飼料中維生素E水平對(duì)三疣梭子蟹幼蟹生長(zhǎng)性能、血清非特異性免疫及抗氧化指標(biāo)的影響

李 弋 張 穩(wěn) 金 敏 霍雅文 邱 紅 侯迎梅 周歧存

(寧波大學(xué)海洋學(xué)院，魚(yú)類營(yíng)養(yǎng)研究室，寧波 315211)

維生素E又名生育酚，其與水生動(dòng)物機(jī)體的代謝、抗氧化功能、免疫功能、抗病力和繁殖性能有著密切的聯(lián)系。維生素E作為一種生物抗氧化劑，可預(yù)防飼料和機(jī)體組織中多種不飽和脂肪酸的氧化，并可促進(jìn)蝦蟹類成活和生長(zhǎng)。水產(chǎn)動(dòng)物對(duì)維生素E需求的研究目前主要集中在魚(yú)類上，在甲殼類上的研究較少見(jiàn)報(bào)道。近年來(lái)，維生素E對(duì)水生動(dòng)物免疫功能的影響已逐漸成為研究熱點(diǎn)。動(dòng)物免疫反應(yīng)啟動(dòng)主要在細(xì)胞膜上發(fā)生，免疫系統(tǒng)為協(xié)助清除病原體而產(chǎn)生的不穩(wěn)定自由基會(huì)破壞吞噬細(xì)胞，而維生素E可保護(hù)體細(xì)胞免遭自由基破壞，并使細(xì)胞膜維持正常功能［1］。飼料中補(bǔ)充維生素E能顯著增強(qiáng)中國(guó)對(duì)蝦血清中酚氧化酶(phenoloxidase，PO)的活性，并且隨著維生素E水平的升高，PO活性增強(qiáng)。一定量的維生素E能促進(jìn)酚氧化酶原(prophenoloxidase，proPO)的合成，增強(qiáng)中國(guó)對(duì)蝦血清對(duì)副溶血弧菌和溶藻弧菌的吞噬活力［2］。Shiau 等［3］研究表明，飼料中維生素E水平為85～89 mg/kg時(shí)，斑節(jié)對(duì)蝦生長(zhǎng)最快、非特異性免疫力最強(qiáng);維生素E水平為179 mg/kg時(shí)，組織中維生素E積累量最大。胡俊茹等［4］認(rèn)為維生素E和硒對(duì)凡納濱對(duì)蝦抗氧化系統(tǒng)具有隨時(shí)間變化的動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)作用，維生素E和硒之間存在交互作用;當(dāng)在基礎(chǔ)飼料中維生素E和硒添加量分別在400、0.4 mg/kg時(shí)，凡納濱對(duì)蝦機(jī)體抗氧化能力整體達(dá)到平衡，能有效抵制氧自由基的損傷。維生素E除了促進(jìn)生長(zhǎng)、提高免疫力外，還可以促進(jìn)繁殖和發(fā)育。吳桂玲等［5］研究表明，飼料中的維生素E與凡納濱對(duì)蝦的受精率、孵化率、幼體成活率以及仔蝦的應(yīng)激反應(yīng)能力密切相關(guān)。在凡納濱對(duì)蝦親體飼料中適量添加維生素E，能顯著提高凡納濱對(duì)蝦的受精率、孵化率、幼體成活率及仔蝦的應(yīng)激反應(yīng)能力。羅文等［6］認(rèn)為飼料中維生素E水平為192 mg/kg時(shí)可明顯提高紅螯螯蝦的繁殖性能，維生素E主要是通過(guò)提高紅螯螯蝦受精卵的質(zhì)量來(lái)進(jìn)一步提高胚胎發(fā)育的成活率和孵化率。林仕梅等［7］采用L9正交設(shè)計(jì)法，配制9種不同維生素C、維生素E、肌醇、膽堿水平的配合飼料喂養(yǎng)中華絨螯蟹，結(jié)果表明中華絨螯蟹配合飼料中維生素E適宜量為45 mg/kg。艾春香等［8］認(rèn)為維生素E作為免疫刺激劑能有效地增強(qiáng)中華絨螯蟹的非特異性免疫能力，增強(qiáng)中華絨螯蟹免疫功能的維生素E適宜添加量為200～400 mg/kg。

