糙米多酚3 種純化方法的比較

羅舜菁，張玫美，龔二生，劉成梅*，耿 勤，曾子聰，馬 燁

（南昌大學(xué) 食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西 南昌 330047）

糙米多酚3 種純化方法的比較

羅舜菁，張玫美，龔二生，劉成梅*，耿 勤，曾子聰，馬 燁

（南昌大學(xué) 食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西 南昌 330047）

分別用液液萃取、大孔樹(shù)脂、固相萃取法純化糙米多酚粗提物，對(duì)純化物的多酚回收率和抗氧化性進(jìn)行研究，并通過(guò)高效液相色譜分析3 種純化方法總酚酸和其中9 種酚酸的回收率，3 種純化方法多酚回收率分別為20.51%、53.45%、87.87%，總酚酸回收率分別為56.84%、67.35%、68.99%，多酚純度由粗提物的19.23%分別提高到40.72%、46.84%和78.71%。多酚含量與1,1-二苯基-2-苦肼基自由基清除能力、鐵還原能力極顯著相關(guān)（P＜0.01）。除品種因素外，純化方法是導(dǎo)致提取物中非酚酸多酚物質(zhì)回收率差異大，進(jìn)而引起多酚含量差異顯著的另一重要原因；純化方法對(duì)酚酸回收率有顯著影響，應(yīng)依據(jù)純化目標(biāo)物回收率來(lái)進(jìn)行純化方法的篩選，而非以傳統(tǒng)的總多酚或總酚酸回收率判斷具體某種酚酸的最適純化方法。

糙米；多酚；純化；高效液相色譜法

多酚具有抗氧化、抗病毒、抗腫瘤、保護(hù)心血管、抑菌等生物功能[1]，Massaretto等[2]研究發(fā)現(xiàn)糙米多酚能夠抑制血管緊張素轉(zhuǎn)化酶，Phetpornpaisan等[3]發(fā)現(xiàn)米糠提取物能夠抑制基質(zhì)金屬蛋白酶以控制皮膚老化和乳腺癌的轉(zhuǎn)移。

多酚純化是多酚物質(zhì)分離、鑒定和應(yīng)用中非常重要的一個(gè)步驟，目前還沒(méi)有一個(gè)簡(jiǎn)單化和標(biāo)準(zhǔn)化的純化方法。最常用的多酚純化方法有液液萃取法、大孔樹(shù)脂法和固相萃取法[4]。液液萃取法常用的溶劑有乙酸乙酯、乙醚和石油醚，乙酸乙酯萃取的提取物具有極好的抗氧化性[5]。對(duì)于多酚而言，大孔樹(shù)脂法的最適用樹(shù)脂和洗脫劑并不唯一，實(shí)驗(yàn)篩選出的最適樹(shù)脂分別為D101、AB-8、NKA-9和NKA-Ⅱ[6-11]；而最適洗脫液分別為體積分?jǐn)?shù)不同的乙醇溶液和丙酮溶液[7,11-13]。固相萃取法是基于范德華力、氫鍵或者偶極相互作用對(duì)多酚吸附-解吸來(lái)進(jìn)行純化的，在多酚純化中常使用C18作為吸附劑[14]，Tian等[15]用C18柱純化糙米多酚，分離純化得到11 種多酚。

實(shí)驗(yàn)條件和樣品的不同給方法之間的比較造成困難，目前對(duì)同一樣品不同純化方法的比較研究較少，且不以糙米為研究對(duì)象，未涉及對(duì)其中單一酚酸的純化效果比較。本研究比較了液液萃取法、大孔樹(shù)脂法和固相萃取法對(duì)糙米多酚、總酚酸和其中9 種酚酸的回收率，旨在為明確目標(biāo)物的最適純化方法篩選提供理論依據(jù)和技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

稻谷品種為松-237，購(gòu)自江西南昌，收獲年份為2014年10月，于水分含量小于14%條件下進(jìn)行稻谷的儲(chǔ)藏，經(jīng)2014年12月壟谷、去除雜物獲得糙米于4 ℃避光保存。

