膠體金免疫層析試紙條與ELISA檢測豬藍(lán)耳病抗體的比對(duì)試驗(yàn)

宋忠旭，雷 彬，李良華，孫 華，彭先文，梅書棋，李明波，陳明銀，吳 飆

（1.湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，湖北 武漢 430064；2.武漢市江夏區(qū)畜牧獸醫(yī)局，湖北 武漢 430200；3.通城縣畜牧獸醫(yī)局，湖北 咸寧 437400）

膠體金免疫層析試紙條與ELISA檢測豬藍(lán)耳病抗體的比對(duì)試驗(yàn)

宋忠旭1，雷 彬1，李良華1，孫 華1，彭先文1，梅書棋1，李明波1，陳明銀2，吳 飆3

（1.湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，湖北 武漢 430064；2.武漢市江夏區(qū)畜牧獸醫(yī)局，湖北 武漢 430200；3.通城縣畜牧獸醫(yī)局，湖北 咸寧 437400）

膠體金免疫層析試紙條檢測豬藍(lán)耳病抗體的結(jié)果中強(qiáng)陽性、中陽性、弱陽性、陰性分別為48.67%、18.58%、31.86%、0.88%，檢測豬藍(lán)耳病抗體合格率99.12%；ELISA檢測豬藍(lán)耳病抗體合格率95.58%，符合率為96.43%。膠體金免疫層析試紙條能夠評(píng)價(jià)豬藍(lán)耳病疫苗臨床免疫狀況，可進(jìn)行豬藍(lán)耳病抗體的定性檢測。

豬藍(lán)耳病；膠體金免疫層析試紙條；ELISA ；抗體比對(duì)

豬藍(lán)耳病又稱豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS），是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的以母豬繁殖障礙、呼吸系統(tǒng)疾病、高熱和神經(jīng)癥狀為特征的傳染病，是影響?zhàn)B豬生產(chǎn)的最重要疫病之一[1]。

結(jié)合前期豬群PRRS臨床流行病學(xué)、PRRSV感染和抗體狀況的監(jiān)測分析，我們確定母豬免疫方案是產(chǎn)后3周接種豬藍(lán)耳病JXA-1R活疫苗，并與豬瘟疫苗間隔1周以上。為了驗(yàn)證免疫效果，用IDEXX公司ELISA試劑盒進(jìn)行血清抗體檢測，同時(shí)，進(jìn)行了膠體金免疫層析試紙條檢測豬藍(lán)耳病抗體的比對(duì)試驗(yàn)，現(xiàn)將試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 血清樣本的采集

抽樣113頭免疫豬藍(lán)耳病疫苗后3～4周的成年母豬，前腔靜脈采血，離心血液，將同一頭豬的血清分成2份，一份用于ELISA檢測豬藍(lán)耳病抗體，另一份用于膠體金免疫層析試紙條檢測豬藍(lán)耳病抗體。

1.2 ELISA檢測豬藍(lán)耳病抗體

將用于ELISA檢測的血清，冷藏送至華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，用美國IDEXX公司ELISA試劑盒進(jìn)行檢測，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)為國家生豬產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系方法，IDEXX：S/P≥0.4判定為陽性；S/P＜0.4判定為陰性。

1.3 膠體金免疫層析試紙條檢測豬藍(lán)耳病抗體

1）膠體金免疫層析試紙條，由河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動(dòng)物免疫學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供，密封、干燥、4 ℃保存。

2）將試紙條從冰箱中取出，待其恢復(fù)至室溫再打開密封使用。

3）根據(jù)已編號(hào)的待檢血清樣品份數(shù)取出稀釋杯，每杯加入200μL（約7滴）的稀釋液，取1μL的待檢樣品加入對(duì)應(yīng)的稀釋杯中混勻，1∶200稀釋樣品，取出試紙卡編號(hào)、平放，取稀釋好的樣品溶液100μL（約4滴）加入相應(yīng)的試紙卡樣品中，靜置5～10 min后觀察結(jié)果。

4）結(jié)果判定：對(duì)照樣品 陽性對(duì)照應(yīng)出現(xiàn)兩條紅線（檢測線和質(zhì)控線），陰性對(duì)照只出現(xiàn)一條紅色質(zhì)控線。

被檢樣品 視窗區(qū)出現(xiàn)兩條紅色線（檢測線和質(zhì)控線），檢測線明顯強(qiáng)于質(zhì)控線時(shí)判為強(qiáng)陽性，可記為“+++”；檢測線與質(zhì)控線顯色強(qiáng)度相當(dāng)時(shí)判為中陽性，可記為“++”；檢測線明顯弱于質(zhì)控線時(shí)判為弱陽性，可記為“+”；只出現(xiàn)一條紅色質(zhì)控線時(shí)判為陰性，可記為“-”；質(zhì)控線不顯紅色時(shí)，表示操作有誤或試紙失效。

