal growth，and compositional traits in pigs[J].Journal of Animal Science，2001，79：1789 ～ 1799.

[24]Simard F，Guay F，Girard C L，et al.Effects of concen-trations of cyanocobalamin in the gestation diet on some criteria of vitamin B12 metabolism in first-parity sows[J].Journal of Animal Science，2007，85：3294 ～3302.

[25]Solanky N，Requena Jimenez A，D’Souza S W，et al.Expression of folate transporters in human placenta and implications for homocysteine metabolism[J].Placenta，2010，31：134 ～ 143.

[26]Stahly T S，Williams N H，Lutz T R，et al.Dietary B vitamin needs of strains of pigs with high and moderate lean growth[J].Journal of Animal Science，2007，85：188 ～ 195.

[27]Thaler R C，Nelssen J L，Goodband R D，et al.Effect of dietary folic acid supplementation on sow performance through two parities[J].Journal of Animal Science，1989，67：3360 ～ 3369.

[28]Town S C，Patterson J L，Pereira C Z，et al.Embryonic and fetal development in a commercial dam-line genotype[J].Animal Reproduction Science，2005，85：301 ～ 316.

[29]Tremblay G F，Matte J J，Dufour J J，et al.Survival rate and development of fetuses during the first 30 days of gestation after folic acid addition to a swine diet[J].Journal of Animal Science，1989，67：724 ～ 732.

[30]Vallet J L，Christenson R K，Klemcke H G.A radioimmunoassay for porcine intrauterine folate binding protein [J].Journal of Animal Science，1999，77：1236 ～ 1240.

[31]van Mil N H，Oosterbaan A M，Steegers-Theunissen R P.Teratogenicity and underlying mechanisms of homocysteine in animal models：a review[J].Reproductive Toxicology，2010，30：520 ～ 531.

[32]van Wettere W H E J，Herde P.Supplementing gestation diets with betaine increases litter size of summer mated sows[N].In‘Manipulating pig production 12’，2009，140.

[33]van Wettere W H E J，Mitchell M，Revell D K，et al.Management and nutritional factors affecting puberty attainment and first litter size in replacement gilts[N].In ‘Manipulating pig production X’，2005，180 ～ 192.

[34]Velzing-Aarts F V，Holm P I，F(xiàn)okkema M R，et al.Plasma choline and betaine and their relation to plasma homocysteine in normal pregnancy[J].The American Journal of Clinical Nutrition，2005，81：1383 ～ 1389.

[35]Xie S，Broermann D M，Nephew K P，et al.Ovulation and early embryogenesis in swine[J].Biology of Reproduction，1990，43：236 ～ 240.