綠原酸、咖啡酸、2,4-二羥基苯甲酸、丁香酸標(biāo)準(zhǔn)品、冰乙酸（色譜純） 上海阿拉丁生化科技股份有限公司；對(duì)羥基苯甲酸、對(duì)香豆酸、阿魏酸、香草酸、芥子酸、1,1-苯基-2-苦基肼基（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）、2,4,6-三吡啶基三嗪（2,4,6-tris(2-pyridyl)-s-triazine，TPTZ）標(biāo)準(zhǔn)品 美國(guó)Sigma-Aidrich公司；福林酚 上海藍(lán)季科技發(fā)展有限公司；大孔吸附樹(shù)脂（NKA-9、AB-8、S-8、NKA-Ⅱ）南開(kāi)大學(xué)化工廠；D101大孔吸附樹(shù)脂 安徽三星樹(shù)脂科技有限公司。其余試劑均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

AK/QC-058飛鴿牌離心機(jī) 上海安亭科學(xué)儀器廠；T6新世紀(jì)紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì) 北京普析通用儀器有限公司；FBC1001超純水機(jī) 青島富勒姆科技有限公司；RE-52C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海亞榮生化儀器廠；AR224CN電子天平 奧豪斯儀器（上海）有限公司；SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵 山東省菏澤市祥龍電子科技有限公司；SHZ-82數(shù)顯恒溫振蕩器 江西省金壇市榮化儀器公司；QL-866漩渦混合器 海門市其林貝爾儀器制造有限公司；Sep-Pak Vac 20cc（5 g）C18固相萃取柱 美國(guó)Waters公司；1260 Infinity高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）儀美國(guó)安捷倫公司。

1.3 方法

1.3.1 糙米多酚的提取

糙米粉碎后過(guò)60 目篩得糙米粉，糙米粉與預(yù)冷80%丙酮溶液按1∶4（g/mL）混合浸提24 h。抽濾得濾液，殘?jiān)^續(xù)用相同方法再提取1 次。合并濾液，在45 ℃條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至無(wú)丙酮味，定容至一定體積后于－20 ℃貯存?zhèn)溆?，此為糙米多酚粗提液?/p>

1.3.2 液液萃取純化

將5 mL糙米多酚粗提液、20 mL乙酸乙酯依次加入50 mL離心管中，振搖均勻，3 500 r/min條件下離心10 min，收集上層乙酸乙酯部分，殘液繼續(xù)用相同方法再提取2 次，合并3 次提取液，45 ℃條件下減壓旋 干后加少量去離子水將其進(jìn)行超聲溶解，轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，定容至10 mL，得液液萃取純化液。

1.3.3 大孔樹(shù)脂純化[16]

1.3.3.1 大孔樹(shù)脂的篩選

準(zhǔn)確稱取預(yù)處理后的5 種型號(hào)樹(shù)脂（NKA-9、AB-8、S-8、D101、NKA-Ⅱ）各1.0 g分別置于250 mL錐形瓶中，各加入50 mL糙米多酚粗提液，封口后置于25 ℃水浴搖床振蕩24 h后測(cè)定此時(shí)溶液 中糙米多酚總質(zhì)量濃度，計(jì)算吸附量。將吸附后樹(shù)脂過(guò)濾，再各用50 mL 95%乙醇溶液解吸吸附后樹(shù)脂，振蕩解吸24 h得解吸液，解吸液旋干后用去離子水定容至10 mL，測(cè)定解吸液中多酚含量，計(jì)算解吸量和解吸率。通過(guò)吸附量和解吸率篩選出適合純化糙米多酚粗提液的樹(shù)脂。

式（1）～（3）中：ρ0為吸附前糙米多酚粗提液多酚質(zhì)量濃度/（mg/mL）；ρ1為吸附后糙米多酚粗提液中剩余多酚質(zhì)量濃度/（mg/mL）；V1為糙米多酚粗提液體積/mL；m為樹(shù)脂干質(zhì)量/g；ρ2為解吸液多酚質(zhì)量濃度/（mg/mL）；V2為解吸液體積/mL。

