山東省規(guī)?；i場(chǎng)偽狂犬病感染流行率調(diào)查

馬慧玲 鄭 霞 陳 靜 王苗利 孫圣福 藺曉月 徐 鴻 徐 聰（山東省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心 山東 濟(jì)南 250022）

山東省規(guī)?；i場(chǎng)偽狂犬病感染流行率調(diào)查

馬慧玲 鄭 霞 陳 靜*王苗利 孫圣福 藺曉月 徐 鴻 徐 聰（山東省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心 山東 濟(jì)南 250022）

2013年3月，規(guī)模場(chǎng)在95%的置信度下，預(yù)期流行率為40%，可接受誤差9.5%的情況下對(duì)山東省規(guī)模豬場(chǎng)估計(jì)流行率采樣；場(chǎng)內(nèi)在95%的置信度下，預(yù)期流行率為10%，試驗(yàn)敏感性100%的情況下對(duì)場(chǎng)內(nèi)個(gè)體采用發(fā)現(xiàn)疫病策略采樣，通過(guò)對(duì)山東省14個(gè)地市102個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)的2835份血清樣品進(jìn)行野毒抗體檢測(cè)，結(jié)果顯示，在95%的置信度下，山東省內(nèi)豬場(chǎng)的血清野毒抗體陽(yáng)性率為65.59%，豬樣品血清野毒抗體陽(yáng)性率為44.10%；西北地區(qū)陽(yáng)性檢出率最高，為57.67%；中部地區(qū)最低，為31.83%，東部地區(qū)和西南地區(qū)分別為48.33% 和37.75%不等；種豬野毒感染陽(yáng)性率最高，為67.84%，其次是育肥豬和保育豬，分別為47.83% 和35.20%，初生仔豬最低，為21.05%；大型豬場(chǎng)為33.48%，中型豬場(chǎng)為44.89%，小型豬場(chǎng)為55.42%；春冬季節(jié)陽(yáng)性率較高，分別為53.54%和57.92%；夏秋季節(jié)相對(duì)較低，分別為33.25%和35.05%；結(jié)果表明，山東省內(nèi)普遍存在豬偽狂犬病毒感染狀況。

偽狂犬病(Pseudorabies,PR)是由皰疹病毒科、α-皰疹病毒亞科的偽狂犬病毒(Pseudorabiesvirus，PRV)引起的多種家畜和野生動(dòng)物共患的急性接觸性傳染病，其主要癥狀為發(fā)熱、奇癢(豬除外)、繁殖障礙、腦脊髓炎等[1]。豬是偽狂犬病的主要傳染源和自然貯存宿主[2]，感染仔豬主要表現(xiàn)神經(jīng)癥狀，成年豬主要為流產(chǎn)、死胎等繁殖障礙和呼吸道癥狀[3]。我國(guó)自1948年，劉永純年報(bào)道過(guò)偽狂犬病以來(lái)[4]，該病已經(jīng)擴(kuò)大到黑龍江、吉林、上海、廣東、陜西、河南、甘肅、山東等30多個(gè)省、市、自治區(qū)，其中臺(tái)灣已成功根除[5]。給畜牧業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重阻礙了我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的可持續(xù)發(fā)展，是困擾豬場(chǎng)發(fā)展的重要疾病因素之一。該病常見(jiàn)的傳播方式：（1）直接接觸傳播：易感豬與感染豬直接鼻對(duì)鼻的接觸將病毒傳播，及破損的皮膚和配種接觸等發(fā)生病毒感染[6]；（2）空氣傳播：空氣傳播為該病主要的方式，病毒從排毒豬的鼻分泌物以及唾液中排出，逐漸形成氣溶膠，然后隨空氣的氣流傳播至同一豬場(chǎng)，甚至隨風(fēng)傳到9km或更遠(yuǎn)的豬場(chǎng)的易感豬群；（3）垂直感染：PRV可經(jīng)胎盤、乳汁傳播給子代[7]，但是母體的免疫球蛋白不能傳遞給子代，因此通過(guò)垂直傳播導(dǎo)致仔豬死亡率達(dá)到100%[8]。（4）間接傳播：經(jīng)病毒污染后的器具、尸體、飼料、飲水以及帶病的鼠類、貓等被易感豬食入后，經(jīng)消化道感染[9]。

山東省是畜牧大省，養(yǎng)豬業(yè)是本省養(yǎng)殖業(yè)的重要組成部分之一。隨著近幾年來(lái)的迅速發(fā)展，豬群的疫病也越來(lái)越嚴(yán)重，嚴(yán)重制約著養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展，造成了直接的經(jīng)濟(jì)損失。豬偽狂犬病是目前危害我省養(yǎng)豬業(yè)的重要疾病之一，有必要對(duì)豬偽狂犬病的流行現(xiàn)狀進(jìn)行調(diào)查，掌握該病的感染和流行情況。

