半夏膨化品與生品多糖含量比較研究

程 芬，王盛民，楊長花，王 青

(1.陜西國際商貿(mào)學(xué)院醫(yī)藥學(xué)院，陜西咸陽712000;2.西南交通大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院，四川成都610031)

膨化技術(shù)［1］是一個(gè)廣泛應(yīng)用于食品行業(yè)的加工技術(shù)，它的原理是通過旋轉(zhuǎn)螺桿的剪切、擠壓及摩擦升溫，膨化腔內(nèi)產(chǎn)生高溫高壓后壓力驟降至常溫常壓，原料中的水分驟然汽化做功，達(dá)到膨化的目的。已有人將此技術(shù)用于中藥的炮制［2-3］，但對半夏的膨化還未見相關(guān)報(bào)道。多糖為半夏的另一有效成分，研究表明，半夏多糖具有抗腫瘤的作用［4］。筆者采用PH-42型谷物膨化機(jī)，對半夏進(jìn)行膨化，用苯酚-硫酸法［5］測定多糖含量，并與半夏飲片進(jìn)行比較。

1 材料與方法

1.1 材料 供試藥材:半夏藥材購于成都荷花池藥材市場，經(jīng)西南交通大學(xué)王盛民教授鑒定為天南星科植物半夏［Pinellia ternata(Thunb.)Breit.］的塊莖。

主要儀器:BSA224S電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司;UV-2450紫外分光光度計(jì)，蘇州市萊頓科學(xué)儀器有限公司;恒溫水浴鍋，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司;高速冷凍離心機(jī)，德國HERMIE公司Z323K。主要試劑:D-葡萄糖對照品，購于中國藥品生物制品檢定所，批號110833-200904。

1.2 方法

1.2.1 對照品溶液的制備。精密稱取105℃干燥至恒重的D-無水葡萄糖對照品6.5 mg，置100 ml量瓶中，加純水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

1.2.2 測定波長的選擇。分別將半夏供試品和對照品液顯色后，以空白試劑為對照，照紫外-可見分光光度法(《中國藥典》2010年版一部附錄VA)，在400～600 nm波長處進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果供試品和對照品液在486 nm處都有最大吸收，故選擇486 nm作為測定波長。

1.2.3 顯色條件的考察。影響顯色的因素主要有水浴溫度、水浴時(shí)間、苯酚濃度，試驗(yàn)對各影響因素進(jìn)行考察。

1.2.3.2 水浴溫度的考察。精密吸取對照品溶液1.2 ml于試管中，方法同“1.2.3.1”，于不同溫度水浴中保溫 30 min，取出，置冰水浴中5 min，取出，以空白試劑為對照，在486 nm波長處測定吸光度值，考察水浴溫度對顯色的影響。

1.2.3.3 苯酚濃度的考察。精密吸取對照品溶液1.2 ml于試管中，加蒸餾水至2.0 ml，分別精密加入不同濃度的苯酚1.0 ml，混勻，其余方法同“1.2.3.1”，以相應(yīng)試劑為空白，在486 nm波長處測定吸光度值，考察苯酚濃度對顯色的影響。

1.2.3.4 供試品提取時(shí)間的考察。精密稱取半夏粗粉8份，每份1.0 g，置圓底燒瓶中，加水100 ml，稱定重量，加熱回流 1.0、1.5、2.0、2.5 h，冷卻，稱重，補(bǔ)足重量，用脫脂棉濾過，精密吸取續(xù)濾液 2.0 ml，加乙醇 10.0 ml，搖勻，靜置 12 h，離心［4］，取沉淀加水溶解，置50 ml容量瓶中，稀釋至刻度。精密吸取2.0 ml于試管中，立即加入5%苯酚溶液1.0 ml，混勻，迅速加入濃硫酸7.0 ml，搖勻，于40℃水浴中保溫30 min，取出，置冰水浴中5 min，取出，以相應(yīng)試劑為空白，在486 nm波長處測定吸光度值，計(jì)算其含量，考察供試品提取時(shí)間對顯色的影響。

1.2.4 供試品制備方法確定。精密稱取半夏粗粉l.0 g，置圓底燒瓶中，加水100 ml，稱定重量，加熱回流1.5 h，冷卻，稱重，補(bǔ)足重量，用脫脂棉濾過，精密吸取續(xù)濾液2.0 ml，加乙醇10.0 ml，搖勻，靜置12 h，離心，取沉淀加水溶解，置50 ml容量瓶中，稀釋至刻度。精密量取2.0 ml于試管中，立即加入5%苯酚溶液1.0 ml，混勻，迅速加入濃硫酸7.0 ml，搖勻，于40℃水浴中保溫30 min，取出，置冰水浴中5 min，取出，以相應(yīng)試劑為空白，在486 nm波長處測定吸光度值。

1.2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備。精密吸取葡萄糖對照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ml，分別加水至 2.0 ml，立即加入 5% 的苯酚 1.0 ml，混勻，迅速加入濃硫酸 7.0 ml，搖勻，于 40 ℃水浴中保溫30 min，取出，置冰水浴中5 min，取出，以相應(yīng)試劑為空白，在486 nm波長處測定吸光度值，以吸光度(A)為縱坐標(biāo)，濃度(mg/ml)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.6 方法學(xué)考察。對儀器精密度、樣品穩(wěn)定性、試驗(yàn)重復(fù)性進(jìn)行考察，并計(jì)算樣品的加樣回收率。

2 結(jié)果與分析

2.1 水浴時(shí)間的考察 由圖1可見，水浴時(shí)間為30 min時(shí)測得的吸光度值最高，故選擇30 min為試驗(yàn)的最佳的水浴時(shí)間。

