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    大腸桿菌檢驗(yàn)方法的探究與分析

    2015-12-24 01:31:12彭建瓊629200四川省射洪縣人民醫(yī)院
    中國社區(qū)醫(yī)師 2015年30期

    彭建瓊629200四川省射洪縣人民醫(yī)院

    大腸桿菌檢驗(yàn)方法的探究與分析

    彭建瓊
    629200四川省射洪縣人民醫(yī)院

    目的:探討不同檢驗(yàn)方法對大腸桿菌檢出率的影響。方法:分別采用一次離心法、二次離心法、離心-濾膜法、離心-雙重濾膜法檢測模型藥物呋喃唑酮片的大腸桿菌,觀察檢出率。結(jié)果:一次離心法:膽鹽乳糖增菌液略顯渾濁,無氣體產(chǎn)生,伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基無菌落長出;二次離心法和離心-濾膜法:膽鹽乳糖增菌液澄清且無氣體產(chǎn)生,伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基無菌落長出;離心-雙重濾膜法:膽鹽乳糖增菌液渾濁且有氣體產(chǎn)生,伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基可觀察到明顯的菌落。結(jié)論:與其他方法相比,離心-雙重濾膜法對大腸桿菌的檢出率較高,同時(shí)操作更加簡便。

    大腸桿菌;檢驗(yàn)方法;呋喃唑酮片

    大腸菌群是一種革蘭陰性菌,屬于兼具需氧和厭氧性的無芽孢桿菌,能夠發(fā)酵乳糖并產(chǎn)酸產(chǎn)氣。這種菌主要存在于人類及其他恒溫動物的糞便中,因此需要通過檢測大腸桿菌情況來判斷食物、藥品等是否受到糞便的污染,是口服藥物的常規(guī)必須檢測的項(xiàng)目之一。一次離心法、二次離心法、離心-濾膜法以及離心-雙重濾膜法都是常用的大腸桿菌檢驗(yàn)方法,檢測靈敏度有所不同。呋喃唑酮片是一種常用于治療由大腸桿菌、痢疾桿菌引發(fā)的腸炎及菌痢等疾病的抗菌藥[1]。由于其的抗菌特性,常規(guī)檢驗(yàn)方法難以檢測出呋喃唑酮片中的大腸桿菌。因此本文以呋喃唑酮片為模型藥物,考察一次離心法、二次離心法、離心-濾膜法以及離心-雙重濾膜法四種不同的大腸桿菌檢驗(yàn)方法檢測大腸桿菌的情況,現(xiàn)報(bào)告如下。

    資料與方法

    選取規(guī)格100mg/片的呋喃唑酮片;采用兩種不同規(guī)格的混合纖維素酯微孔濾膜,孔徑分別為1.20μm和0.45μ m;選用中國藥品生物制品檢定所提供的含伊紅美藍(lán)(eosinmethyleneblue,EMB)瓊脂的大腸桿菌生化反應(yīng)培養(yǎng)基,以及膽鹽乳糖增菌液;大腸桿菌使用CMCC(B)44102。

