白術(shù)散加減對(duì)胃寒型功能性消化不良小鼠胃腸功能的影響

張徐雯，周 馳，王曉彤，林海雄，龔 衛(wèi)，湯萬(wàn)權(quán)

1廣州中醫(yī)藥大學(xué) 第二臨床醫(yī)學(xué)院針灸推拿學(xué)，廣州5104052廣州中醫(yī)藥大學(xué) 第一附屬醫(yī)院骨科，廣州5104053平頂山學(xué)院 醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)教研室，河南平頂山467000

白術(shù)散加減對(duì)胃寒型功能性消化不良小鼠胃腸功能的影響

張徐雯1，周 馳2，王曉彤1，林海雄1，龔 衛(wèi)1，湯萬(wàn)權(quán)3

1廣州中醫(yī)藥大學(xué) 第二臨床醫(yī)學(xué)院針灸推拿學(xué)，廣州5104052廣州中醫(yī)藥大學(xué) 第一附屬醫(yī)院骨科，廣州510405
3平頂山學(xué)院 醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)教研室，河南平頂山467000

目的 觀察白術(shù)散加減對(duì)胃寒型功能性消化不良小鼠胃腸功能的影響，同時(shí)用性味寒涼藥物石斛作用于此模型小鼠，觀察中藥性味對(duì)中醫(yī)特定癥候的作用傾向。方法 采用冰水和冰NaOH造成胃寒型功能性消化不良小鼠模型，同時(shí)觀察白術(shù)散加減及性味寒涼藥物石斛對(duì)胃寒型功能性消化不良小鼠的進(jìn)食、飲水、體質(zhì)量變化、小腸推進(jìn)率、小腸吸收功能及胃生長(zhǎng)素、胃動(dòng)素的影響。結(jié)果 白術(shù)散加減可增加模型小鼠進(jìn)食、飲水、體質(zhì)量(P＜0．05)及游泳時(shí)間(P＜0．01)，提高小腸推進(jìn)率和血清D-木糖含量(P＜0．05)，上調(diào)胃生長(zhǎng)素水平(P＜0．05)，同時(shí)有下調(diào)胃動(dòng)素水平的趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0．05)，而性味寒涼的石斛作用于此模型小鼠則加重小鼠癥狀。結(jié)論 胃生長(zhǎng)素、胃動(dòng)素水平的變化及其相互調(diào)控可能是白術(shù)散加減起效及寒涼藥物作用于此證候小鼠的神經(jīng)內(nèi)分泌基礎(chǔ)之一。

白術(shù)散加減;胃寒型功能性消化不良;胃生長(zhǎng)素;胃動(dòng)素

Acta Acad Med Sin，2015，37(4):435-439

目前針對(duì)功能性消化不良(functional dyspepsia，F(xiàn)D)的治療西醫(yī)無(wú)特效治療方案，其毒副作用限制進(jìn)一步推廣，從中醫(yī)藥入手已成為新的切入點(diǎn)。古往今來(lái)無(wú)數(shù)學(xué)者對(duì)白術(shù)、藿香、石斛治療脾胃病的研究從未間斷。很多古代名方中都含有這3味藥，其中七味白術(shù)散和白術(shù)石斛湯一直被歷代醫(yī)家沿用，明代兒科世家萬(wàn)全提出，“白術(shù)散乃治泄作渴之神方”，本研究探討“白術(shù)散加減”對(duì)脾胃虛寒型FD小鼠胃腸功能的影響及中藥性味對(duì)人體盛衰、寒熱變化的作用傾向，運(yùn)用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)手段從現(xiàn)代分子生物學(xué)角度分析白術(shù)散加減的科學(xué)內(nèi)涵，以提高中醫(yī)藥臨床療效的推廣。

材料和方法

藥物及制備 白術(shù)、藿香、鐵皮石斛購(gòu)于北京同仁堂;白術(shù)散加減藥液制備:白術(shù)、藿香、石斛按照3∶2∶1比例煎煮;煎藥方法:常規(guī)方法煎藥，并濃縮成每毫升含生藥4 g的藥液。

