福州市周邊蛋雞場(chǎng)禽白血病亞群的血清流行病學(xué)檢測(cè)

林伯全，徐 磊，黃招玲，廖惠珍，林祚貴，杜海江，楊 慧

(1.福建農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院動(dòng)物科學(xué)系，福建福州350119;2.長樂市農(nóng)業(yè)局農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)站，福建長樂350200)

禽白血病是由禽白血病病毒(avian leukosis virus，ALV)引起的以禽類造血組織中某些細(xì)胞成分過度增生為主的一類可傳染的腫瘤性疾病.ALV屬于反轉(zhuǎn)錄病毒科禽C型反轉(zhuǎn)錄病毒屬，其病毒可劃分為A－J 10個(gè)亞群，其中，從雞分離的有6個(gè)亞群(A、B、C、D、E、J)[1].禽白血病以垂直和水平傳播兩種方式在世界各國雞群中廣泛流行，病雞不僅僅表現(xiàn)為內(nèi)臟腫瘤或體表皮膚血管瘤，更多的雞表現(xiàn)產(chǎn)蛋下降、免疫抑制、發(fā)育不良及生長遲緩，甚至死亡[2].

從雞分離的6個(gè)亞群中，ALV-A是商品蛋雞和肉雞中最常見感染的外源型病毒，其次是ALV-B，而ALV-C、ALV-D 較少報(bào)道，ALV-E 主要是以內(nèi)源性前病毒形式存在[2].1988 年，Payne et al[3]從肉雞中分離出ALV-J.自報(bào)道以來，ALV-J已經(jīng)迅速蔓延至許多國家不同品種的蛋雞和肉雞中，對(duì)世界養(yǎng)雞業(yè)造成了嚴(yán)重的危害[4－6].我國禽白血病的發(fā)病率呈逐漸上升的趨勢(shì)，全國近80%的省份報(bào)道了雞群感染了ALV，給雞場(chǎng)帶來了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[7－8].

為了解福州市周邊蛋雞場(chǎng)禽白血病亞群的流行情況，應(yīng)用ELISA方法對(duì)福州市周邊蛋雞場(chǎng)不同品系雞群ALV-A/B和ALV-J抗體進(jìn)行血清流行病學(xué)調(diào)查，旨在為禽白血病的綜合防制提供科學(xué)依據(jù).

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品來源 2148份蛋雞血清樣品，分別采集自福州市周邊30個(gè)蛋雞場(chǎng)的597羽海蘭蛋雞、512羽羅曼蛋雞、486羽伊莎蛋雞和553羽特佳蛋雞，均為8－15月齡的產(chǎn)蛋母雞.

1.1.2 試劑與儀器 ALV-A/B和ALV-J抗體檢測(cè)試劑盒均購自美國IDEXX公司;全自動(dòng)酶標(biāo)儀為美國BIO RAD公司產(chǎn)品.

1.2 方法

計(jì)算方法:陰性對(duì)照平均值(NCX)=[D650nm(A1)+D650nm(A2)]/2;陽性對(duì)照平均值(PCX)=[D650nm(A3)+D650nm(A4)]/2;S/P=(樣品平均值－NCX)/(PCX－NCX).

ALV-A/B和ALV-J抗體的檢測(cè)嚴(yán)格按照相應(yīng)試劑盒說明書進(jìn)行.具體操作步驟如下:取100 μL不需稀釋的陰性對(duì)照加在A1和A2孔中，取100 μL不需稀釋的陽性對(duì)照加在A3和A4孔中，取100 μL 500倍稀釋的被檢樣品液加在相應(yīng)的孔中，所有被檢樣品都應(yīng)進(jìn)行雙孔測(cè)定;室溫下孵育30 min，每孔加入約350 μL稀釋的洗滌液進(jìn)行3－5次洗版;每孔加入100 μL酶標(biāo)羊抗雞抗體，室溫下孵育30 min，進(jìn)行3－5次洗版;每孔加入100 μL TMB底物液，室溫下孵育15 min;每孔加入100 μL終止液.酶標(biāo)儀空氣清零，測(cè)定各孔于650 nm波長處的光密度(D650nm).

福州市周邊30個(gè)蛋雞場(chǎng)ALV-A/B和ALV-J抗體雙陽性率為16.7%(5/30)，雙陽性率由高至低依次為:羅曼蛋雞群1.37%(7/512)、特佳蛋雞群0.90%(5/553)、海蘭蛋雞群0.34%(2/597)和伊莎蛋雞群0.20%(1/486).樣品ALV-A/B和ALV-J抗體雙陽性率合計(jì)為0.70%(15/2148)(表1).

目前國內(nèi)許多省份蛋雞群中己普遍發(fā)生禽白血病，蛋雞群禽白血病發(fā)病率在5%－20%，陽性率在不同品系和不同雞群間有所差異[8]，與本試驗(yàn)結(jié)果類似.本試驗(yàn)結(jié)果表明，福州市周邊蛋雞場(chǎng)不同品系和不同雞群間存在不同程度的ALV流行.

2 結(jié)果與分析

2.1 ALV-A/B抗體測(cè)定結(jié)果

福州市周邊30個(gè)蛋雞場(chǎng)ALV-A/B抗體陽性率為70.00%(21/30)，陽性率由高至低依次為:特佳蛋雞群 11.39%(63/553)、羅曼蛋雞群 11.32%(58/512)、海蘭蛋雞群 8.54%(51/597)和伊莎蛋雞群 7.61%(37/486).樣品ALV-A/B抗體陽性率合計(jì)為9.73%(209/2148)(表1).