    方法:①供試液的制備:取呋喃唑酮片與大腸桿菌CMCC(B)適量,制成含大腸桿菌的具有呋喃唑酮成分的供試液,待用。②一次離心法:將所制得的含大腸桿菌的具有呋喃唑酮成分的供試液離心(3000/min,30min),取上清液適量,用于大腸桿菌的檢驗(yàn)。將所取上清液加入膽鹽乳糖增菌液中,增菌48h后,觀察增菌液是否出現(xiàn)渾濁和產(chǎn)氣現(xiàn)象;另取上清液,接種于伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基上,進(jìn)行平板分離檢驗(yàn),培養(yǎng)兩周后,觀察培養(yǎng)基上大腸桿菌菌落生長情況。③二次離心法:將所制得的含大腸桿菌的具有呋喃唑酮成分的供試液離心(3000/min,30min),充分取上清液,再次離心(3000/min,30min),取上清液適量,用于檢驗(yàn)。將所取上清液加入膽鹽乳糖增菌液中,增菌48h,觀察增菌液是否出現(xiàn)渾濁和產(chǎn)氣現(xiàn)象;另取上清液適量,接種于伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基上[2],進(jìn)行平板分離檢驗(yàn),培養(yǎng)兩周后,觀察培養(yǎng)基上大腸桿菌菌落生長情況。④離心-濾膜法:取所制得的含大腸桿菌的具有呋喃唑酮成分的供試液適量,離心(3000/min,30min),取上清液,經(jīng)0.45μm混合纖維素酯微孔濾膜過濾后,將所得溶液用于大腸桿菌的檢驗(yàn)。取所得溶液加入膽鹽乳糖增菌液中,增菌48h后,觀察增菌液是否出現(xiàn)渾濁和產(chǎn)氣現(xiàn)象;另取部分溶液接種于伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基上,進(jìn)行平板分離檢驗(yàn),培養(yǎng)兩周后,觀察培養(yǎng)基上大腸桿菌菌落生長情況。⑤離心-雙重濾膜法:取所制得的含大腸桿菌的具有呋喃唑酮成分的供試液適量,離心(3000/min,30min),取上清液,分別依次經(jīng)3.0μm和0.45μm孔徑的混合纖維素酯微孔濾膜過濾后,將所得溶液用于大腸桿菌的檢驗(yàn)。取適量溶液加入膽鹽乳糖增菌液中,增菌48h后,觀察增菌液是否出現(xiàn)渾濁和產(chǎn)氣現(xiàn)象;另取部分溶液接種于伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基上,進(jìn)行平板分離檢驗(yàn),培養(yǎng)2周后,觀察培養(yǎng)基上大腸桿菌菌落生長情況。

    觀察指標(biāo):根據(jù)膽鹽乳糖增菌液試驗(yàn)和伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基試驗(yàn)判斷大腸桿菌的檢測。膽鹽乳糖增菌液試驗(yàn)中,若增菌48h后增菌液出現(xiàn)渾濁(+)和產(chǎn)氣現(xiàn)象(+),則認(rèn)為檢出大腸桿菌(+/+),否則為未檢出(+/-、-/+或-/-);伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基試驗(yàn)中,培養(yǎng)2周后,若培養(yǎng)基上產(chǎn)生有金屬光澤的紫色菌落,則認(rèn)為有大腸桿菌檢出(+),否則為未檢出(-)。

    統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,若P<0.05則認(rèn)為組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    結(jié)果

    一次離心法:膽鹽乳糖增菌液略顯渾濁,無氣體產(chǎn)生,伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基無菌落長出,認(rèn)為未檢出大腸桿菌;二次離心法:膽鹽乳糖增菌液澄清且無氣體產(chǎn)生,伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基無菌落長出;離心-濾膜法:膽鹽乳糖增菌液澄清且無氣體產(chǎn)生[3],伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基無菌落長出;離心-雙重濾膜法:膽鹽乳糖增菌液渾濁且有氣體產(chǎn)生,伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基可觀察到明顯的菌落。采用4種不同的大腸桿菌檢驗(yàn)方法檢驗(yàn)呋喃唑酮片大腸桿菌的結(jié)果,見表1。