三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)廣泛分布于我國(guó)沿海，具有生長(zhǎng)快、產(chǎn)量高、肉質(zhì)好、環(huán)境適應(yīng)能力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，頗受廣大消費(fèi)者和養(yǎng)殖戶的青睞，是我國(guó)重要的海產(chǎn)經(jīng)濟(jì)蟹類，在海洋捕撈和海水養(yǎng)殖業(yè)中占有極其重要的地位。長(zhǎng)期以來(lái)，三疣梭子蟹養(yǎng)殖過(guò)程中多采用低值小雜魚(yú)和貝類直接投喂，投喂生物餌料不僅造成三疣梭子蟹營(yíng)養(yǎng)不平衡，而且還會(huì)破壞海洋漁業(yè)資源、污染水域環(huán)境、誘發(fā)三疣梭子蟹養(yǎng)殖病害發(fā)生等。因此，研制營(yíng)養(yǎng)全面、優(yōu)質(zhì)高效的人工全價(jià)配合飼料已成為三疣梭子蟹產(chǎn)業(yè)迅速發(fā)展的迫切需要。目前有關(guān)蟹類的研究主要集中在能量蛋白質(zhì)比、蛋白質(zhì)、脂肪、粗纖維營(yíng)養(yǎng)等主要營(yíng)養(yǎng)素的營(yíng)養(yǎng)需求方面［9-12］，而有關(guān)維生素E營(yíng)養(yǎng)的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本文以三疣梭子蟹幼蟹為研究對(duì)象，采用單體框養(yǎng)的方式，探討飼料中維生素E水平對(duì)幼蟹生長(zhǎng)性能以及血清中免疫相關(guān)指標(biāo)和抗氧化相關(guān)指標(biāo)的影響，為三疣梭子蟹高效配合飼料的研制開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)飼料

本試驗(yàn)以秘魯紅魚(yú)粉、豆粕、小麥蛋白粉和磷蝦粉為蛋白質(zhì)源，魚(yú)油、大豆油和大豆卵磷脂為脂肪源，并補(bǔ)充礦物質(zhì)和維生素預(yù)混料等以滿足幼蟹的營(yíng)養(yǎng)需求，配制基礎(chǔ)飼料，在基礎(chǔ)飼料基礎(chǔ)上分別添加 0、10、20、40、80 和 160 mg/kg 的維生素E(帝斯曼公司生產(chǎn)的維生素E乙酸酯，純度為50%)，制成6種等氮等能的試驗(yàn)飼料，通過(guò)高效液相色譜檢測(cè)飼料中維生素E水平分別為8.9、19.6、27.0、39.7、77.6 和 156.9 mg/kg。基礎(chǔ)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。所有原料粉碎后過(guò)80目篩，分別稱重、混勻后添加油脂和水，以雙螺桿擠條機(jī)擠壓并經(jīng)飼料顆粒機(jī)制成2種規(guī)格的顆粒飼料(分別為直徑3 mm、長(zhǎng)度5 mm，直徑5 mm，長(zhǎng)度7 mm)，飼料90℃熟化30 min，陰涼處風(fēng)干，用封口袋封裝后于-20℃下保存待用。

