335例外周血EB病毒DNA檢測(cè)的結(jié)果分析及臨床意義

朱嬋虹，鄭錦利，劉先鴻，郭建峰

(1、福建醫(yī)科大學(xué)附屬閩東醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建福安355000；2、福建醫(yī)科大學(xué)附屬閩東醫(yī)院腎內(nèi)科，福建福安355000)

335例外周血EB病毒DNA檢測(cè)的結(jié)果分析及臨床意義

朱嬋虹1，鄭錦利1，劉先鴻2，郭建峰1

(1、福建醫(yī)科大學(xué)附屬閩東醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建福安355000；2、福建醫(yī)科大學(xué)附屬閩東醫(yī)院腎內(nèi)科，福建福安355000)

目的探討EB病毒DNA檢測(cè)在疑似EB病毒感染者的臨床應(yīng)用價(jià)值。方法應(yīng)用熒光定量PCR反應(yīng)方法，定量檢測(cè)335例疑似EB病毒感染者的外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）中EB病毒DNA載量。結(jié)果檢測(cè)335例疑似EB病毒感染者PBMC中，檢出陽(yáng)性病例數(shù)109例，其中兒童97例，陽(yáng)性率為31.7%（97/306）；成人12例，陽(yáng)性率41.4%（12/29）?；純阂院粑栏腥炯胺窝诪樵\斷的最為常見(jiàn)。結(jié)論兒童是EBV感染的主要人群，并隱匿于上呼吸道感染、肺炎、支氣管炎和扁桃體炎等疾病中較為常見(jiàn)，對(duì)此類(lèi)人群進(jìn)行外周血EB病毒DNA檢測(cè)，有利于EBV相關(guān)疾病的早期診斷和治療，減少重癥疾病的發(fā)生。

EB病毒；DNA；上呼吸道感染

1 資料與方法

1.1 資料來(lái)源選取2015年4月-7月醫(yī)院就診疑似EBV感染者335例，其中兒童306例（其中年齡為0～3歲，220例，平均年齡17.98±10.6月；年齡＞3歲，86例，平均年齡7.03±2.64歲），成人29例。

1.2 儀器與試劑ABI7500PCR分析儀（美國(guó)ABI公司）EBV-DNA檢測(cè)試劑盒購(gòu)自中山大學(xué)達(dá)安基因有限公司，人外周血淋巴細(xì)胞分離液購(gòu)自天津?yàn)笕A科生物。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)本制備用一次性無(wú)菌真空采血管（EDTA抗凝）抽取靜脈血2ml，輕輕混勻。取EDTA抗凝全血1ml置于滅菌離心管中，加入生理鹽水1ml輕搖混勻，取另一滅菌離心管，加入1ml淋巴細(xì)胞分離液，將稀釋好的全血用加樣器緩慢加入到加有淋巴細(xì)胞分離液的試管中（沿管壁滴加，速度宜慢），應(yīng)用水平離心機(jī)，2000r/min離心20min。吸取白細(xì)胞層，加入1.5ml離心管中。

1.3.2 EB病毒核酸提取制備好的外周血單個(gè)核細(xì)胞，12000r/min離心5min，去上清，沉淀加入50μl提取液充分混勻，100℃恒溫處理（10±1）min。12000r/min離心5min，上清液即為模板，留取備用。

1.3.3 熒光定量PCR檢測(cè)PCR反應(yīng)管中加入2μlDNA模板提取液，用已知EBV-DNA含量的標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性對(duì)照品制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，置于熒光PCR儀檢測(cè)，結(jié)果低于5000拷貝/ml判定為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，率的比較采用卡方檢驗(yàn)；P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兒童和成人PBMC中EBV-DNA檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 兒童和成人PBMC中EBV-DNA陽(yáng)性率的比較

2.2 兒童疑似感染者中（0～3歲）組及（＞3歲）組的檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2。

2.3 兒童疑似感染者的初步診斷分布情況見(jiàn)表3、表4。

表2 兒童疑似感染者中0～3歲組及＞3歲組陽(yáng)性率的比較

表3 年齡＜3歲EB病毒陽(yáng)性?xún)和膊》植记闆r

表4 年齡＞3歲EB病毒陽(yáng)性?xún)和膊》植记闆r

3 討論

EBV屬于γ皰疹病毒亞科淋巴濾泡病毒屬，主要感染人類(lèi)口咽部的上皮細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞。EBV長(zhǎng)期潛伏在淋巴細(xì)胞內(nèi)，以環(huán)狀DNA形式游離在胞漿中，并整合在染色體內(nèi)。對(duì)于免疫功能正常的個(gè)體，由于EBV特異性的免疫監(jiān)視作用，EBV并不會(huì)大量復(fù)制導(dǎo)致疾病，而在細(xì)胞免疫功能受損后，EBV復(fù)制可加速，引起一系列臨床病變[3]。大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室采用ELISA方法檢測(cè)各項(xiàng)抗體輔助臨床診斷EBV感染，但它實(shí)際上是檢測(cè)人體對(duì)EBV感染的免疫狀態(tài)，無(wú)法檢測(cè)病毒自身（的真實(shí)含量），也就無(wú)法更準(zhǔn)確靈敏地反映EBV感染的情況。本資料應(yīng)用熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)EBV載量，具有高特異性、高靈敏度的特點(diǎn)。