動(dòng)物 昆明小鼠40只，質(zhì)量18．0～22．0 g，雌雄各半，購(gòu)于廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證號(hào):SCXK(粵)2013-0020。

儀器與試劑 imarkTm酶標(biāo)儀(Bio-rad公司)，UV-2100紫外分光光度計(jì)(日本島津公司)，低溫高速離心機(jī)(Sigma公司)，TRE-HH-S6 HH6恒溫水浴鍋(北京同德公司)，T18組織勻漿機(jī)(北京優(yōu)尼康生物科技有限公司);D-木糖試劑盒(南京建成科技有限公司，批號(hào)20131105)，小鼠胃饑餓素ELISA檢測(cè)試劑盒(上海源葉公司，批號(hào)20130901A)，小鼠胃動(dòng)素ELISA檢測(cè)試劑盒(上海西塘生物公司，批號(hào)E201309)，羧甲基纖維素活性炭(廣州天材公司)。

胃寒型功能性消化不良小鼠模型制備 采用隨機(jī)數(shù)字表將40只昆明小鼠分成4組:空白組、模型組、給藥組、石斛組，每組10只，雌雄各半，除空白組外，進(jìn)行造模6 d。前4天小鼠自由進(jìn)食并按20 ml/kg 隔4 h進(jìn)行灌服4℃冰水1次，每日共3次;第5天小鼠禁食不禁水，同前4天方法灌服冰水1 d;第6天處理灌服0．3 mol/L的4℃冰NaOH溶液0．1 ml 1次［1-2］。

分組給藥 造模后給藥干預(yù)，給藥組:灌服白術(shù)散藥液8 g/(kg·d);石斛組:灌服石斛水煎液8 g/(kg·d);模型組:灌服生理鹽水2 ml/(kg·d);空白組:灌服生理鹽水2 ml/(kg·d)。給藥時(shí)間為30 d。

觀察指標(biāo) 觀察小鼠活動(dòng)度、毛色、大便。

檢測(cè)指標(biāo)及方法

進(jìn)食、飲水:每天8:30給食前稱飼料重量，第2天8:30稱剩余飼料重量;每天9:00給每組50 ml水，第2天9:00稱量剩余體積。

體質(zhì)量增長(zhǎng)量:d1為造模第1天，d36為給藥最后天，d1和d36禁食12 h后稱量體質(zhì)量，小鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)量=W36-W1(W1為d1的體質(zhì)量，W36為d36的體質(zhì)量)。

體能測(cè)定:環(huán)境溫度25℃，水溫20℃。用塑料盆盛滿水把小鼠放進(jìn)水里，用秒表記錄自落水開(kāi)始至沉入水面的時(shí)間作為小鼠游泳時(shí)間以反映小鼠體能。

小腸推進(jìn)率:小鼠禁食18 h，眼球取血前30 min各組灌飼半固體糊(半固體糊的配制:10 g羧甲基纖維素鈉溶于250 ml蒸餾水中，然后分別加入16 g奶粉、8 g糖、8 g淀粉、2 g活性炭末，每加一次攪拌均勻，最后配置成300 g約300 ml的半固體糊狀物，放入冰箱冷藏12 h，用前2 h取出，恢復(fù)至室溫)0．6 ml。取血后脫臼處死小鼠，剖開(kāi)腹腔，結(jié)扎幽門(mén)及小腸末端。取出小腸自然伸直平鋪在實(shí)驗(yàn)臺(tái)，記錄小腸全長(zhǎng)，從幽門(mén)至黑色糊狀物在腸內(nèi)推進(jìn)的末端的長(zhǎng)度為推進(jìn)長(zhǎng)度，計(jì)算小腸推進(jìn)率。計(jì)算公式:小腸推進(jìn)率=推進(jìn)長(zhǎng)度/小腸全長(zhǎng)×100%。