1.2 養(yǎng)殖管理

養(yǎng)殖試驗(yàn)在寧波象山縣東陳鄉(xiāng)鑫億梭子蟹水產(chǎn)公司進(jìn)行，試驗(yàn)用三疣梭子蟹幼蟹購(gòu)自寧波兢業(yè)育苗廠，幼蟹置于水泥池中暫養(yǎng)。本試驗(yàn)采用單體筐養(yǎng)的方式，塑料筐規(guī)格為80 cm×40 cm×40 cm，養(yǎng)殖筐中間設(shè)置一隔板，隔板兩邊各放一裝有沙子的沙盒，作為幼蟹的棲息場(chǎng)所，沙盒規(guī)格為25 cm×15 cm×10 cm。試驗(yàn)挑選360只初始體重為(5.94±0.17)g的幼蟹，隨機(jī)分配于180只養(yǎng)殖筐中(2只/筐)，試驗(yàn)筐隨機(jī)分組，每種試驗(yàn)飼料投喂60只幼蟹，每20只幼蟹作為1個(gè)重復(fù)。試驗(yàn)開(kāi)始前統(tǒng)一用未添加維生素E的試驗(yàn)飼料馴化1周，試驗(yàn)開(kāi)始后每種飼料每天投喂2次(07:00、17:00)，每天投喂量控制在幼蟹體重的6%～8%，每天早晨撈取殘餌和蛻殼，記錄死亡數(shù)、投餌量和蛻殼次數(shù)。所有養(yǎng)殖筐置于1個(gè)水泥池中(70 m×80 m×0.6 m)，池底鋪設(shè)充氧管不間斷充氧，試驗(yàn)期間水溫26～30℃，溶解氧濃度6.5 ～7.0 mg/L、氨氮濃度≤0.5 mg/L、pH 7.8～8.2、鹽度26‰ ～28‰，2 ～3 d換水1 次，每次換水量約為30%，試驗(yàn)期為8周。

1.3 樣品采集、分析與計(jì)算

試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，清點(diǎn)每組存活的三疣梭子蟹的數(shù)量，計(jì)算成活率。停食24 h后取樣，每組蟹子分別稱重，并在每組中隨機(jī)取4只蟹從第3步足抽取血液，分別放入1.5 mL離心管中，4℃靜置過(guò)夜，3 000 r/min離心8 min，取上清，用于血清指標(biāo)的測(cè)定。每組另隨機(jī)取4只蟹進(jìn)行常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分分析。

表1 基礎(chǔ)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet(DM basis) %

1.3.1 生長(zhǎng)指標(biāo)

增重率(WGR，%)=100×(終末體重-初始體重)/初始體重;

特定生長(zhǎng)率(SGR，%/d)=100×(ln終末體重-ln初始體重)/試驗(yàn)天數(shù);

飼料系數(shù)(FCR)=飼料攝入量(干重)/幼蟹體增重(濕重);

蛻殼率(MR，%)=100×2×蛻殼次數(shù)/(開(kāi)始時(shí)蟹個(gè)數(shù)+結(jié)束時(shí)蟹個(gè)數(shù))［13］;

成活率(SR，%)=100×開(kāi)始時(shí)蟹個(gè)體數(shù)/結(jié)束時(shí)蟹個(gè)體數(shù);

1.3.2 常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分分析

用于常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分分析的飼料和幼蟹樣品置于105℃烘箱中至恒重，測(cè)定方法參照AOAC(1995)。水分含量由烘干前后樣品的質(zhì)量變化量計(jì)算而得;粗蛋白質(zhì)含量采用凱氏定氮儀(FOSS，Tecator，Hoganas，Sweden)測(cè)定樣品的總氮量后，通過(guò)總氮量乘以6.25而得;粗脂肪含量采用索氏抽提儀(Soxtec System HT6，Tecator，Sweden)測(cè)定;粗灰分含量采用高溫灼燒法測(cè)定，將樣品置于馬福爐中550℃下灼燒8 h至恒重。所有指標(biāo)均重復(fù)測(cè)定2次，若同一樣品測(cè)定結(jié)果相對(duì)偏差大于2%，則增加重復(fù)數(shù)，采用相對(duì)偏差2%以內(nèi)的2個(gè)測(cè)定值的平均值作為測(cè)定結(jié)果。

1.3.3 血清生化指標(biāo)

血清中總蛋白(total protein，TP)、甘油三酯(triglyceride，TG)、葡萄糖(glucose，GLU)含量均在全自動(dòng)生化分析儀(OLYMPUSAU 600，日本)上測(cè)定。

1.3.4 血清非特異性免疫指標(biāo)

