水貂細(xì)菌病的病原分離·鑒定及藥敏試驗(yàn)

徐云飛，王贈(zèng)超，鄒玲，李文立，任慧英(青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，山東青島266109)

山東省地處沿海地區(qū)，其得天獨(dú)厚的地理和氣候條件，加上發(fā)達(dá)的畜禽養(yǎng)殖業(yè)和豐富的海洋漁業(yè)資源，為水貂養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展提供了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)，使山東省成為全國(guó)水貂養(yǎng)殖的大省。據(jù)海關(guān)貿(mào)易總署統(tǒng)計(jì)，全國(guó)平均年產(chǎn)水貂皮1 200萬(wàn)張，其中山東省占2/3。目前，在山東省沿海地區(qū)和家禽養(yǎng)殖大縣，水貂養(yǎng)殖業(yè)已經(jīng)成為農(nóng)民增收的主要手段，成為當(dāng)?shù)亟?jīng)濟(jì)發(fā)展和農(nóng)民致富的支柱產(chǎn)業(yè)［1－2］。然而，由于養(yǎng)殖密度過(guò)大、疾病防疫意識(shí)淡薄等原因，水貂傳染病不斷發(fā)生，給水貂養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。筆者對(duì)某水貂場(chǎng)的病死水貂進(jìn)行病原的分離、鑒定及藥敏試驗(yàn)，以期避免抗菌藥的濫用，減少耐藥菌株的產(chǎn)生，為臨床治療提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 病料 病料來(lái)自山東威海某水貂養(yǎng)殖場(chǎng)病死水貂。

1.2 試劑與儀器 普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基，均購(gòu)自北京路橋技術(shù)有限責(zé)任公司;微量糖發(fā)酵管和藥敏紙片，均購(gòu)自杭州天和微生物試劑有限公司。

1.3 細(xì)菌的分離培養(yǎng) 無(wú)菌條件下，取病死水貂心臟、肝臟、肺臟等病料劃線接種于普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和麥康凱培養(yǎng)基上，37℃下培養(yǎng)24 h。挑取單個(gè)菌落進(jìn)行革蘭氏染色后，置于顯微鏡下進(jìn)行鏡檢。

1.4 細(xì)菌的生化鑒定 挑取單菌落分別接種于微量糖發(fā)酵管、三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基，對(duì)疑似腸桿菌科的細(xì)菌，按照常規(guī)方法進(jìn)行吲哚、MR、VP及檸檬酸鹽利用試驗(yàn)(簡(jiǎn)稱(chēng)IMViC試驗(yàn))［3］。

1.5 藥敏試驗(yàn) 將純化的菌落接種于普通肉湯，37℃搖床培養(yǎng)12 h。將新鮮菌液用滅菌生理鹽水稀釋至濃度108CFU/ml，用滅菌的棉棒涂布于普通瓊脂平板。然后，將18種藥敏紙片貼在培養(yǎng)基的表面，37℃培養(yǎng)18 h后觀察結(jié)果［4］，按照 CLSL 標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行藥物敏感性評(píng)價(jià)［5］。

表1 各分離菌株的生化試驗(yàn)結(jié)果及檢出率

2 結(jié)果與分析

2.1 細(xì)菌分離培養(yǎng)及鑒定結(jié)果 由表1可知，在病死水貂中共分離到7種細(xì)菌，共17株，菌落形態(tài)、染色特性及生化試驗(yàn)表明全部為革蘭氏陰性菌，隸屬腸桿菌科。其中，分離率最高的細(xì)菌為大腸桿菌(59%)，其次為哈夫尼菌(12%);另外，還分離到耶爾森菌、成團(tuán)泛菌、志賀氏菌、沙門(mén)氏菌和克雷伯菌，占分離菌株的29%。在麥康凱培養(yǎng)基上，大腸桿菌和克雷伯菌形成紅色菌落，但克雷伯菌的菌落粘稠，用接種環(huán)可挑起絲狀物，另外也不能利用蔗糖。哈夫尼菌、耶爾森、成團(tuán)泛菌、志賀氏菌和沙門(mén)氏菌均不能利用乳糖，所以在麥康凱培養(yǎng)基上均形成無(wú)色菌落，在三糖鐵培養(yǎng)基上的表現(xiàn)及IMViC試驗(yàn)結(jié)果均存在差異。