1 調(diào)查材料

1.1 材料 2013年3月，山東省14個(gè)地市的102個(gè)不同規(guī)模的豬場(chǎng)，采集及送檢的2835份血清樣品，其中包括新生仔豬血清703份，保育豬血清659份，育肥豬血清646份，種豬血清827份。

1.2 主要試劑 PRV(gpI)抗體檢測(cè)試劑盒(IDEXX)。

1.3 主要儀器 酶標(biāo)儀洗板機(jī)(BioTek公司，美國(guó))、酶標(biāo)儀(EXL 800 Universal Microplate Reader，美國(guó))、高速離心機(jī)(Thermo，美國(guó))、電子分析天平(美國(guó)雙杰公司)、電熱恒溫水浴鍋(嘉興市中新醫(yī)療儀器有限公司)。

2 調(diào)查方法

2.1 采樣設(shè)計(jì) 在95%的置信度下，預(yù)期流行率為40%，可接受誤差9.5%的情況下，對(duì)山東省規(guī)模豬場(chǎng)采用估計(jì)流行率策略進(jìn)行采樣。在95%的置信度下，預(yù)期流行率為10%，試驗(yàn)敏感性100%的情況下對(duì)場(chǎng)內(nèi)個(gè)體采用發(fā)現(xiàn)疫病策略采樣。樣品涵蓋山東省14個(gè)地市102個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)的2835份血清樣品進(jìn)行野毒抗體檢測(cè)，其中包括新生仔豬血清703份，保育豬血清659份，育肥豬血清646份，種豬血清827份。

2.2 PRV(gpI)野毒抗體檢測(cè) 按照PRV(gpI)抗體檢測(cè)試劑盒(IDEXX)的操作方法進(jìn)行：（1）首先將豬偽狂犬野毒抗體檢測(cè)試劑盒恢復(fù)至室溫，按照1:9的比例用蒸餾水將10倍濃縮洗滌液稀釋倒入洗板機(jī)，備用。（2）取干凈的96孔樣品稀釋板，在A1、A2孔加入陰性對(duì)照50μl，A3、A4孔加入陽(yáng)性對(duì)照50μl；然后按縱向每孔依次加入50μl的待檢樣品，然后每孔加入50μl的樣品稀釋液，備用。（3）取出PRV抗原包被板，將稀釋好的樣品轉(zhuǎn)移到對(duì)應(yīng)位置。（4）室溫孵育1h，或放置4℃冰箱過(guò)夜孵育。（5）設(shè)置洗板機(jī)，每孔300μl，每板洗滌3次，進(jìn)行洗滌。最后一次洗滌結(jié)束，將包被板殘留液體扣拍在吸水紙上。（6）每孔加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的PRV抗gpI抗體100μl。（7）室溫下孵育20min。（8）重復(fù)步驟5。（9）每孔加入TMB底物100μl。（10）避光條件下室溫孵育15min。（11）每孔加入終止液50μl，終止反應(yīng)。（12）使用酶標(biāo)儀讀取A(650)下的，樣品與對(duì)照結(jié)果。

3 結(jié)果

3.1 山東省規(guī)?；i場(chǎng)PRV血清野毒抗 送檢的102個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)中，陽(yáng)性場(chǎng)數(shù)67個(gè)，場(chǎng)陽(yáng)性率65.69% ；2835份血清中1250份陽(yáng)性樣品，樣品野毒抗體平均陽(yáng)性率為44.10 %。

3.2 山東省規(guī)?；i場(chǎng)不同地區(qū)PRV血清野毒抗體 根據(jù)山東省地理位置的差異，對(duì)采樣的14個(gè)地級(jí)市進(jìn)行以下劃分：東部地區(qū)包括濰坊、東營(yíng)、青島、威海；中部地區(qū)包括濟(jì)南、泰安、淄博、臨沂；西北地區(qū)包括德州、聊城、濱州；西南地區(qū)包括菏澤、濟(jì)寧、棗莊。西北地區(qū)陽(yáng)性檢出率最高，為57.67%；中部地區(qū)最低，為31.83 %，東部地區(qū)和西南地區(qū)分別為48.33% 和37.75%不等，表明山東各地區(qū)規(guī)模化豬場(chǎng)豬偽狂犬病野毒感染情況仍較為普遍，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 山東省不同地區(qū)豬偽狂犬病抗體檢測(cè)結(jié)果 (個(gè)、%、份)

