皮部推拿法對免疫抑制家兔免疫功能的調(diào)節(jié)作用

皮部推拿法對免疫抑制家兔免疫功能的調(diào)節(jié)作用

郭駿騏齊力1劉明軍尚坤吳萌楊寄渝李亞張欣

(長春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林長春130117)

摘要〔〕目的觀察皮部推拿法對免疫抑制家兔免疫功能的調(diào)節(jié)作用。方法將15只家兔隨機平均分為對照組、模型組和推拿組，采用腹腔注射環(huán)磷酰胺的方法造模，觀察各組動物胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)和局部皮膚主要組織相容性復(fù)合物(MHC)-Ⅱ、白介素(IL)-12含量。結(jié)果模型組各項指標均低于對照組，灰度值高于對照組(P<0.05，P<0.01)。推拿組各項指標均高于模型組，灰度值低于模型組(P<0.05，P<0.01)。結(jié)論采用腹腔注射環(huán)磷酰胺的方法能夠制造免疫抑制動物模型；皮部推拿法能夠有效調(diào)節(jié)免疫抑制家兔的免疫功能。

關(guān)鍵詞〔〕皮部推拿；免疫

中圖分類號〔〕R28〔文獻標識碼〕A〔

基金項目：國家自然科學(xué)

通訊作者：張欣(1976-)，男，博士，副教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事中醫(yī)手法治未病的臨床與機制研究。

1吉林省臨床檢驗中心吉林省醫(yī)療機構(gòu)質(zhì)量監(jiān)測評價中心

第一作者：郭駿騏(1973-)，男，碩士，副研究員，主要從事中醫(yī)外治療法的臨床應(yīng)用研究。

The immune regulation of tuina on the skin areas of immunosuppressive rabbit

GUO Jun-Qi,QI Li,LIU Ming-Jun,etal.

Changchun University of Traditional Chinese Medicine, Changchun 130117, Jilin, China

Abstract【】ObjectiveTo observe the immune regulation of tuina on the skin areas of immunosuppressive rabbit.Methods15 rabbits were randomly divided into treatment,control and model groups.The peritoneal injection of cyclophosphamide was used to induce the immunosuppressive rabbit．The levels of MHC-Ⅱand IL-12 of local skin, indexes of thymus and spleen were observed．ResultsEach index of model group was below than that of control group(P<0.05，P<0.01), each index of treatment group was higher than that of model group(P<0.05，P<0.01).ConclusionsTuina on the skin areas could effectively adjust the immune function of immunosuppressed rabbit.

【Key words】Skin areas tuina;Immune

“皮部”理論是中醫(yī)傳統(tǒng)理論的重要組成部分，也是推拿等中醫(yī)外治方法產(chǎn)生療效的理論基礎(chǔ)。中醫(yī)理論認為，皮部居于人體最外層，是機體的衛(wèi)外屏障，具有衛(wèi)外固表、保護機體的作用。本課題組以推拿手法刺激免疫抑制家兔背部的足太陽膀胱經(jīng)皮部，通過觀察家兔部分免疫指標的變化情況，研究皮部推拿法對免疫功能的調(diào)節(jié)作用。

1材料與方法

1.1實驗動物與分組選取兔齡4個月的純種新西蘭大耳家兔15只，體重(1 950±220)g，由長春中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供。按完全隨機設(shè)計法(采用隨機數(shù)字表)將15只家兔分為空白對照組(簡稱對照組)、模型組、模型+推拿干預(yù)組(簡稱推拿組)，每組5只。

1.2實驗藥品與試劑環(huán)磷酰胺注射液(江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司)；主要組織相容性復(fù)合物(MHC)-Ⅱ一抗(ABCAM，United Kingdom)；白細胞介素(IL)-12一抗(北京博奧森生物技術(shù)有限公司)。

1.3實驗儀器電子天平，MP120-1(上海第二天平儀器廠)；光學(xué)顯微鏡及圖像分析系統(tǒng)、輪轉(zhuǎn)式石蠟切片機(德國Leica公司)；自動酶標儀MK3型(荷蘭雷勃公司)。

1.4實驗方法給予家兔環(huán)磷酰胺腹腔注射制造免疫抑制家兔模型。按照29.6 mg·kg-1·d-1的標準計算相應(yīng)的注射劑量，隔日1次，連續(xù)腹腔注射4次。對照組注射等量生理鹽水。

推拿組動物造模結(jié)束后第2天采用皮部推拿法干預(yù)，治療時家兔不固定以避免驚嚇。選擇家兔背部脊柱兩側(cè)足太陽膀胱經(jīng)皮部，從肺俞穴至腎俞穴之間部位(穴位選取按《獸醫(yī)針灸學(xué)》及《實驗針灸學(xué)》定位)。①揉膀胱經(jīng)：術(shù)者以拇指、食指指腹為著力點，在家兔背部脊柱兩側(cè)足太陽膀胱經(jīng)皮部由尾至頭施以輕揉法，時間約2 min；②推膀胱經(jīng)：術(shù)者以拇指、食指指腹為著力點，在家兔背部脊柱兩側(cè)足太陽膀胱經(jīng)皮部由尾至頭施以推法，時間約2 min；③捏脊法：以雙手拇指、食指指端夾持家兔背部皮毛及皮下組織，由尾至頭施以捏脊法，反復(fù)操作10次。每天1次，每次約20 min，連續(xù)操作21 d。

