固相萃取–氣相色譜法測(cè)定甘草中的六六六、滴滴涕含量

張海燕

（新疆庫(kù)爾勒出入境檢驗(yàn)檢疫局，新疆庫(kù)爾勒 841000）

甘草，氣微，味甜而特殊［1］，是一味傳統(tǒng)中藥材，也是新疆重要的進(jìn)出口商品，主要用于藥品、食品、化妝品及香煙類行業(yè)。六六六、滴滴涕（DDT）等有機(jī)氯農(nóng)藥，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，脂溶性大，殘效期長(zhǎng)，易在脂肪組織中蓄積，造成人體慢性中毒，嚴(yán)重危及身體健康［2］。盡管我國(guó)已在1983 年禁止使用六六六、滴滴涕等有機(jī)氯農(nóng)藥，但這些農(nóng)藥至今在土壤、地下水等環(huán)境中仍有殘存［3］。隨著中草藥國(guó)際貿(mào)易的日益頻繁，甘草質(zhì)量越來越受到重視，建立甘草中六六六、滴滴涕農(nóng)藥殘留量的快速檢測(cè)方法十分必要。

目前關(guān)于測(cè)定上述兩種農(nóng)藥殘留量的報(bào)道較多，但對(duì)甘草中六六六、滴滴涕農(nóng)藥殘留檢測(cè)進(jìn)行研究的報(bào)道不多［4–6］。此類農(nóng)藥的前處理方法主要有硫酸磺化法［7］、全自動(dòng)凝膠凈化法(GPC)［8–9］、Quchers法［10］、固相微萃取法［11］等。以上方法檢測(cè)周期長(zhǎng)，操作步驟相對(duì)繁瑣，試劑消耗量較大，提取效率不高，難以滿足大批量、多批次檢測(cè)的需求［12］。

筆者采用固相萃取法以Florisil 柱凈化，氣相色譜–電子捕獲檢測(cè)器經(jīng)DB–1 毛細(xì)管柱分析，建立了甘草中農(nóng)藥六六六、滴滴涕殘留量的測(cè)定方法，該方法簡(jiǎn)便、省時(shí)、準(zhǔn)確可靠，完成全部分析僅需15 min。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

氣相色譜儀：7890A型，配63Ni電子捕獲器(ECD)，美國(guó)Agilent 公司；

渦旋混合器：ms3型，德國(guó)IKA公司；

超聲波清洗器：SB5200型，必能信超生（上海）有限公司；

腕式振蕩器：WX 51100–35型，美國(guó)Burrell公司；

氮吹儀：N–EVAP 112型，美國(guó)Organomation Associates公司；

離心機(jī)：CF16RXII型，日本HITACHI公司；

固相萃取裝置：美國(guó)Waters公司；

旋風(fēng)磨：CYCLOTEC 1093型，丹麥Foss公司；

電子天平：XP205型，瑞士Mettler Toledo公司；

固相萃取小柱：弗羅里硅土柱（Florisil），1 000 mg／（6 mL），美國(guó)Agilent 公司；

α-六六六、β-六六六、γ-六六六、δ-六六六、P,P’-DDE（滴 滴 伊）、P,P’-DDD（滴 滴 滴）、O, P-DDT、P,P’-DDT標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度分別不小于97.5%，97.5%，98.5%，99.6%，98.0%，99.5%，98.5%，99.5%，Dr. Ehrenstorfer 公司；

氯化鈉：分析純，天津風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司；

正己烷、乙腈、丙酮：色譜純，美國(guó)Burdick & Jackson公司；

實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

1.2 色譜條件

色譜柱：DB–1型彈性石英毛細(xì)管色譜柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；進(jìn)樣口溫度：220℃；檢測(cè)器溫度：320℃；進(jìn)樣方式：脈沖不分流；載氣：高純氮（純度不小于99.999%），流量為1.0 mL／min；尾吹氣：氮?dú)?，流量?0 mL／min；進(jìn)樣體積：1 μL；程序升溫：初始溫度為70℃，保持1 min后，以20 ℃／min升至250℃，保持5 min，再以20℃／min升至270℃。

1.3 樣品處理

1.3.1 提取

將甘草樣品切斷后置于旋風(fēng)磨中粉碎，準(zhǔn)確稱取1.00 g甘草粉碎制品，加入10 mL水浸泡30 min，再加入20 mL乙腈，于旋渦儀上渦旋混勻1 min，超聲20 min，震蕩20 min，加入2.00 g NaCl進(jìn)行鹽析，以10 000 r／min離心5 min，取上清液10 mL (相當(dāng)于0.5 g樣品)，用N2吹干，加入2 mL正己烷，溶解，待凈化。

1.3.2 凈化

將Florisil小柱置于固相萃取裝置上，小柱先用5 mL丙酮–正己烷（1∶9）活化，用正己烷5 mL平衡，然后加入上述2 mL待凈化樣品液，用8 mL丙酮–正己烷(1∶9)分4 次洗脫，每次2 mL，收集全部洗脫液于10 mL刻度試管中，用氮?dú)獯蹈珊蠹尤? mL正己烷溶解，定容，上機(jī)，以氣相色譜法測(cè)定。以保留時(shí)間定性，色譜峰面積外標(biāo)法定量。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：精密稱取0.01 g(精確至0.1 mg)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)于10 mL容量瓶中，用丙酮–正己烷(1∶9)定容，配制成約1 000 μg／mL單標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于–18 ℃保存。