1.3.3.2 靜態(tài)吸附動(dòng)力學(xué)特性測(cè)定

準(zhǔn)確稱取1 g樹(shù)脂，置于250 mL錐形瓶中，樹(shù)脂型號(hào)由1.3.3.1節(jié)實(shí)驗(yàn)確定，并向其加入35 mL質(zhì)量濃度為0.47 mg/mL的糙米多酚粗提液，25 ℃水浴搖床上振蕩吸附24 h，繪制靜態(tài)吸附動(dòng)力學(xué)曲線。

1.3.3.3 洗脫液極性對(duì)樹(shù)脂解吸性能的影響

按1.3.3.1節(jié)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行吸附，吸附完全后，用選定的洗脫液進(jìn)行洗脫。收集解吸液，測(cè)定其多酚含量，計(jì)算解吸率，考察洗脫液極性對(duì)樹(shù)脂解吸性能的影響，其中最適方法得到的為大孔樹(shù)脂純化液。

1.3.4 固相萃取純化

C18小柱用20 mL甲醇沖洗2 次進(jìn)行活化，再用20 mL超純水沖洗2 次，此為固相萃取柱的預(yù)處理。將不同體積（5、10 mL）的樣液加入預(yù)處理過(guò)的固相萃取柱，然后加入40 mL去離子水除去未吸附雜質(zhì)，最后用20 mL乙醇洗脫3 次，合并3 次解吸液在45 ℃條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干后用去離子水定容至10 mL得固相萃取純化液。

1.3.5 多酚回收率及純度的測(cè)定[17]

于10 mL比色管中加入1 mL去離子水和250 μL純化液或不同稀釋梯度的阿魏酸溶液，加入250 μL Folin-Ciocalteu福林酚試劑反應(yīng)6 min。然后加入2.5 mL 7%的碳酸鈉溶液終止反應(yīng)，加入去離子水至刻度后混合均勻。于室溫條件下避光放置90 min后，在波長(zhǎng)760 nm處用紫外分光光度計(jì)測(cè)定吸光度。以阿魏酸含量與吸光度線性關(guān)系作為標(biāo)準(zhǔn)曲線，多酚含量以阿魏酸的質(zhì)量表示。

分別按式（4）、（5）計(jì)算多酚回收率以及多酚純度。

式中：ρ1為該純化方法對(duì)應(yīng)的純化液多酚質(zhì)量濃度/（mg/mL）；ρ0為糙米多酚粗提液多酚質(zhì)量濃度/（mg/mL）；V1為該純化方法對(duì)應(yīng)得到的純化液液體積/mL；V0為純化時(shí)所取糙米多酚粗提液體積/mL。

1.3.6 抗氧化性測(cè)定

1.3.6.1 DPPH法測(cè)定糙米多酚的體外抗氧化活性[18]

準(zhǔn)確稱取DPPH 7.9 mg，用95%乙醇溶液溶解，定容于100 mL容量瓶中，得2.0×10－4mol/L的溶液，避光備用。于比色管中加入3 mL DPPH溶液和1 mL純化液或1 mL水或1 mL不同稀釋梯度的阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，充分搖勻溶液，在背光處?kù)o置30 min，用1 mL去離子水和3 mL 95%乙醇溶液調(diào)零，于517 nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度。多酚純化物對(duì)DPPH自由基清除率按式（6）計(jì)算。

式中：Ai為3 mL DPPH溶液＋1 mL純化液或不同稀釋梯度的阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度；A0為3 mL DPPH溶液＋1 mL去離子水的吸光度。

以阿魏酸含量與DPPH自由基清除活性線性關(guān)系作為標(biāo)準(zhǔn)曲線，純化液的DPPH自由基清除活性以阿魏酸的物質(zhì)的量來(lái)表示。