若α1≥α2，則sα1≥sα2，從式(14)有(ma+ mb)2- mc2- 1≥mc2+ 1- (ma- mb)2，即ma2+ mb2≥mc2+ 此過程倒退回去，各式也成立。故對(duì)αmax有結(jié)論：

表1 ALV-A/B和ALV-J抗體檢測(cè)結(jié)果Table 1 The subgroup antibody test results of ALV-A/B and ALV-J

2.2 ALV-J抗體測(cè)定結(jié)果

盡管養(yǎng)雞業(yè)很早就意識(shí)到禽白血病的危害，但由于禽流感、新城疫等急性、烈性、高死亡率傳染病的活躍，常將禽白血病忽視.直到1997－1998年，ALV-J在世界范圍的大爆發(fā)，給養(yǎng)禽業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，禽白血病才開始受到高度重視，同時(shí)也成為學(xué)術(shù)界關(guān)注和研究的熱點(diǎn)[9].我國于1999年在市場(chǎng)上商品代肉雞中分離到ALV-J[10]，十余年來，ALV-J的宿主范圍已由肉種雞擴(kuò)大到蛋雞以及地方品種雞，是目前嚴(yán)重危害我國養(yǎng)禽業(yè)的傳染病之一[11－12].

2.3 ALV-A/B和ALV-J抗體雙陽性測(cè)定結(jié)果

ALV-A/B抗體檢測(cè)結(jié)果判定:S/P≤0.4，判為陰性;S/P＞0.4，判為陽性，表明存在ALV-A/B抗體.ALV-J抗體檢測(cè)結(jié)果判定:S/P≤0.6，判為陰性;S/P＞0.6，判為陽性，表明存在ALV-J抗體.

3 討論

福州市周邊30個(gè)蛋雞場(chǎng)ALV-J抗體陽性率為36.70%(11/30)，陽性率由高至低依次為:特佳蛋雞群5.24%(29/553)、羅曼蛋雞群 4.10%(21/512)、伊莎蛋雞群 3.51%(13/486)和海蘭蛋雞群 3.18%(19/597).樣品ALV-J抗體陽性率合計(jì)為3.82%(82/2148)(表1).

ADC模數(shù)轉(zhuǎn)換芯片AD9230與可變?cè)鲆娣糯笃鱒GA芯片ADL5243的寫控制類比于ADF4350芯片,鑒于文章篇幅的限制,本文以ADF4350芯片為例講解芯片的寫控制過程。

本研究發(fā)現(xiàn)，S6K1抑制劑PF-4708671和PI3K/mTOR激酶抑制劑NVP-BEZ235聯(lián)用于乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-436和肺癌細(xì)胞A549，可顯著增強(qiáng)單用時(shí)對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長抑制作用。

表1為各支流生態(tài)需水量和生態(tài)景觀用水流量表。從表1可知，通過分析流域面積大的大岸沖、八尺江、良鳳江、四塘江，天然來水量是滿足要求的，其余支流雖然生態(tài)用水滿足要求，但是保證率90%的來水量難以滿足景觀水量要求。

本次調(diào)查中，福州市周邊30個(gè)蛋雞場(chǎng)ALV-A/B抗體陽性率為70.00%(21/30)，高于ALV-J抗體陽性率36.7%(11/30);2148份樣品中，ALV-A/B抗體陽性率為9.73%(209/2148)，高于ALV-J抗體陽性率3.82%(82/2148).可見，相比 ALV-J，ALV-A/B 流行更為普遍.

1.2.1 對(duì)照組 采用常規(guī)圍手術(shù)期康復(fù)管理。①健康教育:階段性健康宣教，告知圍手術(shù)期可能出現(xiàn)的情況及注意事項(xiàng)。②術(shù)前腸道管理:術(shù)前4 h禁飲、8～12 h禁食，術(shù)前一晚予果導(dǎo)4～6片緩瀉。③疼痛管理:術(shù)后給予自控鎮(zhèn)痛泵(PCA)，疼痛難忍時(shí)予肌注鹽酸哌替啶75～100 mg鎮(zhèn)痛。④康復(fù)指導(dǎo):全麻清醒后6～12 h開始協(xié)助患者行肢體主、被動(dòng)活動(dòng)。⑤胸管拔除：胸腔閉式引流無漏氣、胸引量<100 ml/d(非血性、乳糜、膿性液)、胸片提示肺復(fù)張良好。

ALV-A/B和ALV-J抗體雙陽性測(cè)定結(jié)果表明，近年我國雞群出現(xiàn)不同亞群的ALV同時(shí)長期存在于同一只蛋雞中，預(yù)示著我國蛋雞業(yè)面臨更嚴(yán)重的ALV的危害[13].

為了解福州市周邊蛋雞場(chǎng)禽白血病亞群的流行情況，本次調(diào)查采用ELISA方法對(duì)分別采集自福州市周邊30個(gè)蛋雞場(chǎng)共2148羽血樣進(jìn)行ALV-A/B和ALV-J抗體檢測(cè)的結(jié)果表明，福州市周邊蛋雞場(chǎng)不同品系和不同雞群間存在不同程度的ALV流行，相比于ALV-J，ALV-A/B流行更為普遍，且存在ALV-A/B和ALV-J抗體雙陽性樣品，應(yīng)予重視.

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