腸道吸收功能檢測(cè):小鼠禁食18 h，眼球取血前1 h灌D-木糖，濃度為0．501 g/kg［3］。室溫靜置1 h，4℃過(guò)夜，采用轉(zhuǎn)子半徑為60 mm的低溫高速離心機(jī)4℃3000 r/min離心15 min，取血清。本實(shí)驗(yàn)用D-木糖吸收實(shí)驗(yàn)評(píng)估腸道吸收功能。采用間苯三酚法嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。

胃生長(zhǎng)素和胃動(dòng)素含量測(cè)定:小鼠脫臼處死后，迅速取出全胃組織，沿胃大彎曲部剪開(kāi)，取任一半在PBS溶液沖洗干凈，裝入EP管后-20℃保存。取出裝在離心管中的小鼠胃組織，前后稱質(zhì)量并計(jì)算出胃組織質(zhì)量。加入新EP管9倍量的PBS溶液置于冰盒內(nèi)用電動(dòng)組織勻漿機(jī)15 000 r/min上下研磨6 min制成10%組織勻漿。將制備好的10%組織勻漿用轉(zhuǎn)子半徑為60 mm的低溫高速離心機(jī)4℃ 3000 r/min離心10 min。取上清裝入200 μl離心管中，分裝成兩份，存放于-80℃待測(cè)。采用酶聯(lián)免疫分析法嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)的操作程序測(cè)定胃組織中胃生長(zhǎng)素、胃動(dòng)素水平。

結(jié)果

小鼠活動(dòng)度、毛色、大便變化 給藥組小鼠比較活躍且毛色鮮亮，大便正常;石斛組小鼠毛色黯淡稀疏、精神萎靡、偶爾便溏;模型組小鼠比較安靜，活動(dòng)度較正常組差，偶爾便溏。

小鼠進(jìn)食、飲水、體質(zhì)量增加量及游泳時(shí)間 與空白組相比，模型組小鼠飲水量、體質(zhì)量增加量以及游泳時(shí)間均減少(P＜0．05)。與模型組相比，給藥組小鼠進(jìn)食、飲水、體質(zhì)量增加量以及游泳時(shí)間均升高(P＜0．05);石斛組小鼠飲水、體質(zhì)量增加量以及游泳時(shí)間均降低(P＜0．05)(表1)。

小鼠小腸推進(jìn)率和腸道吸收功能 與空白組相比，模型組小鼠小腸推進(jìn)率和血清D-木糖含量均降低(P＜0．05)。與模型組相比，給藥組小鼠小腸推進(jìn)率、血清D-木糖含量均提高(P＜0．01，P＜0．05);石斛組小鼠小腸推進(jìn)率和D-木糖含量均下降(P＜0．05)(表2)。

小鼠胃組織中胃生長(zhǎng)素和胃動(dòng)素的變化 與空白組相比，模型組小鼠胃生長(zhǎng)素水平顯著降低(P＜0．05)，胃動(dòng)素水平顯著升高(P＜0．05)。與模型組相比，給藥組小鼠胃生長(zhǎng)素水平顯著升高(P＜0．05)，胃動(dòng)素水平有升高趨勢(shì)但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0．05);石斛組小鼠胃生長(zhǎng)素水平顯著降低(P＜0．05)，胃動(dòng)素水平有升高趨勢(shì)但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0．05)(表3)。

表1 白術(shù)散加減對(duì)小鼠進(jìn)食、飲水、體質(zhì)量增長(zhǎng)量、游泳時(shí)間的影響(n=10，±s)Table 1 Effects of modified Baizhu powder on food intake，water intake，weight change，and swimming time in mice(n=10，±s)

表1 白術(shù)散加減對(duì)小鼠進(jìn)食、飲水、體質(zhì)量增長(zhǎng)量、游泳時(shí)間的影響(n=10，±s)Table 1 Effects of modified Baizhu powder on food intake，water intake，weight change，and swimming time in mice(n=10，±s)

與空白組比較，aP＜0．05;與模型組比較，bP＜0．05，eP＜0．01;與石斛組比較，cP＜0．01，dP＜0．05aP＜0．05 compared with normal group;bP＜0．05，eP＜0．01 compared with model group;cP＜0．01，dP＜0．05 compared with Shihu group