1.3.6.2 FRAP法測(cè)定糙米多酚的鐵還原力[19]

將NaAc-HAc緩沖液（pH 3.6，300 mmol/L）、10 mmol/L TPTZ（40 mmol/L HCl溶液配制）和12.024 mmol/L FeCl3溶液按體積比25∶2.5∶2.5配制而成FRAP試劑。取0.5 mL純化液或不同稀釋梯度的阿魏酸，加入2 mL FRAP試劑，混勻后在37 ℃水浴條件下反應(yīng)10 min，測(cè)定593 nm波長(zhǎng)處吸光度，用去離子水調(diào)零，以阿魏酸含量與吸光度線性關(guān)系作為標(biāo)準(zhǔn)曲線，樣品多酚的鐵還原力以阿魏酸的物質(zhì)的量來(lái)表示。

1.3.7 HPLC檢測(cè)分析

1.3.7.1 酚酸標(biāo)品標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

用50%甲醇分別配制15、30、75、120、150 μg/mL 9 種酚酸標(biāo)準(zhǔn)品（對(duì)羥基苯甲酸、香草酸、咖啡酸、2,4-二羥基苯甲酸、丁香酸、對(duì)香豆酸、阿魏酸、芥子酸、綠原酸），以標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.7.2 多酚樣品的HPLC檢測(cè)分析

將糙米多酚粗提液和最優(yōu)條件所得糙米多酚純化液于45 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，用5 mL 50%甲醇溶液將其溶解備用。

色譜條件：液相色譜柱：C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：流動(dòng)相A（0.1%乙酸）、流動(dòng)相B（乙腈）；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)：280 nm；流動(dòng)相流速：0.8 mL/min；進(jìn)樣量：20 μL；柱溫：30 ℃；線性洗脫程序如表1所示。

表1 HPLC 105 min線性洗脫程序Table1 HPLC 105-min linear elution program

2 結(jié)果與分析

2.1 不同純化方法的優(yōu)化

2.1.1 液液萃取純化糙米多酚

圖1 提取次數(shù)對(duì)糙米多酚回收率的影響Fig.1 Effect of extraction number on the extraction effi ciency of phenolics from brown rice

有機(jī)溶劑萃取法主要用于分離可溶 性酚類化合物。付曉燕等[20]得出氯仿、乙酸乙酯和正丁醇這3 種溶液中，乙酸乙酯是分離燕麥多酚最有效的試劑，其總酚回收率能達(dá)到60%～70%，Krygier等[21]也用乙酸乙酯對(duì)谷物中的多酚進(jìn)行純化，所以本實(shí)驗(yàn)用乙酸乙酯進(jìn)行多酚粗提液的純化，由圖1可知，在用乙酸乙酯提取3 次后多酚的回收率基本穩(wěn)定，為21.01%，所以采用乙酸乙酯提取3 次對(duì)糙米多酚粗提物進(jìn)行純化。

2.1.2 大孔樹(shù)脂靜態(tài)純化糙米多酚

2.1.2.1 大孔樹(shù)脂的篩選從表2可以看出，5種樹(shù)脂中，吸附量由大到小依次為：S-8＞NKA-Ⅱ＞NKA-9＞D101＞AB-8。但吸附量最高的S-8樹(shù)脂其解吸率是5種樹(shù)脂中最低的，NKA-Ⅱ的解吸率最高，吸附率也較高。綜合考慮吸附及解吸兩方面因素，選擇NKA-Ⅱ、D101樹(shù)脂進(jìn)行靜態(tài)動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)，并篩選出合適的 解吸溶劑。

表2 5 種樹(shù)脂對(duì)糙米多酚的平衡吸附性質(zhì)Table2 Equilibrium adsorbability of phenolics from brown rice by fi ve resins

2.1.2.2 D101、NKA-Ⅱ的靜態(tài)吸附動(dòng)力學(xué)特性由圖2可看出，D101對(duì)多酚的吸附為快速平衡型，吸附起始階段吸附量較大，0.5 h時(shí)已經(jīng)能達(dá)到23.21%，但是其吸附不穩(wěn)定，12 h后其吸附率降為27.72%；NKA-Ⅱ雖然達(dá)到吸附平衡的時(shí)間較長(zhǎng)，但最終吸附率較大，最大吸附率能達(dá)到53.44%，所以選用NKA-Ⅱ作為大孔吸附樹(shù)脂。