血清溶菌酶(lysozyme，LSZ)活性測(cè)定采用Hultmark等［14］的方法并加以改進(jìn):以溶壁微球菌凍干粉為底物，用0.1 mol/L的磷酸鉀鹽緩沖液(pH=6.4)配制成一定濃度的底物懸液(在570 nm處的吸光度值為0.3)，在此法規(guī)定條件下，溶菌LSZ活性(U/mL)=(A0-A)/A(A0為反應(yīng)之前菌懸液的吸光度，A為反應(yīng)之后菌懸液的吸光度)。堿性磷酸酶活性(alkaline phosphatase，AKP)活性采用南京建成工程生物研究所試劑盒進(jìn)行測(cè)定。

1.3.5 血清抗氧化指標(biāo)

血清超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量采用南京建成工程生物研究所試劑盒進(jìn)行測(cè)定。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

采用SPSS 16.0對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差(one-way ANOVA)分析，若組間差異顯著(P＜0.05)，則進(jìn)行Tukey多重比較。分析結(jié)果均用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。

2 結(jié)果

2.1 飼料中維生素 E水平對(duì)三疣梭子蟹幼蟹生長(zhǎng)性能的影響

由表2可見(jiàn)，當(dāng)飼料中維生素 E水平從8.9 mg/kg提高到39.7 mg/kg時(shí)，幼蟹的 WGR 和SGR顯著提高，即39.7 mg/kg組的WGR和SGR顯著高于8.9 mg/kg組(P＜0.05);當(dāng)飼料中維生素E水平超過(guò)39.7 mg/kg時(shí)，WGR和SGR不再增高，反而出現(xiàn)降低的趨勢(shì)。以SGR為評(píng)價(jià)指標(biāo)，得折線回歸方程 y=0.017 6x+3.424 8(R2=0.857 6，x ＜39.0)和 y=0.004 4x+4.283 7(R2=0.890 8，x＞39.0)，由此得出三疣梭子蟹幼蟹的維生素E最適需求量為39.0 mg/kg(飼料干重，圖1)。FCR由于組內(nèi)差異較大，導(dǎo)致各組間差異不顯著(P＞0.05)，但是19.6和27.0 mg/kg組要低于其他各組。飼料中維生素E水平對(duì)幼蟹的MR和SR均沒(méi)有顯著影響(P ＞0.05)。

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圖1 飼料中維生素E水平與三疣梭子蟹幼蟹SGR的關(guān)系Fig.1 Relationship between the dietary vitamin E level and SGR of juvenile swimming crab

2.2 飼料中維生素E水平對(duì)三疣梭子蟹幼蟹全蟹常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分的影響

由表3可見(jiàn)，飼料中維生素E水平對(duì)幼蟹全蟹水分、粗灰分和粗蛋白質(zhì)含量的影響不顯著(P＞0.05)，而對(duì)粗脂肪含量有顯著影響(P＜0.05)。當(dāng)飼料中維生素 E水平從 8.9 mg/kg增加到39.7 mg/kg時(shí)，幼蟹全蟹粗脂肪含量逐漸降低，維生素E水平再增加到77.6 mg/kg時(shí)，幼蟹粗脂肪含量逐漸升高。

2.3 飼料中維生素E水平對(duì)三疣梭子蟹幼蟹血清生化指標(biāo)的影響

由表4可見(jiàn)，飼料中維生素E水平對(duì)幼蟹血清中TP、TG和 GLU含量均沒(méi)有顯著影響(P＞0.05)。

2.4 飼料中維生素E水平對(duì)三疣梭子蟹幼蟹血清非特異性免疫指標(biāo)及抗氧化指標(biāo)的影響

由表5可見(jiàn)，當(dāng)飼料中維生素 E水平從8.9 mg/kg增加到39.7 mg/kg時(shí)，血清中 LSZ 活性逐漸升高，39.7 mg/kg 組顯著高于8.9、19.6 和27.0 mg/kg組(P＜0.05);當(dāng)飼料中維生素E水平繼續(xù)增加到77.6 mg/kg時(shí)，血清中LSZ活性不再升高，反而有降低的趨勢(shì)。飼料中維生素E水平從8.9 mg/kg增加到39.7 mg/kg時(shí)，血清中 AKP活性逐漸升高，39.7 mg/kg組顯著高于 8.9和19.6 mg/kg組(P ＜0.05);當(dāng)飼料中維生素 E 水平繼續(xù)增加到77.6 mg/kg時(shí)，血清中AKP活性不再升高，反而有降低的趨勢(shì)。