3.3 不同生長(zhǎng)階段的豬PRV血清野毒抗體 對(duì)不同階段豬群統(tǒng)計(jì)，結(jié)果顯示種豬野毒感染陽(yáng)性率最高，為67.84%，其次是育肥豬和保育豬，分別為47.83% 和35.20%，初生仔豬最低，為21.05%。結(jié)果在卡方檢驗(yàn)和極大似然估計(jì)下P值都是小于0.05的，因此不同階段豬陽(yáng)性率存在顯著差異，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 不同生長(zhǎng)階段豬偽狂犬病抗體檢測(cè)結(jié)果 (份、%)

3.4 不同規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)的豬PRV血清野毒抗體 根據(jù)存欄母豬頭數(shù)對(duì)102個(gè)豬場(chǎng)進(jìn)行劃分，山東地區(qū)不同規(guī)模的豬場(chǎng)均存在PRV野毒感染現(xiàn)象，大型豬場(chǎng)為33.48%，中型豬場(chǎng)為44.89%，小型豬場(chǎng)為55.42%。結(jié)果在卡方檢驗(yàn)和極大似然估計(jì)下P值都是小于0.05的，因此不同規(guī)模豬場(chǎng)陽(yáng)性率存在顯著差異，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 不同規(guī)模豬場(chǎng)豬偽狂犬病抗體檢測(cè)結(jié)果 (個(gè)、%、份)

3.5 不同季節(jié)的豬PRV血清野毒抗體 根據(jù)季節(jié)的劃分，對(duì)山東省部分地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)PRV血清野毒抗體結(jié)果可以看出，春冬季節(jié)陽(yáng)性率較高，分別為53.54%和57.92%；夏秋季節(jié)相對(duì)較低，分別為33.25%和35.05%。結(jié)果在卡方檢驗(yàn)和極大似然估計(jì)下P值都是小于0.05的，表明不同季節(jié)PRV陽(yáng)性率存在顯著差異。結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 不同規(guī)模豬場(chǎng)豬偽狂犬病抗體檢測(cè)結(jié)果 (個(gè)、%、份)

4 討論

4.1 不同階段的豬陽(yáng)性率 種豬的陽(yáng)性率最高為67.84%，這表明母豬的帶毒現(xiàn)象非常普遍，PRV仍然是山東省母豬繁殖障礙疾病的重要原因之一。新生仔豬及保育豬的抗體陽(yáng)性率較低，分別為21.05%和35.20%，分析其主要原因是由于體內(nèi)存在有較高水平的母源抗體；另一方面是PRV感染仔豬的死亡率高，而所采集的血清樣本來(lái)自于被認(rèn)為健康的豬群，這也是導(dǎo)致初生仔豬抗體陽(yáng)性率的原因之一。因此初生仔豬與保育豬仍然是防控的重點(diǎn)，當(dāng)母源抗體降低到一定水平后，將成為豬偽狂犬病感染的主要易感豬群。

4.2 不同季節(jié)的豬陽(yáng)性率 豬偽狂犬病一年四季均有發(fā)生，冬春季節(jié)感染率較高，夏秋季節(jié)相對(duì)感染率較低。分析原因主要是：第一，由于PRV存在熱敏感的生物學(xué)特性，因此，在低溫條件下更有利于病毒的生存。第二，冬春季節(jié)氣候較為寒冷，導(dǎo)致豬的應(yīng)激能力增強(qiáng)，因而免疫力下降，對(duì)各種疾病的易感性增強(qiáng)。第三，冬春季節(jié)由于氣候寒冷，因此養(yǎng)殖場(chǎng)多封閉進(jìn)行飼養(yǎng)，導(dǎo)致圈舍內(nèi)空氣流通不良，促進(jìn)疾病傳播。

4.3 不同規(guī)模的豬場(chǎng)陽(yáng)性率 大型豬場(chǎng)陽(yáng)性率最低，其次是中型豬場(chǎng)，小型豬場(chǎng)陽(yáng)性率最高。分析原因?yàn)榇笮拓i場(chǎng)對(duì)豬偽狂犬病的防疫比較重視，另外飼養(yǎng)管理比較到位。小型豬場(chǎng)衛(wèi)生環(huán)境較差，防疫比較混亂，人員流動(dòng)頻繁，導(dǎo)致PRV的擴(kuò)散與傳播。可見(jiàn)良好的飼養(yǎng)環(huán)境及防控措施對(duì)于疾病的預(yù)防非常重要。

4.4 不同地區(qū)的豬場(chǎng)陽(yáng)性率 本次調(diào)查范圍基本覆蓋了山東省，證明了豬偽狂犬病在山東省內(nèi)普遍存在，應(yīng)引起各地區(qū)的高度重視。

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A

1007-1733(2015)11-0055-03

2015-09-02）

種畜禽場(chǎng)疫病凈化技術(shù)示范與推廣項(xiàng)目

*通訊作者