圖2 D101、NKA-Ⅱ的靜態(tài)吸附動(dòng)力學(xué)曲線Fig.2 Static absorption kinetic curves of D101 and NKA-Ⅱ

2.1.2.3 洗脫液極性對(duì)樹(shù)脂解吸性能的影響

表3 NKA-Ⅱ的靜態(tài)解吸實(shí)驗(yàn)（n=3）Table3 Static desorption capacity of NKA-Ⅱ (n=3) %

由表3可看出，解吸率隨解吸溶劑極性變化而變化，其中70%乙醇溶液解吸液最高。

2.1.3 固相萃取純化糙米多酚

固相萃取法是利用固體吸附劑吸附液體樣品中的目標(biāo)物，使目標(biāo)物與樣品的基體和干擾化合物分離，然后再用洗脫液洗脫，達(dá)到分離和富集目標(biāo)物的目的[22]。由圖3可知，5 mL樣液比10 mL樣液上樣解吸后所得的總回收率更高，所以選用5 mL的上樣量。洗脫2 次與洗脫3 次回收率無(wú)明顯變化，所以采用洗脫2 次進(jìn)行糙米多酚粗提物的純化。

圖3 洗脫次數(shù)對(duì)糙米多酚回收率的影響Fig.3 Effect of elution number on the extraction effi ciency of phenolics from brown rice

2.2 不同純化方法的比較

2.2.1 不同純化方法對(duì)多酚的回收率、抗氧化性比較

液液萃取、大孔樹(shù)脂和固相萃取純化其多酚回收率與抗氧化性的測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 3種純化方法的多酚回收率、抗氧化性、多酚純度比較Table4 Phenolics yield, antioxidant activity and polyphenols purity by three purifi cation methods

表4表明，不同純化方法其多酚回收率差異很大，液液萃取法回收率最小為20.51%，大孔樹(shù)脂法53.45%，固相萃取法回收率最大為87.87%，是最佳純化方法。乙酸乙酯純化法多酚回收率最小，可能是由于乙酸乙酯是液液萃取，水溶性多酚由水相轉(zhuǎn)移至有機(jī)相的量有限，所以導(dǎo)致其對(duì)多酚的回收率并不高。多酚純度經(jīng)過(guò)乙酸乙酯、大孔樹(shù)脂和固相萃取純化后由粗提物的19.23%分別提高到40.72%、46.84%和78.71%。

表5 各純化物的多酚含量與抗氧化能力之間的線性相關(guān)分析Table5 Linear correlation analysis between phenolics extraction yield and antioxidant activity

從表5可以看出，多酚含量與DPPH自由基清除能力、鐵還原力之間顯著相關(guān)（P＜0.01），說(shuō)明糙米中主要抗氧化物質(zhì)為多酚。

2.2.2 不同純化方法對(duì)糙米總酚酸的回收率比較

圖4 糙米多酚及其純化物的HPLC圖Fig.4 HPLC of crude and purifi ed phenolics from brown rice

圖4為不同純化方法的純化物的HPLC圖，依據(jù)各酚酸峰面積對(duì)其酚酸組分含量進(jìn)行分析計(jì)算，得到各純化物的總酚酸回收率（表6）。

表6 各純化物的多酚、總酚酸回收率比較Table6 Extraction yields of phenolics and phenolic acids by three purifi cation methods%

比較表6中乙酸乙酯、大孔樹(shù)脂和固相萃取3 種純化方法多酚回收率，發(fā)現(xiàn)差異很大，分別為20.51%、53.45%、87.87%，但是總酚酸回收率相近，分別為56.84%、67.35%、68.99%。這說(shuō)明3 種純化方法對(duì)糙米多酚粗提物中非酚酸多酚的提取效率相差很大，從而導(dǎo)致了多酚回收率的差異。