混合農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液：各取適量體積的對(duì)應(yīng)農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于10 mL容量瓶中，用正己烷稀釋定容，配制成10 μg／mL混合標(biāo)準(zhǔn)中間液。臨用前用正己烷逐級(jí)稀釋配制成對(duì)應(yīng)濃度的混合農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2 結(jié)果與討論

2.1 提取溶劑的選擇

常用的提取溶劑有乙腈、丙酮和乙酸乙酯。丙酮提取過程中會(huì)將大量色素同時(shí)提取出來，影響后續(xù)凈化；乙酸乙酯與水不混溶，不易滲入植物細(xì)胞，不利于農(nóng)藥萃?。?3］；乙腈作提取溶劑，滲透性好，在鹽飽和狀態(tài)下可以與水完全分離，應(yīng)用于氣相色譜分析有很好的適用性。故選擇乙腈作為提取溶劑。

考察加水與不加水條件下農(nóng)藥的回收率，試驗(yàn)結(jié)果表明加水浸潤(rùn)提取的回收率高于不加水提取的回收率，這可能是因?yàn)榻?rùn)后水分子能減少樣品顆粒之間的吸附力，可使提取溶劑更好地浸入樣品，有利于樣品內(nèi)農(nóng)藥的釋放，從而增大提取效率。因此在用有機(jī)溶劑提取前向甘草樣品中加適量水浸潤(rùn)。

2.2 固相萃取柱的選擇

N-丙基乙二胺(PSA)主要去除糖類、脂肪酸、有機(jī)酸、酚類和親脂性色素等極性物質(zhì)；C18柱是QuEChERS 方 法［14］(Quick，Easy，Cheap，Effective，Rugged，Safe)最為重要的凈化劑，除去脂肪、維生素、色素、甾醇效果較好。相對(duì)于弗羅里硅土(Florisil )，C18和PSA對(duì)農(nóng)藥的回收率影響很小，但它們對(duì)色素的凈化效果均不理想。石墨化炭黑(GCB)主要去除色素等物質(zhì)，但在多殘留農(nóng)藥的檢測(cè)中會(huì)導(dǎo)致回收率下降，因此在無顏色或者淺顏色的基質(zhì)中使用較少。Florisil主要用于分離氯化殺蟲劑，在美國(guó)分析化學(xué)家協(xié)會(huì)（AOAC）和美國(guó)環(huán)保署（EPA）等推薦方法中也多用它［15］，基于上述原因和目標(biāo)物的特性，選擇弗羅里硅土固相萃取柱為凈化柱。

2.3 洗脫溶劑

洗脫劑的選擇關(guān)系到測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確度。若洗脫劑極性太強(qiáng)，會(huì)洗下一些強(qiáng)保留的雜質(zhì)組分；若洗脫劑極性太弱，則有些待測(cè)組分難以被完全洗脫［16］。用丙酮–正己烷(1∶9)調(diào)節(jié)洗脫劑的極性效果較好，因此選擇丙酮–正己烷(1∶9)為洗脫劑，洗脫劑的用量為8 mL，流量為2.0 mL／min。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線和檢出限

將10 μg／mL混合農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)中間液稀釋成1.0 μg／mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，并以此分別配制質(zhì)量濃度為0.005，0.01，0.02，0.05，0.10，0.20，0.50 μg／mL的系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，進(jìn)樣分析。各組分濃度均為0.1 μg／mL混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖見圖1。以色譜峰面積(y)對(duì)農(nóng)藥質(zhì)量濃度(x)進(jìn)行回歸，計(jì)算得相應(yīng)農(nóng)藥的回歸方程。以3倍信噪比時(shí)的添加濃度作為方法檢出限，以被測(cè)組分的信號(hào)值大于基線平均噪音10倍時(shí)的濃度為定量限，線性范圍、線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)見表1。

圖1 混合農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

表1 線性范圍、線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)和檢出限

2.5 方法精密度和回收率

稱取空白甘草樣品2.00 g，按標(biāo)準(zhǔn)加入法添加相當(dāng)于含量0.05，0.1，0.5 mg／kg 3個(gè)水平的BHC，DDT 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按1.3方法處理樣品，在1.2色譜條件下測(cè)定，每個(gè)添加水平重復(fù)5 次，得2 種農(nóng)藥共計(jì)8 種同分異構(gòu)體的回收率?？瞻讟悠芳凹訕?biāo)樣品的色譜圖分別見圖2、圖3。回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差結(jié)果見表2。

圖2 空白樣品色譜圖

圖3 加標(biāo)樣品(添加0.05 mg／kg)色譜圖

表2 空白甘草樣品中六六六、滴滴涕農(nóng)藥的回收試驗(yàn)結(jié)果(n=5) %

由表2可知，在3個(gè)添加水平下，六六六、滴滴涕8個(gè)異構(gòu)體，除P，P’-DDT 的回收率為60.1%外，其余回收率在71.4%～122.2%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為2.3%～15.1%，方法的精密度和準(zhǔn)確度均符合殘留分析的要求。

3 結(jié)語

建立了甘草中六六六、滴滴涕農(nóng)藥及異構(gòu)體的多殘留氣相色譜檢測(cè)方法。樣品以乙腈為提取劑，水浴超聲輔助震蕩提取，弗羅里硅土固相萃取柱凈化，DB–1 毛細(xì)管色譜柱分離，電子捕獲檢測(cè)器檢測(cè)。該方法的靈敏度和準(zhǔn)確度均滿足實(shí)際樣品檢測(cè)的需要，方法簡(jiǎn)便，測(cè)定快速。

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