由表5可見(jiàn)，飼料中維生素E水平對(duì)幼蟹血清中SOD活性沒(méi)有顯著影響(P＞0.05)。血清中MDA含量隨著飼料中維生素E水平的增加逐漸降低，當(dāng)飼料中維生素 E水平增加到156.9 mg/kg時(shí)，血清中MDA含量最低，顯著低于8.9 mg/kg組(P ＜0.05)。

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3 討論

3.1 飼料中維生素E水平對(duì)三疣梭子蟹幼蟹生長(zhǎng)性能的影響

維生素E作為一種抗氧化劑，可預(yù)防飼料和機(jī)體組織中多不飽和脂肪酸的氧化，從而促進(jìn)水生動(dòng)物的成活和生長(zhǎng)。Kanazawa［15］研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加維生素E能提高日本對(duì)蝦幼體的SR。He等［16-17］研究表明，飼料中添加適量的維生素E可提高凡納濱對(duì)蝦的WGR和SR。陳四清等［18］認(rèn)為在飼料中添加適量的維生素E有助于提高中國(guó)對(duì)蝦對(duì)蛋白質(zhì)的消化吸收，從而促進(jìn)其生長(zhǎng)。本試驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)飼料維生素E水平在8.9～39.7 mg/kg時(shí)隨著飼料中維生素E水平的增加，三疣梭子蟹幼蟹的WGR、SGR顯著上升，這一結(jié)果表明飼料中適宜水平的維生素E可以促進(jìn)三疣梭子蟹幼蟹的生長(zhǎng);但并非飼料中維生素E水平越高越好，當(dāng)維生素E水平超過(guò)39.7 mg/kg時(shí)，幼蟹的WGR、SGR不再顯著上升。因此，本試驗(yàn)中，飼料中維生素 E水平為39.7 mg/kg時(shí)，三疣梭子蟹幼蟹的生長(zhǎng)最好。這與林仕梅等［7］對(duì)中華絨螯蟹的研究結(jié)果一致，林仕梅等［7］以 SGR和FCR為指標(biāo)，中華絨螯蟹對(duì)維生素E的適宜需求量為45 mg/kg。甲殼類動(dòng)物對(duì)維生素的需求量受飼料中營(yíng)養(yǎng)成分(如飼料脂肪與維生素E水平等)、養(yǎng)殖動(dòng)物的生長(zhǎng)階段、生理狀態(tài)以及養(yǎng)殖環(huán)境密切相關(guān)［19］。但是，周立斌等［20］研究表明，美國(guó)紅魚(yú)最佳生長(zhǎng)性能的飼料維生素E添加量為102.8 mg/kg。陳騁等［21］以黃顙魚(yú)幼魚(yú)為研究對(duì)象，飼料中維生素E的添加量對(duì)幼魚(yú)的特定生長(zhǎng)率和飼料效率沒(méi)有顯著性影響，而添加量為175 mg/kg時(shí)，幼魚(yú)攝食率顯著降低。這可能與試驗(yàn)物種、飼養(yǎng)模式、維生素E添加形式和水質(zhì)的不同有關(guān)。艾春香等［22］發(fā)現(xiàn)，飼料中添加維生素E 500 mg/kg相較于添加維生素E 300 mg/kg時(shí)，仔蟹的SR、WGR和蛻皮頻率顯著降低，這與本試驗(yàn)結(jié)果相符。

3.2 飼料中維生素E水平對(duì)三疣梭子蟹幼蟹全蟹常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分的影響