根據(jù)HPLC條件，圖4中45～75 min的大量未確認(rèn)物質(zhì)，可能是非酚酸物質(zhì)。3 種純化方法在這段的出峰面積各不相同、差異較大，其出峰面積大小與多酚回收率的數(shù)據(jù)比較，趨勢(shì)一致。糙米多酚粗提物中非酚酸物質(zhì)主要由黃酮、黃酮糖苷等組成，有待后續(xù)采用液質(zhì)聯(lián)用對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步的分析鑒定。

文獻(xiàn)[23]對(duì)2010年前發(fā)表的所有糙米多酚含量的數(shù)據(jù)進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)，不同種類糙米多酚的含量范圍為24.0～252.4 mg沒(méi)食子酸當(dāng)量/100 g谷粉，其中HPLC測(cè)得的12 種酚酸的含量為（3.74±2.26）mg/100 g谷粉，總類黃酮含量為30.0～293.0 mg兒茶素當(dāng)量/100 g谷粉，花青素含量為2.00～3.26 mg矢車菊素當(dāng)量/100 g谷粉。該文獻(xiàn)分析認(rèn)為造成差異的原因是糙米品種的不同，但文獻(xiàn)未說(shuō)明不同數(shù)據(jù)的純化方法。

本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)說(shuō)明針對(duì)同種谷物，純化方法不同將導(dǎo)致其提取物中非酚酸多酚物質(zhì)回收率差異很大，說(shuō)明文獻(xiàn)報(bào)道的不同種類全谷物總類黃酮含量和花青素含量的差異，純化方法也可能是造成差異的原因之一。

2.2.3 不同純化方法對(duì)糙米各酚酸的回收率比較

圖5 糙米各酚酸的回收率Fig.5 Recoveries of individual phenolic acids from brown rice

根據(jù)純化物各酚酸的HPLC峰面積比較了3 種純化物中9 種酚酸的回收率，結(jié)果見(jiàn)圖5。分析數(shù)據(jù)可知，使用不同純化方法酚酸回收率往往有顯著的差異（P＜0.05），根據(jù)總多酚或者總酚酸回收率高低來(lái)選擇純化方式，可能得到的是不合適的純化前處理方法。

例如主要多酚物質(zhì)阿魏酸在使用液液萃取、大孔樹(shù)脂和固相萃取3 種純化方法后多酚回收率分別為93.54%、56.74%和40.35%，具有顯著差異性（P＜0.05），對(duì)阿魏酸最適合的純化方法應(yīng)該為總多酚回收率最低的液液萃取法。每種酚酸都有最適純化方法，應(yīng)該依據(jù)酚酸的回收率大小來(lái)選擇最適純化方法。表7為各酚酸的最適純化方法及相應(yīng)回收率。

表7 各酚酸的適宜純化方法及相應(yīng)回收率Table7 Comparison of purifi cation and recovery of individual phenolic acids by two different purifi cation methods%

3 結(jié) 論

3 種純化方法的多酚回收率和抗氧化性有顯著差異（P＜0.05），總酚酸回收率則相近。其中液液萃取、大孔樹(shù)脂和固相萃取3 種純化方法的多酚回收率分別為20.51%、53.45%、87.87%，且多酚含量與DPPH自由基清除能力、鐵還原能力之間顯著相關(guān)（P＜0.01），說(shuō)明粳米糙米中主要抗氧化物質(zhì)為多酚；而3 種方法的總酚酸回收率相近，分別為56.84%、67.35%、68.99%。

大量文獻(xiàn)針對(duì)不同品種糙米多酚含量進(jìn)行了分析比較，目前國(guó)內(nèi)外對(duì)造成不同種類糙米多酚含量差異的原因，基本歸結(jié)為糙米品種的不同，針對(duì)純化方法導(dǎo)致糙米多酚含量差異的研究未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)說(shuō)明針對(duì)同種谷物，純化方法不同往往導(dǎo)致其提取物中非酚酸多酚物質(zhì)回收率差異較大，是造成多酚含量差異的重要原因之一。