從本資料可以看出就診的疑似EB感染患者335例中，兒童占大多數(shù)（306/335），陽(yáng)性率為31.7%(97/306)；成人占（29/335），陽(yáng)性率為41.4%（12/29）。成人的陽(yáng)性率比兒童高，不過(guò)成人病例數(shù)較少，準(zhǔn)確性有待進(jìn)一步確證。

兒童防御能力低下是EBV感染的重要原因，EBV感染者年齡以嬰幼兒和學(xué)齡前兒童較為多見(jiàn)[4]。在我國(guó)3~5歲兒童感染率超過(guò)90%[5]，發(fā)現(xiàn)EB病毒感染患兒首先以呼吸道感染為主[6]。本資料陽(yáng)性患兒中，主要以小于3歲（70/97）的幼兒為主，主要臨床表現(xiàn)為上呼吸道感染27例(38.57%)、肺炎16例（22.86%）、支氣管炎14例（20.0%），另外，扁桃體炎9例（12.86%），皰疹性咽炎等。同樣，大于3歲的27例EBV感染患兒中，主要臨床表現(xiàn)亦為肺炎7例（25.92%）、上呼吸道感染6例（22.22%）和扁桃體炎6例（22.22%）。與陳倩等報(bào)道一致[7]。戴偉[8]報(bào)道反復(fù)上呼吸道感染患兒EB病毒陽(yáng)性25.8%，遠(yuǎn)高于單純呼吸道感染的患兒EB病毒陽(yáng)性10.2%，和本資料結(jié)果一致。熒光定量PCR方法對(duì)EB病毒感染的檢測(cè)具有早期、快速等優(yōu)點(diǎn)并易于推廣應(yīng)用。李素娥等報(bào)道[9]EB病毒感染與兒童原發(fā)性腎病綜合征有一定的關(guān)聯(lián)，本文中統(tǒng)計(jì)的EBV陽(yáng)性患兒，有診斷為腎炎的，亦可能為[10]EB病毒在侵犯B淋巴細(xì)胞后，使B淋巴細(xì)胞發(fā)生抗原性改變，并進(jìn)一步引起T淋巴細(xì)胞的防御性反應(yīng)，形成細(xì)胞毒效應(yīng)，導(dǎo)致受感染機(jī)體細(xì)胞的溶解和死亡。

綜上所述，成人疑似患者的病例較少，需增加病例數(shù)進(jìn)一步比較。而在兒童方面，EBV感染的隱匿性及致癌性對(duì)兒童的健康構(gòu)成威脅，臨床予以EB病毒DNA檢測(cè)，有利于EBV相關(guān)疾病的早期診斷和治療，從而減少患兒痛苦，改善患兒的預(yù)后及減輕經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。

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[2]李金明.EB病毒實(shí)時(shí)PCR監(jiān)測(cè).實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)[M].北京：人民軍醫(yī)出版社，2007：291-298.

[3]段紅梅，謝正德，申昆玲.慢性活動(dòng)性EB病毒感染的研究進(jìn)展[J].臨床兒科雜志，2007，25（2）：153-156.

[4]竇蕾，張斌，賈娜兒，等.烏魯木齊地區(qū)住院呼吸道感染患兒EB病毒感染的調(diào)查[J].臨床兒科雜志，2012，30（8）：757-759.

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[8]戴偉.小兒反復(fù)上呼吸道感染誘發(fā)相關(guān)因素分析[J].白求恩軍醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，11(5)：406-407.

[9]李素娥，唐駿，吳樂(lè)天.EB病毒感染與兒童原發(fā)性腎病綜合征關(guān)系的研究[J].新醫(yī)學(xué)，2014，45（5）：342-344.

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R446.62

A

1674-1129(2015)06-0749-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2015.06.020 EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV）是一個(gè)具有復(fù)雜基因組的人類(lèi)皰疹病毒，EB病毒感染在全球均較普遍，并且是兒科常見(jiàn)的一種感染性疾病[1]，大多數(shù)的初次感染發(fā)生在幼兒時(shí)期，且多數(shù)感染后無(wú)明顯癥狀，或引起輕癥咽炎和上呼吸道感染，但終身攜帶病毒[2]。機(jī)體感染EBV后，可以產(chǎn)生傳染性單核細(xì)胞增多癥、EBV相關(guān)性嗜血細(xì)胞綜合征等，免疫缺陷患者容易發(fā)生淋巴組織增殖性疾病，常合并一系列的并發(fā)癥。此外，EBV感染與鼻咽癌和淋巴瘤的發(fā)病密切相關(guān)。本研究應(yīng)用熒光定量PCR反應(yīng)方法定量檢測(cè)了335例疑似EBV感染者的外周血EB病毒DNA載量，以探討EBVDNA檢測(cè)的臨床應(yīng)用價(jià)值和了解兒童及成人的EBV感染狀況。

2015-06-08；

2015-07-09)