番茄籽油不皂化物成分分析與分離

羅家星 張 彬 鄧丹雯 白 雪 肖義坡 馬冰峰

（南昌大學中德食品工程中心1，南昌 330047）（江西省產品質量監(jiān)督檢測院2，南昌 330047）

番茄籽油不皂化物成分分析與分離

羅家星1張 彬1鄧丹雯1白 雪1肖義坡1馬冰峰2

（南昌大學中德食品工程中心1，南昌 330047）（江西省產品質量監(jiān)督檢測院2，南昌 330047）

采用GC－MS分析番茄籽油不皂化物成分，并通過薄層層析（TLC）對不皂化物進行初步分離。通過GC－MS從番茄籽油不皂化物中分離出42個峰，鑒定出29種物質，主要成分為β－谷甾醇、膽甾醇、豆甾醇、環(huán)菠蘿烷醇、羊毛甾醇、γ－生育酚、（3β，5α）－膽甾－7－烯－3－醇、γ－谷甾醇、麥角甾醇、二十九烷、角鯊烯，其中β－谷甾醇含量最高，為15.68%；以正己烷與氯仿（7∶3，V／V）為展開劑，通過TLC分離番茄籽油不皂化物，得到6條色帶，利用紫外－可見光對分離物進行掃描，6種分離物最大吸收峰均不相同。

番茄籽油 不皂化物 成分分析 薄層分離 紫外－可見

番茄（Tomato）又名西紅柿、洋柿子，是茄科一年生草本植物。我國新疆以及內蒙古少部分地區(qū)作為全球最主要的番茄種植三大區(qū)域之一，是我國番茄及其制品的主要產地，主要產品是番茄醬。在生產番茄醬過程中產生了大量副產物——番茄渣，其中主要是番茄籽。番茄籽中粗脂肪質量分數為18%～22%［1］，可以提取番茄籽油。2010年4月，在新疆成立首家加工番茄籽油的企業(yè)，平均2.5 t新鮮番茄可以得到1 kg番茄籽油。2011年，新疆新鮮番茄年加工量達700萬t［2］，可生產約2 800 t番茄籽油。另外，據文獻報道希臘每年生產番茄籽油達2 000 t［3－4］。番茄籽油富含不飽和脂肪酸、植物甾醇及番茄紅素等營養(yǎng)成分，其中不皂化物含量約為2%。

不皂化物即油中不與堿反應，不溶于水但溶于醚的部分，包括甾醇類、高分子脂肪醇、色素、生育酚和碳氫化合物等。不皂化物中大多組分生物活性高，天然抗氧化性好，得到國內外廣泛研究。M.Malecka［5］曾對番茄籽油不皂化物抗氧化性進行了試驗，測定其中甾醇類成分。目前，國內關于番茄籽油不皂化物的研究鮮見報道。

研究采用GC－MS分析番茄籽油不皂化物成分，通過薄層層析（TLC）對不皂化物進行初步分離，利用紫外－可見光對分離物進行掃描分析，為番茄籽油的不皂化物成分的研究和分離提供初步試驗數據。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

番茄籽：新疆屯河股份有限公司。

95%乙醇、氫氧化鉀、石油醚（沸程30～60℃）、氯仿、氯化鈉、乙酸乙酯：天津市大茂化學試劑廠；無水硫酸鈉：西隴化工股份有限公司；N，O－雙（三甲基硅烷基）三氟乙酰胺：阿拉??；正己烷：美國Sigma公司；熒光硅膠板 60 F254：德國Meck Darmstadt。

1.2 主要儀器

RE52－98旋轉蒸發(fā)儀：上海亞榮生化儀器廠；6890N／5973i氣相色譜－質譜聯(lián)用儀：美國 Agilent公司；UV－1810紫外可見分光光度計：北京普析通用儀器有限責任公司；0412－1型離心機：上海手術機械廠；ZF－1型三用紫外分析儀：上海市安亭電子儀器廠。