雖然3 種提取方法總酚酸回收率相近，但是通過(guò)比較3 種純化物中9 種酚酸的回收率數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)不同純化方法酚酸回收率往往有顯著的差異（P＜0.05）。在針對(duì)某種具體的酚酸種類進(jìn)行最適純化方法選擇時(shí)，根據(jù)總多酚或者總酚酸回收率高低來(lái)選擇純化方式，可能得到的是不合適的純化前處理方法。每種酚酸都有相應(yīng)的最適純化方法，依據(jù)純化的目標(biāo)物回收率來(lái)進(jìn)行純化方法的篩選，能夠大大減少目標(biāo)物的損失。

[1] LIU R H. Whole grain phytochemicals and health[J]. Journal of Cereal Science, 2007, 46(3): 207-219.

[2] MASSARETTO I L, ALVES M F M, de MIRA N V M, et al. Phenolic compounds in raw and cooked rice (Oryza sativa L.) and their inhibitory effect on the activity of angiotensin Ⅰ-converting enzyme[J]. Journal of Cereal Science, 2011, 54(2): 236-240.

[3] PHETPORNPAISAN P, TIPPAYAWAT P, JAY M, et al. A local Thai cultivar glutinous black rice bran: a source of functional compounds in immunomodulation, cell viability and collagen synthesis, and matrix metalloproteinase-2 and-9 inhibition[J]. Journal of Functional Foods, 2014, 7: 650-661.

[4] DAHER S, Gü LA? AR F O. Analysis of phenolic and other aromatic compounds in honeys by solid-phase microextraction followed by gas chromatography?mass spectrometry[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2008, 56(14): 5775-5780.

[5] NACZK M, SHAHIDI F. Extraction and analysis of phenolics in food[J]. Journal of Chromatography A, 2004, 1054(1): 95-111.

[6] 吳國(guó)宏, 熊何健. 荔枝葉中多酚類物質(zhì)的提取制備[J]. 食品科學(xué), 2007, 28(6): 131-135.

[7] 蒲博, 李兵, 楊舒慧, 等. 石榴皮多酚分離純化及對(duì)脂肪酸合成酶抑制作用的研究[J]. 食品科學(xué), 2014, 35(17): 99-103. doi: 10.7506/ spkx1002-6630-201417020.

[8] 劉榮, 何嬌, 王振宇. 大孔樹(shù)脂對(duì)樟子松樹(shù)皮多酚的純化工藝的研究[J]. 食品工業(yè)科技, 2013, 34(11): 201-205.

[9] 侯方麗, 張名位, 蘇東曉, 等. 黑米皮花色苷的大孔樹(shù)脂吸附純化研究[J]. 華南師范大學(xué)學(xué)報(bào): 自然科學(xué)版, 2009(1): 100-104.

[10] 王雅. 沙棗果實(shí)可食部分活性物質(zhì)提取及抗氧化, 抗腫瘤作用研究[D].楊凌: 西北農(nóng)林科技大學(xué), 2012.

[11] 張名位, 郭寶江, 池建偉, 等. 黑米皮抗氧化活性物質(zhì)的提取與分離工藝研究[J]. 農(nóng)業(yè)工程學(xué)報(bào), 2005, 21(6): 135-139.

[12] 蘇東曉. 荔枝果肉多酚的分離鑒定及其調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝作用機(jī)制[D].武漢: 華中農(nóng)業(yè)大學(xué), 2014.

[13] 王振宇, 劉春平. 大孔樹(shù)脂AB-8對(duì)蘋果多酚的分離純化[J]. 食品研究與開(kāi)發(fā), 2009, 30(4): 21-24.

[14] LIBERATORE L, PROCIDA G, D’ALESSANDRO N, et al. Solid-phase extraction and gas chromatographic analysis of phenolic compounds in virgin olive oil[J]. Food Chemistry, 2001, 73(1): 119-124.

[15] TIAN S, NAKAMURA K, CUI T, et al. High-performance liquid chromatographic determination of phenolic compounds in rice[J]. Journal of Chromatography A, 2005, 1063(1): 121-128.