2.2 藥敏試驗(yàn)結(jié)果 從表2可以看出，70%以上的菌株對(duì)頭孢派酮、頭孢西叮、頭孢曲松、頭孢他啶、頭孢吡肟、左氧沙星和磷霉素敏感，23%以上的菌株對(duì)頭孢哌酮、阿米卡星的敏感性處于中介，30%以上的菌株對(duì)頭孢噻吩、頭孢呋辛、環(huán)丙沙星、諾氟沙星、鏈霉素、氯霉素、四環(huán)素和氨芐西林耐藥。所有分離菌株對(duì)頭孢西叮、頭孢他啶和頭孢吡肟均敏感。

表2 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

目前臨床上治療水貂細(xì)菌性疾病的藥物有很多，但由于養(yǎng)殖戶(hù)長(zhǎng)期濫用抗生素，使細(xì)菌的耐藥性不斷增加，造成水貂患病后缺乏有效藥物，甚至無(wú)藥可用。該試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)從病死水貂體內(nèi)分離出的7種細(xì)菌對(duì)15種抗生素均產(chǎn)生了一定程度的耐藥性。同時(shí)試驗(yàn)結(jié)果也表明，同一種細(xì)菌不同菌株的耐藥性也不相同。這與細(xì)菌表達(dá)的多樣性有關(guān)［6］。因此，同一種細(xì)菌引發(fā)的感染用相同的藥物治療，治療效果可能會(huì)差別很大，一旦出現(xiàn)治療無(wú)效的情況應(yīng)立即進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，篩選敏感藥物，加以治療。但是，由于細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生與抗生素的長(zhǎng)期大劑量使用有關(guān)，在臨床治療中應(yīng)選擇比較敏感的藥物聯(lián)合或交替使用，以減少單個(gè)藥物的使用劑量和使用時(shí)間，從而減緩耐藥菌株的產(chǎn)生［7］。

水貂細(xì)菌病的發(fā)生是由多種病原引起的。對(duì)某水貂養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行了連續(xù)檢測(cè)，共分離到7種細(xì)菌，均為腸桿菌科細(xì)菌，說(shuō)明腸桿菌科的細(xì)菌是目前水貂細(xì)菌病發(fā)生的主要病原。腸桿菌科細(xì)菌中，沙門(mén)氏菌、志賀氏菌、克雷伯菌、大腸桿菌和耶爾森菌對(duì)人和動(dòng)物具有廣泛的致病性［8］，具有重要的公共衛(wèi)生意義，應(yīng)引起足夠重視。哈夫尼菌和成團(tuán)泛菌大多為條件致病菌，水貂患此類(lèi)細(xì)菌病與水貂的抵抗力降低有直接關(guān)系［9－10］。在氣候突變、管理不當(dāng)時(shí)，水貂抵抗力下降，環(huán)境中和體內(nèi)的條件性致病菌容易入侵機(jī)體，引起疾病的發(fā)生，但一般不會(huì)造成大面積流行。

［1］王桂芝，秦孜娟，張瑋.山東省毛皮動(dòng)物養(yǎng)殖業(yè)現(xiàn)狀存在的問(wèn)題及對(duì)策［J］.山東畜牧獸醫(yī)，2014，35(8):21 －22.

［2］馬利.水貂養(yǎng)殖商機(jī)巨大［J］.吉林畜牧獸醫(yī)，2002(5):27 －28.

［3］胡桂學(xué).獸醫(yī)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教程［M］.北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2006:47－60.

［4］鄒玲.水貂大腸桿菌病的診斷［J］.中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2009，36(5):147－148.

［5］孫長(zhǎng)貴，李敏，孫自鏞，等，譯.抗菌藥物敏感性試驗(yàn)執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn);第二十二版資料增刊［J］.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012，32(3):44 －49.

［6］曹榮峰，王繼芳.水貂細(xì)菌病的藥敏試驗(yàn)和防治［J］.中國(guó)動(dòng)物保健，2008(12):61－63.

［7］王效田，孔祥峰，夏明龍，等.南京郊區(qū)奶牛乳房炎病原菌分離鑒定及藥敏試驗(yàn)［J］.畜牧與獸醫(yī)，2004，36(11):6 －8.

［8］陸承平.獸醫(yī)微生物學(xué)［M］.4版.北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2007:97－121.

［9］趙嶺樂(lè).水貂克雷伯氏菌病的綜合診斷與治療技術(shù)［J］.特產(chǎn)研究，2003，25(3):36 －37.

［10］劉德福，王廣森.水貂巴氏桿菌與沙門(mén)氏桿菌混合感染的診治［J］.特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)植物，2003(4):44－45.