2 結(jié)果

膠體金免疫層析試紙條檢測豬藍(lán)耳病抗體，結(jié)果如表1。膠體金免疫層析試紙條檢測豬藍(lán)耳病抗體與ELISA法檢測豬藍(lán)耳病抗體，比對(duì)結(jié)果見表2。

表1 膠體金免疫層析試紙條檢測豬藍(lán)耳病抗體結(jié)果

表2 膠體金免疫層析試紙條檢測豬藍(lán)耳病抗體與ELISA法檢測豬藍(lán)耳病抗體比對(duì)結(jié)果

3 討論

1）膠體金免疫層析試紙條檢測豬藍(lán)耳病抗體的結(jié)果中強(qiáng)陽性、中陽性、弱陽性、陰性分別為48.67%、18.58%、31.86%、0.88%，說明膠體金免疫層析試紙條能夠評(píng)價(jià)豬藍(lán)耳病疫苗臨床免疫狀況，為豬藍(lán)耳病免疫提供參考。

2）膠體金免疫層析試紙條檢測豬藍(lán)耳病抗體合格率99.12%，ELISA檢測豬藍(lán)耳病抗體合格率95.58%，膠體金免疫層析試紙條比ELISA法檢測豬藍(lán)耳病抗體敏感，與金顏輝等的結(jié)果不一致[2]，與劉凱等的結(jié)論不一致[3]，影響膠體金標(biāo)記蛋白質(zhì)質(zhì)量的因素很多[4]，說明膠體金免疫層析試紙條還需要進(jìn)一步調(diào)整和完善，但是，膠體金免疫層析試紙條檢測豬藍(lán)耳病抗體與ELISA檢測豬藍(lán)耳病抗體符合率為96.43%，說明膠體金免疫層析試紙條可以進(jìn)行豬藍(lán)耳病抗體的定性檢測。

3）膠體金免疫層析試紙條可用于檢測豬藍(lán)耳病毒感染或活疫苗免疫后血清抗體，只要知道豬群藍(lán)耳病的免疫背景，就可以診斷豬群是否感染了豬藍(lán)耳病，是未來畜禽疾病診斷的一種新的手段[5]。

4）產(chǎn)品包含試紙條、樣品稀釋液、稀釋杯、滴管、陽性對(duì)照和陰性對(duì)照，操作簡便。

4 結(jié)論

由于膠體金免疫層析試紙條中膠體金標(biāo)記蛋白質(zhì)是一物理結(jié)合過程，結(jié)合牢固，很少引起蛋白質(zhì)活性改變，所以試劑非常穩(wěn)定，不受溫度等外界因素影響，可隨身攜帶，隨時(shí)檢測，檢測結(jié)果也可長期保存，能夠用于豬血清中豬藍(lán)耳病抗體的定性檢測，非常適合于基層獸醫(yī)和相關(guān)技術(shù)人員、養(yǎng)殖場戶對(duì)豬藍(lán)耳病的診斷、抗體水平的快速監(jiān)測。

[1] 孫淑清，王劍.斷奶仔豬藍(lán)耳病的診治[J].中國獸醫(yī)科技，2003，33(11)：61-62.

[2] 金顏輝，黃印堯，張長弓，等.應(yīng)用金免疫層析技術(shù)檢測豬瘟抗體的研究[J].中國動(dòng)物檢疫，2004，21(5)：26-27.

[3] 劉凱，劉忠清，李文德.牛出血性敗血癥膠體金免疫層析快速診斷方法的建立[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2012，33(11)：134-136.

[4] 黃芬，葉紹輝，龔振明.免疫層析快速診斷試紙條的制備及其應(yīng)用[J].當(dāng)代畜牧，2006（8）：20-22.

[5] 張鳳珍.免疫膠體金技術(shù)的基本原理及其在獸醫(yī)臨床中應(yīng)用的研究進(jìn)展[J].畜牧獸醫(yī)科技信息，2009（1）：7-9.

2015-08-22）

國家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2011BAD28B01-3)、國家生豬產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系項(xiàng)目(CARS-36)、湖北省農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新中心創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目(2011-620-001-003)、湖北省重大人才工程高端人才引領(lǐng)培養(yǎng)計(jì)劃

宋忠旭（1969-），男，高級(jí)畜牧師，研究方向豬育種及生產(chǎn)管理，E-mail:songzx365@163.com

梅書棋（1971-），男，研究員，研究方向豬遺傳育種，E-mail:msqlfe@163.com