分組Group進(jìn)食Food intake(g)飲水Water intake(g)體質(zhì)量增加量Weight change(g)游泳時(shí)間Swimming time(min)給藥組Drug group 57．2±1．4bd 63±1．2bd 14．5±4．2bd 15．7±5．7ec石斛組Shihu group 52．1±0．8 55±0．4ab 11．5±2．3ab 5．9±2．8ab模型組Model group 54．3±1．3 60±0．9a 12．8±4．1a 7．1±2．9a空白組Normal group 59．2±1．2 66±1．2 18．0±4．2 9．5±4．5

表2 白術(shù)散加減對(duì)小鼠小腸推進(jìn)率、血清D-木糖含量的影響(n=10，±s)Table 2 Effect of modified Baizhu powder on small intestine propulsive rate and serum D-xylose level in mice(n=10，±s)

表2 白術(shù)散加減對(duì)小鼠小腸推進(jìn)率、血清D-木糖含量的影響(n=10，±s)Table 2 Effect of modified Baizhu powder on small intestine propulsive rate and serum D-xylose level in mice(n=10，±s)

與空白組比較，aP＜0．05;與模型組比較，bP＜0．05，cP＜0．01;與石斛組比較，dP＜0．05aP＜0．05 compared with normal group;bP＜0．05，cP＜0．01 compared with model group;dP＜0．05 compared with Shihu group

分組Group小腸推進(jìn)率Small intestine propulsive rate(%)血清D-木糖含量Serum D-xylose content(mg/L)給藥組Drug group 39．2±2．1cd 125．2±23．3b石斛組Shihu group 20．6±3．8ab 92．0±20．1b模型組Model group 25．8±6．6a 101．1±18．3a空白組Normal group 30．8±8．5 177．9±24．6

表3 白術(shù)散加減對(duì)小鼠胃組織胃生長(zhǎng)素、胃動(dòng)素含量的影響(n=10，±s，pg/mg)Table 3 Effect of modified Baizhu powder on the ghrelin and motilin levels in mice stomach tissues(n=10，±s，pg/mg)

表3 白術(shù)散加減對(duì)小鼠胃組織胃生長(zhǎng)素、胃動(dòng)素含量的影響(n=10，±s，pg/mg)Table 3 Effect of modified Baizhu powder on the ghrelin and motilin levels in mice stomach tissues(n=10，±s，pg/mg)

與空白組比較，aP＜0．05;與模型組比較，bP＜0．05;與石斛組比較，cP＜0．05aP＜0．05 compared with normal group;bP＜0．05 compared with model group;cP＜0．05 compared with Shihu group

分組Group 胃生長(zhǎng)素Ghrelin 胃動(dòng)素Motilin給藥組Drug group 6．7±0．1bc 0．146±0．014c石斛組Shihu group 4．5±0．7b 0．159±0．011模型組Model group 5．0±0．3a 0．154±0．013a空白組Normal group 5．4±0．3 0．142±0．015

討論

本研究依據(jù)《蘭室秘藏·中滿腹脹論》“或多食寒涼，乃脾胃久虛之人，胃中寒則生脹滿，或臟寒生滿病”經(jīng)典理論為基礎(chǔ)及Ford等［4］研究表明寒性因素會(huì)減少橫結(jié)腸和乙狀結(jié)腸張力、降低其消化能力的研究方法為指導(dǎo)，使用冷水和冰NaOH造成胃寒型FD小鼠模型，觀察模型小鼠行為學(xué)、形態(tài)學(xué)及胃腸動(dòng)力的相關(guān)指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)與胃寒型功能性消化不良密切相關(guān)。綜上表現(xiàn)和已有研究［5-6］相符，模型制備成功可用于實(shí)驗(yàn)研究。