1.5檢測指標及方法(1)免疫抑制家兔胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)：干預(yù)結(jié)束后第2天，將實驗動物處死，剝離胸腺和脾臟并稱量濕重，按以下公式計算胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)：胸腺指數(shù)或脾臟指數(shù)=胸腺或脾臟重量(mg)/體重(g)。(2)家兔背部足太陽膀胱經(jīng)皮部局部皮膚中MHC-Ⅱ、IL-12含量：干預(yù)結(jié)束后第2天，將實驗動物處死，取背部施術(shù)部位皮膚進行切片染色，置于40倍物鏡下觀察、拍照，采用Leica計算機圖像分析系統(tǒng)對染色陽性細胞個數(shù)和灰度值進行定量分析。

1.6統(tǒng)計學(xué)分析計量資料組間比較行t檢驗。

2結(jié)果

2.1家兔胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)的影響實驗造模成功，皮部推拿法能夠提高免疫抑制家兔的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)，提示此方法能夠有效調(diào)節(jié)機體免疫功能。見表1。

2.2局部皮膚MHC-Ⅱ、IL-12含量的影響見表2。皮部推拿法能夠提高施術(shù)部位皮膚中MHC-Ⅱ、IL-12的含量，降低灰度值，提示此方法能夠有效調(diào)節(jié)機體免疫功能。

表1　皮部推拿法對家兔胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)的影響( ± s)

與對照組比較：1)P<0.01；與模型組比較：2)P<0.05

表2　皮部推拿法對局部皮膚MHC-Ⅱ、IL-12含量的影響

與對照組比較：1)P<0.05，2)P<0.01；與模型組比較：3)P<0.05，4)P<0.01

3討論

推拿療法是中醫(yī)傳統(tǒng)養(yǎng)生保健與治療疾病的方法之一，具有悠久的歷史和完善的理論基礎(chǔ)。連寶領(lǐng)、于娟、詹強等〔1～3〕研究均發(fā)現(xiàn)，通過不同的推拿方法能夠有效調(diào)整機體的免疫功能。皮部是十二經(jīng)脈在皮膚上的分屬部位，是十二經(jīng)脈功能活動反映于體表的部位，也是絡(luò)脈之氣散布之所在。《素問·皮部論》還說：“皮者，脈之部也。邪氣客于皮，則腠理開，開則邪氣客于絡(luò)脈；絡(luò)脈滿則注于經(jīng)脈；經(jīng)脈滿則入舍于府藏。”指出了疾病轉(zhuǎn)變的層次是皮部-絡(luò)脈-經(jīng)脈-臟腑，由表達里，逐漸深入。足太陽膀胱經(jīng)在十二經(jīng)脈中分布最長最廣，是人體的藩籬，太陽為諸陽之首，在三陽經(jīng)中陽氣最盛，陽氣如果虛衰，則機體免疫功能下降。同時，足太陽膀胱經(jīng)背部皮部包含了肺俞、心俞、肝俞、膽俞、脾俞、胃俞、腎俞等穴位。這些五臟背俞穴是五臟之氣輸注于腰背部的腧穴，具有調(diào)節(jié)五臟功能的作用，五臟功能和調(diào)，人體正氣充足，抗邪能力增強。因此，本研究采用推拿手法刺激家兔背部脊柱兩側(cè)的足太陽膀胱經(jīng)皮部來調(diào)整其免疫功能。

腹腔注射環(huán)磷酰胺制造免疫功能低下的動物模型是目前較為常用且技術(shù)成熟的造模方法。胸腺和脾臟均為機體免疫器官，是淋巴細胞分化、成熟和產(chǎn)生免疫應(yīng)答的場所，在免疫功能低下時胸腺、脾臟萎縮，體積變小。因此胸腺系數(shù)和脾臟系數(shù)是衡量機體免疫功能的重要指標〔4〕。MHC-Ⅱ類分子的表達被看成是抗原遞呈能力的標志，能夠協(xié)調(diào)免疫細胞間的相互作用，調(diào)控體液免疫和細胞免疫應(yīng)答〔5〕。IL-12是一種異雙聚體細胞因子，是重要的具有抗細胞內(nèi)病毒作用的細胞因子，具有調(diào)節(jié)細胞因子級聯(lián)反應(yīng)的作用，可促進機體免疫功能陣〔6〕。這些指標均能夠有效反映出機體免疫功能的變化。

4參考文獻

1連寶領(lǐng)，陳斌，朱鼎成，等.背腰部保健推拿對老年人免疫功能的影響〔J〕.按摩與導(dǎo)引，2002；18(6)：8-11.

2于娟.推拿腎俞穴治療老年腎虛腰痛免疫機制研究〔J〕.山東中醫(yī)雜志，2004；23(4)：214-6.

3詹強.足部反射區(qū)推拿對白細胞介素-1β水平的影響〔J〕.浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志，2004；14(3)：138-9，142.

4王麗君，姜虹.龍牙楤木多糖抗腫瘤活性及對荷瘤小鼠免疫功能的影響〔J〕.中國免疫學(xué)雜志，2011；27(2)：130-4.

5Jorundsson E，Press CM，Landsverk T.Distribution of MHC-Ⅱand CDI molecules in the skin of lambs and changes during experimentally-induced contact hypersensitivity〔J〕.Vet Immunol Immunopathol,2000；74(1-2)：87-101.

6Meeran SM，Katiyar N，Singh T，etal.Loss of endogenous interleukin-12 activates survival signals in ultraviolet-exposed mouse skin and skin tumors〔J〕.Neoplasia,2009；11(9)：846-55.

〔2014-02-19修回〕

(編輯袁左鳴)