很多礦物質(zhì)和維生素是與脂類代謝相關(guān)酶的輔基和輔酶，參與體內(nèi)的轉(zhuǎn)甲基反應(yīng)，因而對(duì)于脂肪代謝非常重要。維生素E、硒協(xié)同作用與脂類代謝關(guān)系極為密切，能防止并清除脂類代謝過(guò)程中產(chǎn)生的過(guò)氧化物［23］。因此，當(dāng)飼料中維生素E不足時(shí)，動(dòng)物體內(nèi)的脂肪就不能作為能源有效地被利用，而是累積在體內(nèi)，此時(shí)蛋白質(zhì)就被消耗提供能量。周震等［24］研究了鯉魚(yú)維生素E的缺乏癥，結(jié)果表明，不添加維生素E組約有68%的鯉魚(yú)發(fā)病，且病魚(yú)肌肉水分的含量非常高，蛋白質(zhì)含量有降低的趨勢(shì)，肌肉纖維萎縮，鯉表現(xiàn)營(yíng)養(yǎng)性肌病和白肌病等，而添加維生素E組則沒(méi)有此現(xiàn)象發(fā)生。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼料中維生素E水平對(duì)三疣梭子蟹幼蟹全蟹粗脂肪含量有顯著影響，在一定范圍內(nèi)，蟹體粗脂肪含量隨著飼料中維生素E水平的增加而降低，說(shuō)明維生素E可以促進(jìn)幼蟹體內(nèi)脂肪代謝，使脂肪積累量減少;但是隨著飼料中維生素E水平進(jìn)一步增加，蟹體粗脂肪含量升高，說(shuō)明飼料中維生素E水平過(guò)量，抑制了體內(nèi)脂肪代謝過(guò)程，從而使脂肪積累量增加。但是，本試驗(yàn)沒(méi)有發(fā)現(xiàn)全蟹粗蛋白質(zhì)含量降低的現(xiàn)象，這也許是由于本試驗(yàn)中未添加維生素E組(飼料中維生素E水平為8.9 mg/kg)飼料足以使體內(nèi)的脂肪分解產(chǎn)生生長(zhǎng)所需的能量，不需要再消耗體內(nèi)的蛋白質(zhì)提供能源。

3.3 飼料中維生素E水平對(duì)三疣梭子蟹幼蟹血清生化指標(biāo)的影響

動(dòng)物血液指標(biāo)被廣泛地用來(lái)評(píng)價(jià)其健康狀況、營(yíng)養(yǎng)狀況及對(duì)環(huán)境的適應(yīng)狀況，是重要的生理、病理和毒理學(xué)指標(biāo)［25-26］。血清TP含量反映魚(yú)體的營(yíng)養(yǎng)與代謝狀況，也間接反映了機(jī)體的免疫水平的高低。不同程度的脂肪肝與肝內(nèi)TG積聚的量有關(guān)。徐文［27］研究顯示，高TG增加脂肪肝的患病率，而單純的高膽固醇(CHOL)對(duì)脂肪肝的產(chǎn)生沒(méi)有多大影響，脂肪肝與TG、CHOL等含量之間的關(guān)系還有待進(jìn)一步的研究。血糖是反映動(dòng)物糖代謝和全身組織細(xì)胞功能狀態(tài)以及內(nèi)分泌機(jī)能的一個(gè)重要指標(biāo)。本試驗(yàn)的結(jié)果表明，飼料中維生素E水平對(duì)三疣梭子蟹幼蟹血清中TP、TG和GLU含量均沒(méi)有顯著影響。

3.4 飼料中維生素E水平對(duì)三疣梭子蟹幼蟹血清非特性免疫指標(biāo)的影響

LSZ是吞噬細(xì)胞殺菌的物質(zhì)基礎(chǔ)，在甲殼類動(dòng)物的免疫防御中起重要作用。它能夠水解革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌的細(xì)胞壁，破壞入侵體內(nèi)的異物，從而擔(dān)負(fù)起機(jī)體防御的功能［28］。艾春香等［29］研究表明，維生素E添加量對(duì)中華絨螯蟹各組織、器官中PO活性、抗菌力和LSZ活性有顯著或極顯著的影響，在適宜范圍內(nèi)，隨著維生素E添加量的增加，PO活性、抗菌力和LSZ活性顯著增強(qiáng)，從而增強(qiáng)中華絨螯蟹的非特異性免疫力。周立斌［20］等研究表明，美國(guó)紅魚(yú)血清LSZ和血清總補(bǔ)體活性隨著維生素E的添加量的增加而顯著升高。本試驗(yàn)研究顯示，飼料中適宜水平的維生素E，可以顯著提高血清中LSZ活性，但當(dāng)維生素E水平增加到一定程度后，血清中LSZ活性降低。這與以上的研究結(jié)果相一致。