2.2 水浴溫度的考察 由圖2可知，水浴溫度40℃測得的吸光度值最高，故選擇40℃為試驗(yàn)的最佳水浴溫度。

青海省作為三江源頭，其對生態(tài)環(huán)境的影響必須得到重視。為加強(qiáng)河道治理，近年來，政府加大投資在沿河堤壩營造防護(hù)林，鋪設(shè)草皮，種植功能型植物，以減少水土流失，凈化河流水質(zhì)，取得了良好的生態(tài)效益、經(jīng)濟(jì)效益和社會效益，而綠化面積的確定成為了實(shí)施河道治理的關(guān)鍵因素[1-3]。精確的綠地面積測量能給規(guī)劃設(shè)計(jì)單位或施工甲乙雙方的決算提供可靠依據(jù)。

2.3 苯酚濃度的考察 由圖3可知，加入5%苯酚和6%苯酚測得的吸光度值接近，但由于6%苯酚在水中溶解不充分，為保證測量的準(zhǔn)確性，選擇5%苯酚濃度最佳。

2.4 供試品提取時(shí)間的考察 由圖4可知，提取1.5 h和2.0 h含量差別較小，但考慮到節(jié)約資源，選擇1.5 h為最佳提取時(shí)間。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 按照“1.2.5”繪得標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為 y=12.582x+0.016 1，R2=0.999 2(n=6)，表明葡萄糖對照品在0.013～0.065 mg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.6 方法學(xué)考察

2.6.1 精密度考察。精密吸取對照品溶液各1.0 ml于6個(gè)試管中，按“1.2”項(xiàng)下的方法制備供試品和對照品，在486 nm波長處測定吸光度值，重復(fù)6次，結(jié)果RSD值為1.02%，表明儀器精度性良好。

2.6.2 穩(wěn)定性考察。精密吸取供試品溶液2.0 ml于試管中，立即加入5%苯酚溶液1.0 ml，混勻，迅速加入濃硫酸7.0 ml，搖勻，于40℃水浴中保溫30 min，取出，置冰水浴中5 min，取出，以相應(yīng)試劑為空白，在 0、30、60、120、180、240 min時(shí)測定吸光度值，結(jié)果RSD值為1.48%，表明供試品穩(wěn)定性良好。

2.6.3 重復(fù)性考察。取同一批半夏粗粉1.0 g，共6份，精密稱定，按“1.2”項(xiàng)下方法制備供試品和對照品，在486 nm波長處測定吸光度值，重復(fù)6次，結(jié)果RSD值為1.16%，表明重復(fù)性良好。

2.6.4 加樣回收率考察。取同一批半夏粗粉約0.5 g，共6份(已知多糖含量為12.89%)，分別精密加入葡萄糖對照品溶液1.0 ml(濃度為0.065 mg/ml)，照“1.2”項(xiàng)下方法制備供試品和對照品，在486 nm波長處測定其吸光度值，計(jì)算含量，結(jié)果見表1。

加樣回收試驗(yàn)結(jié)果表明，平均回收率為98.17%，RSD為1.02%，表明多糖回收率符合要求。

2.7 半夏膨化前后多糖含量測定 分別取半夏供試品1.0 g，各3份，精密稱定，按“2.4”項(xiàng)下方法制備供試品和對照品，在486 nm波長處測定其吸光度值，計(jì)算半夏生品及膨化品的多糖含量，結(jié)果得出半夏生品中多糖含量為12.88%，膨化半夏中多糖含量為14.55%，由此可知，膨化半夏的多糖含量高于半夏飲片。

表1 加樣回收試驗(yàn)

3 討論

該試驗(yàn)采用苯酚-硫酸法測定多糖含量，并對各影響因素做了考察，確定了最佳提取條件，試驗(yàn)方法簡便、快捷，測定結(jié)果準(zhǔn)確，可用于半夏多糖含量的分析。

中藥材有效成分的提取工藝關(guān)系著中藥材的利用率及提取物的藥理活性，半夏的藥用部位為塊莖，質(zhì)地致密堅(jiān)硬，其有效成分不易提取。半夏膨化炮制后，成為空心網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的膨松體，硬度顯著降低，同時(shí)內(nèi)部結(jié)構(gòu)改變，淀粉粒糊化，細(xì)胞壁破裂，利于有效成分的浸出。半夏多糖具有抗腫瘤的作用［6］，膨化半夏多糖含量明顯高于半夏生品，表明膨化技術(shù)可以增加半夏多糖的含量。半夏為有毒中藥，膨化后其他成分如何變化，還有待進(jìn)一步研究。

［1］賈淑珍，郝冉.膨化技術(shù)在中藥材加工領(lǐng)域的應(yīng)用［J］.農(nóng)產(chǎn)品加工，2012(5):75-76.

［2］張英，張翠英，王盛民.紅參膨化炮制實(shí)驗(yàn)研究［J］.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2010，21(7):1724-1725.

［3］郭海霞，蔡正洪，范亞飛.擠壓膨化炮制對何首烏中蒽醌含量的影響［J］.中藥材，2008，31(11):1633-1634.

［4］趙永娟，王蕾，侯林，等.半夏多糖抗腫瘤作用研究［J］.中國藥理學(xué)通報(bào)，2006，22(6):368-371.

［5］劉玲，周立，師健友，等.黔半夏多糖含量測定［J］.貴陽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2009，31(5):81-82.

［6］張躍進(jìn)，孟祥海，許玲.不同炮制方法對半夏化學(xué)成分含量的影響研究［J］.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2008，14(12):22-23.