[16] 劉清, 李虎虎, 姚惠源, 等. 大孔吸附樹(shù)脂分離富集大麥多酚的研究[J].食品科學(xué), 2008, 28(11): 98-102.

[17] SINGLETON V L, ORTHOFER R, LAMUELA-RAVENTOS R M. Analysis of total phenols and other oxidation substrates and antioxidants by means of Folin-Ciocalteu reagent[J]. Methods in Enzymology, 1999, 299(14): 152-178.

[18] SHIMADA K, FUJIKAWA K, YAHARA K, et al. Antioxidative properties of xanthan on the antioxidantion of soybean oil in cyclodextrin emulsion[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 1992, 40(6): 945-948.

[19] HUANG X, TU Z, JIANG Y, et al. Dynamic high pressure microfluidization-assisted extraction and antioxidant activities of lentinan[J]. International Journal of Biological Macromolecules, 2012, 51(5): 926-932.

[20] 付曉燕, 隋勇, 謝筆鈞, 等. 燕麥多酚純化、發(fā)芽燕麥不同組分的多酚分布及抗氧化活性[J]. 食品工業(yè)科技, 2014, 35(8): 83-87.

[21] KRYGIER K, SOSULSKI F, HOGGE L. Free, esterified, and insoluble-bound phenolic-acids.1. extraction and purification procedure[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 1982, 30(2): 330-334.

[22] 李存法, 何金環(huán). 固相萃取技術(shù)及其應(yīng)用[J]. 天中學(xué)刊, 2005, 20(5): 13-16.

[23] GOUFO P, TRINDADE H. Rice antioxidants: phenolic acids, fl avonoids, anthocyanins, proanthocyanidins, tocopherols, tocotrienols, γ-oryzanol, and phytic acid[J]. Food Science and Nutrition, 2014, 2(2): 75-104.

A Comparative Study of Three Purifi cation Methods for Phenolics from Brown Rice

LUO Shunjing, ZHANG Meimei, GONG Ersheng, LIU Chengmei*, GENG Qin, ZENG Zicong, MA Ye
(State Key Laboratory of Food Science and Technology, Nanchang University, Nanchang 330047, China)

The phenolics in brown rice were purified with liquid extraction, macroporous resin method and solid phase extraction method, respectively. The recovery of polyphenol and antioxidant activity were studied. The recoveries of total phenolic acids and nine individual compounds were analyzed by HPLC. The recoveries of polyphenols purifi ed with the above purifi cation methods were 20.51%, 53.45% and 87.87%, respectively, whereas the recoveries of total phenolic acids with the three purifi cation methods were 56.84%, 67.35% and 68.99%, respectively. The purity of polyphenols from brown rice was increased from 19.23% to 40.72%, 46.84% and 78.71%, respectively. Polyphenol content displayed significant correlations with 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging ability and ferric reducing ability of plasma (FRAP) (P ＜ 0.01). Except for the rice varieties, the purification methods resulted in a large difference in the phenolic content by infl uencing the recovery of non-phenolic acid polyphenols. The purifi cation methods had a signifi cant infl uence on the recovery of phenolic acids. Thus, the appropriate method should be chosen by recovery of the targets but not by the recovery of total polyphenols or total phenolic acids.

brown rice; polyphenol; purifi cation; high performance liquid chromatography (HPLC)

TS201.1

A

1002-6630（2015）20-0157-06

10.7506/spkx1002-6630-201520030

2015-06-01

江西省贛鄱英才555工程領(lǐng)軍人才項(xiàng)目（18000007）；南昌大學(xué)食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室目標(biāo)導(dǎo)向項(xiàng)目（SKLF-ZZA-201304）

羅舜菁（1969—），女，副教授，碩士，研究方向?yàn)楝F(xiàn)代高新技術(shù)與食品加工工程。E-mail：luoshunjing@aliyun.com

*通信作者：劉成梅（1963—），男，教授，博士，研究方向?yàn)槭澄镔Y源利用與開(kāi)發(fā)。E-mail：liuchengmei@aliyun.com