據(jù)流行病學(xué)調(diào)查顯示FD以其高發(fā)病率極大地困擾了人們的生活。目前西醫(yī)無(wú)特效治療方案，同時(shí)不能解決西藥的大量毒副作用。中醫(yī)中藥在改善癥狀、縮短病程、減少?gòu)?fù)發(fā)率方面有著顯著的優(yōu)勢(shì)。七味白術(shù)散為北宋中醫(yī)兒科鼻祖錢(qián)乙創(chuàng)制，記載于《小兒藥證直訣下卷》，以白術(shù)為君佐以寒涼生津的葛根，多用治胃腸疾病是治療兒科腹瀉的驗(yàn)方，現(xiàn)代研究還用于感染性的腹瀉、腸道菌群失調(diào)等疾病?！妒?jì)總錄》中“白術(shù)石斛湯”以白術(shù)為君佐以滋陰性寒的石斛，多用調(diào)節(jié)脾胃、改善進(jìn)食、肢體倦怠等，現(xiàn)代研究較少。本研究方劑“白術(shù)散”由以上兩方加減而來(lái)，其中白術(shù)、藿香芳香化濕、健脾和胃，佐以少量的石斛益胃生津，三藥合用，寓補(bǔ)、運(yùn)、升、降為一體，溫而不燥、補(bǔ)而不滯，以達(dá)到溫胃健脾、化濕行氣的功效。

近幾年，文獻(xiàn)報(bào)道FD與胃腸動(dòng)力障礙、內(nèi)臟敏感、胃腸激素改變、心理因素、胃電活動(dòng)異常等有關(guān)［7-11］，但發(fā)病機(jī)制尚未明確，其中胃腸激素改變已成為研究的熱點(diǎn)，通過(guò)內(nèi)分泌、神經(jīng)分泌和旁分泌等方式，調(diào)節(jié)消化系統(tǒng)的運(yùn)動(dòng)、分泌、吸收及細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)功能。胃生長(zhǎng)素是一種主要由胃分泌的多肽，具有保護(hù)胃黏膜、調(diào)控胃腸機(jī)械性消化、化學(xué)性消化和吸收的作用，且具有調(diào)控?cái)z食及能量代謝的作用［7］，這與小鼠進(jìn)食、飲水及體能的增加密切相關(guān)。胃動(dòng)素具有多種生理作用，包括對(duì)消化道的分泌、吸收、運(yùn)動(dòng)以及代謝活動(dòng)的調(diào)節(jié)。這兩種激素的動(dòng)態(tài)平衡共同調(diào)控了小鼠的胃腸功能。Kim等［8］探討血漿胃生長(zhǎng)素水平和功能性消化不良的病理生理學(xué)之間的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)胃生長(zhǎng)素水平與上腹部疼痛及早飽密切相關(guān)。從研究結(jié)果推測(cè)，白術(shù)散加減可能是通過(guò)調(diào)節(jié)相關(guān)激素(提高胃生長(zhǎng)素水平降低胃動(dòng)素的趨勢(shì))興奮胃腸平滑肌，增加細(xì)胞內(nèi)三磷酸肌醇含量，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度增加，引起胃和小腸產(chǎn)生消化間期移行性復(fù)合運(yùn)波Ⅲ相，誘發(fā)胃腸規(guī)律性和周期性的收縮運(yùn)動(dòng)，從而加強(qiáng)胃腸動(dòng)力，加快小腸蠕動(dòng)，提高小腸推進(jìn)率，改善胃寒型功能性消化不良小鼠的胃腸功能。Kamerling等［9］研究表明，F(xiàn)D組血漿胃動(dòng)素濃度比正常對(duì)照組高，與本研究一致，而胡淑娟等［10］證實(shí)FD胃排空延長(zhǎng)與胃動(dòng)素分泌下降有關(guān)，其促進(jìn)胃腸動(dòng)力的作用機(jī)制可能是通過(guò)刺激胃竇部及十二指腸胃動(dòng)素分泌細(xì)胞，促進(jìn)胃動(dòng)素的分泌。本研究給藥組小鼠胃動(dòng)素降低可能是胃酸的分泌過(guò)多引起，胃、十二指腸內(nèi)pH升高可刺激胃動(dòng)素分泌減少。