    表1 采用4種不同的大腸桿菌檢驗(yàn)方法檢驗(yàn)呋喃唑酮片大腸桿菌結(jié)果比較

    討論

    人們服用被糞便污染的食品及藥品后,有被其中可能存在的腸道致病菌等病原微生物感染的危險(xiǎn),因此常通過檢測大腸桿菌用來判斷食品或藥品等是否被糞便污染[4]。一次離心法、二次離心法、離心-濾膜法以及離心-雙重濾膜法都是常用的大腸桿菌檢驗(yàn)方法,但對于呋喃唑酮片這類本身具有抑菌特性的抗菌藥物來說,常規(guī)檢測方法往往難以檢測出其中含有的大腸桿菌。本實(shí)驗(yàn)中,一次離心法、二次離心法和離心-濾膜法,膽鹽乳糖增菌液試驗(yàn)和伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基試驗(yàn)均認(rèn)為未檢出大腸桿菌[5],其中,一次離心法膽鹽乳糖增菌液略顯渾濁,而二次離心法中增菌液澄清,加之兩種方法都沒有檢測到氣體產(chǎn)生,因此并不能認(rèn)為一次離心法有大腸桿菌檢出,這種渾濁可能與離心不完全有關(guān)。4種檢測方法中,只有離心-雙重濾膜法試驗(yàn)均呈陽性,且伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基中可觀察到明顯的深紫色、有金屬光澤的大腸桿菌菌落,認(rèn)為有大腸桿菌檢出[6],可見離心-雙重濾膜法更適用于對呋喃唑酮這類抗菌藥物的大腸桿菌檢測。因?yàn)殡x心-雙重濾膜法經(jīng)離心和兩次濾膜過濾,使呋喃唑酮的藥物濃度降低至其有效抑菌濃度之下[7],因此檢測大腸桿菌的靈敏度更高。所以將離心-雙重濾膜法用于呋喃唑酮這類抗菌藥物的大腸桿菌檢驗(yàn)具有一定的應(yīng)用前景,有待進(jìn)一步的研究。

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    圖2

    圖3

    圖4

    討論

    上述幾種情況在臨床檢驗(yàn)工作中比較常見,我們通過對血液分析儀結(jié)果顯示的數(shù)據(jù)、圖形和報(bào)警進(jìn)行分析,對顯示的異常情況進(jìn)行分析,尋找原因,防止差錯的發(fā)生。這就要求檢驗(yàn)操作人員嚴(yán)格執(zhí)行儀器操作規(guī)程,掌握儀器的工作原理和一定的臨床知識。血液分析儀欲獲得準(zhǔn)確、可比的結(jié)果,除按照規(guī)定校準(zhǔn)外,還需要做好日常的質(zhì)量控制[2],使檢驗(yàn)的結(jié)果準(zhǔn)確、可靠,才能在疾病的診斷和治療中發(fā)揮最大作用。

    參考文獻(xiàn)

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    Explorationandanalysisofthemethodfortheinspectionofescherichiacoli

    PengJianqiong
    ThePeople'sHospitalofShehongCounty,SichuanProvince629200

    Objective:Toinvestigatetheeffectofdifferenttestmethodsonthedetectionrateofescherichiacoli.Methods:One centrifugalmethod,twocentrifugalmethod,thecentrifugalfiltrationmembranemethodandthecentrifugaldoublefiltration membranemethodwereusedtodetecttheescherichiacoliinfurazolidonetablet.Results:Inonecentrifugalmethod,theincreasing bacterialliquidofbilesaltlactosewasslightlyturbid,andtherewasnogas,culturemediumofeosinmethyleneblueagarhadno bacterialcolonylength.Intwocentrifugalmethodandthecentrifugalfiltrationmembranemethod,theincreasingbacterialliquidof bilesaltlactosewasclear,andtherewasnogas,culturemediumofeosinmethyleneblueagarhadnobacterialcolonylength.Inthe centrifugaldoublefiltrationmembranemethod,theincreasingbacterialliquidofbilesaltlactosewasturbid,andtherewasgas, culturemediumofeosinmethyleneblueagarhadobviouscolony.Conclusion:Comparedwithothermethods,thedetectionrateof thecentrifugaldoublefiltrationmembranemethodforescherichiacoliwashigh,andtheoperationwasmoreconvenient.

    Escherichiacoli;Testmethod;Furazolidonetablet

    10.3969/j.issn.1007-614x.2015.30.70

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