AKP可催化所有的磷酸單酯及磷酸基團(tuán)的轉(zhuǎn)移反應(yīng)，它直接參與磷的代謝，亦與 DNA、RNA、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等代謝有關(guān)，它對(duì)鈣質(zhì)的吸取、磷酸鈣沉積、骨骼形成、甲殼素分泌及形成都有重要的作用;蝦蟹類等甲殼動(dòng)物在生長(zhǎng)過(guò)程中都要經(jīng)歷蛻殼過(guò)程，該酶對(duì)蝦蟹類的生存、生長(zhǎng)有特別重要的意義［30］。艾春香等［31］研究表明，中華絨螯蟹血清AKP活性隨著維生素E含量的增加而顯著升高。本試驗(yàn)研究顯示，飼料中維生素E水平在一定范圍內(nèi)增加，血清中AKP活性會(huì)逐漸升高，但當(dāng)維生素E水平超過(guò)一定的量后血清中AKP活性又開(kāi)始降低?？梢?jiàn)，飼料中適宜水平的維生素E可以顯著提高三疣梭子蟹的非特異性免疫力，但當(dāng)維生素E水平進(jìn)一步增加后三疣梭子蟹的非特異性免疫力反而下降。

3.5 飼料中維生素E水平對(duì)三疣梭子蟹幼蟹血清抗氧化指標(biāo)的影響

維生素E之所以具有抗氧化作用是由于它容易被氧化，可以代替其他物質(zhì)首先被氧化，因而可以起到保護(hù)其他物質(zhì)不被氧化的作用。維生素E本身具有產(chǎn)生酚氧化基的結(jié)構(gòu)，產(chǎn)生的酚氧基能夠猝滅并能同單線態(tài)氧反應(yīng)，保護(hù)不飽和脂肪酸免受單線態(tài)氧損傷，還可以被超氧陰離子自由基和羥自由基氧化，使不飽和脂肪酸免受自由基攻擊，從而抑制脂肪酸的自動(dòng)氧化［32］。SOD是生物體內(nèi)一種重要抗氧化防御酶，其基本功能是清除由代謝產(chǎn)生的活性氧，控制自由基引起質(zhì)膜過(guò)氧化［33］。當(dāng)蝦蟹類機(jī)體受到輕度逆境脅迫時(shí)，SOD活性被誘導(dǎo)，而受重度逆境脅迫時(shí)，其活性則被抑制。SOD活性可以作為蝦蟹類免疫反應(yīng)的一個(gè)重要指標(biāo)［34-35］。MDA是膜脂過(guò)氧化的最終分解產(chǎn)物，其含量可以反映機(jī)體遭受過(guò)氧化損害的程度。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，隨著飼料中維生素E水平的增加，三疣梭子蟹幼蟹血清中SOD活性未發(fā)生顯著變化，血清中MDA含量隨著飼料中維生素E水平的增加而逐漸降低。艾春香等［31］研究表明，飼料中維生素E添加量對(duì)中華絨螯蟹組織SOD活性有顯著影響，這與本試驗(yàn)的試驗(yàn)結(jié)果并不相符。這可能與試驗(yàn)動(dòng)物的生長(zhǎng)階段不同有關(guān)，由于幼蟹SOD活性顯著低于成蟹［36］，造成了幼蟹SOD活性變化并不明顯。王立改［37］研究表明，維生素E添加量為100 mg/kg飼料組幼蟹肝胰腺M(fèi)DA含量顯著低于維生素E添加量為0、300 mg/kg飼料組，這與本試驗(yàn)結(jié)果相符。這表明在飼料中添加維生素E有助于提高三疣梭子蟹的抗氧化能力。

4 結(jié)論

綜上，本研究結(jié)果表明飼料維生素E水平影響三疣梭子蟹的生長(zhǎng)性能、血清非特異性免疫及抗氧化指標(biāo)，基于SGR的折線模型擬合后獲得三疣梭子蟹幼蟹對(duì)維生素E的適宜需求量為39.0 mg/kg(飼料干重)。

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