給藥組小鼠血清D-木糖含量升高，與小腸黏膜絨毛壽命、長(zhǎng)度、數(shù)量密切相關(guān)。D-木糖為戊糖，口服后在小腸的吸收為易化擴(kuò)散，需要細(xì)胞膜表面的Na+-K+-ATP酶，白術(shù)散加減保護(hù)胃腸黏膜，促進(jìn)胃腸黏膜的吸收，進(jìn)而加快小鼠體質(zhì)量的增加。而性味寒涼的石斛則會(huì)降低胃生長(zhǎng)素水平提高胃動(dòng)素導(dǎo)致消化不良癥狀更加嚴(yán)重，這是藥物性味作用于機(jī)體后，產(chǎn)生寒象反應(yīng)，引起內(nèi)環(huán)境的改變。其中胃動(dòng)素水平有升高的趨勢(shì)可能是由于胃竇動(dòng)力降低，迷走神經(jīng)興奮剌激胃動(dòng)素代償性分泌增加［11］。也可能是性味寒涼的藥物引起此模型小鼠植物神經(jīng)功能紊亂，迷走神經(jīng)張力增高，進(jìn)而產(chǎn)生胃動(dòng)素水平升高的趨勢(shì)。白術(shù)散加減在其溫胃化濕行氣的基礎(chǔ)上佐以少量滋陰性寒的石斛，使相互制約溫而不燥，從而達(dá)到調(diào)節(jié)胃氣，益胃生津，補(bǔ)而不滯，從根本上解決胃寒型功能性消化不良的發(fā)病。

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Effect of Modified Baizhu Powder on Gastrointestinal Functions in Mouse Models with Stomach-cold Functional Dyspepsia

ZHANG Xu-wen1，ZHOU Chi2，WANG Xiao-tong1，LIN Hai-xiong1，GONG Wei1，TANG Wan-quan3

1Department of Acupuncture and Manipulation，the Second Clinical College of Guangzhou University of
Traditional Chinese Medicine，Guangzhou 510405，China
2Department of Orthopaedics，the First Hospital Affiliated to Guangzhou University of Traditional
Chinese Medicine，Guangzhou 510405，China
3Clinical Medicine Teaching and Research Section of Medical Institute of Pingdingshan University，Pingdingshan，Henan 467000，China

Objective To explore the effect of modified Baizhu(Rhizoma Atractylodis Macrocephalae)powder on the gastrointestinal function in mouse models with stomach-cold functional dyspepsia．Meanwhile，the mouse models were administered with Shihu(dendrobium)，a traditional Chinese drug with cold nature and flavour，to explore the way via which it exert its effect on specific symptoms．Methods Mouse models with stomach-cold functional dyspepsia were established by ice water and ice NaOH．The effects of modified Baizhu powder and dendrobium on mice were observed in terms of water intake，weight change，small intestine propulsion rate，intestinal absorption function，and effects on ghrelin and motilin．Results The modifiedBaizhu powder effectively increased food intake，water intake，body weight(P＜0．05)and swimming time(P＜0．01)，increased the small intestine propulsion rate and serum D-xylose content(P＜0．05)，and upregulated ghrelin(P＜0．05)．Also，it showed a trend to down-regulate the motilin，although the change was not statistically significant(P＞0．05)．In contrast，the use of Shihu aggravated symptoms in the mouse models．Conclusion The changes in ghrelin and motilin levels may be the neuro-endocrine mechanisms via which the modified Baizhu powder and Shihu exert their effects on mouse models．

modified Baizhu powder;stomach-cold functional dyspepsia;ghrelin;motilin

TANG Wan-quan Tel:0375-2659161，E-mail:953836799@qq．com

R256．32

A

1000-503X(2015)04-0435-05

10．3881/j．issn．1000-503X．2015．04．012

2014-08-26)

湯萬(wàn)權(quán) 電話:0375-2659161，電子郵件:953836799@qq．com