1.3 試驗方法

1.3.1 番茄籽油提取

粉碎番茄籽，以石油醚為溶劑，采用索氏抽提2 h，脫溶后得到番茄籽油。

1.3.2 番茄籽油不皂化物提取

取5 g番茄籽油于250 mL圓底燒瓶，加入100 mL 2.2 mol／L的氫氧化鉀 －乙醇水溶液（8∶2，V／V）沸騰條件下皂化1 h；冷卻后加入100 mL去離子水，轉移至分液漏斗中，用50 mL正己烷萃取不皂化物，重復萃取3次；合并萃取液，用去離子水洗滌至水不使酚酞變紅，每次50 mL；通過無水硫酸鈉干燥后旋轉蒸發(fā)脫溶，得到不皂化物。

1.3.3 GC－MS分析番茄籽油不皂化物成分

番茄籽油不皂化物烷基化：取50 mg番茄籽油不皂化物，以5 mL正己烷溶解，用無水硫酸鈉脫水后取300μL于10 mL試管中，加入300μLBSTFATMCS（三氟乙酰胺－三甲基硅烷），在60℃水浴加熱硅烷化1 h。吹氮脫溶，殘留物用正己烷溶解，并用濾頭過濾，GC－MS檢測。

色譜條件：采用安捷倫122－3832毛細管柱（DB－35 ms，0.25 m×30 m×0.25μm）。升溫程序：初溫80℃，維持5 min，升溫至250℃，維持5 min；進樣溫度300℃，壓力 9.25 psi，載氣（He）流速1.0 mL／min，進樣量 1μL，分流比50∶1。

質譜條件：接口溫度280℃，離子源溫度230℃，MS四級桿溫度150℃，溶劑延遲：3 min；質量掃描范圍35～550 m／z。

1.3.4 TLC分離番茄籽油不皂化物

將番茄籽油不皂化物溶解于正己烷，采用熒光硅膠板，以正己烷 －氯仿（7∶3，V／V）為展開劑展開，溶劑蒸發(fā)后在紫外燈下顯色觀察。

將分離出來的色帶從板上刮下，分別裝入10 mL具塞試管中，各加入5 mL正己烷，超聲萃取30 min，離心（2 000 r／min，5 min），分離萃取液；再加入 5 mL乙酸乙酯，超聲萃取 1 h，離心（2 000 r／min，5 min），分離上層萃取液。合并2次萃取液，吹氮脫溶，殘留物溶于1 mL正己烷。用無水硫酸鈉脫水后取300 μL于10 mL試管中，加入300μL BSTFA－TMCS（三氟乙酰胺－三甲基硅烷），在60℃水浴加熱硅烷化1 h。吹氮脫溶，殘留物用5 mL正己烷溶解，并用濾頭過濾備用。各萃取液，以正己烷為空白，在200～800 nm下進行光譜掃描。

2 結果與分析

2.1 GC－MS測定番茄籽油不皂化物成分

采用GC－MS測定番茄籽油不皂化物成分，采用峰面積歸一法計算各成分的相對含量。番茄籽油不皂化物總離子流色譜見圖1。

質譜掃描結果顯示共分離出42個峰。色譜圖與NIST02.L標準譜庫檢索，鑒定出29種成分，其結果見表1。

圖1 番茄籽油不皂化物總離子流色譜圖

表1 番茄籽油不皂化物成分

結果顯示：已鑒定出的29種成分中主要有β－谷甾醇、膽甾醇、豆甾醇、環(huán)菠蘿烷醇、羊毛甾醇、γ－生育酚、（3β，5α）－膽甾－7－烯－3－醇、γ－谷甾醇、麥角甾醇、二十九烷、角鯊烯，含量分別為15.68%、7.13%、6.19%、5.42%、3.18%、3.06%、2.59%、1.92%、1.64%、0.99%。從其他草本植物中得到的油脂，如紫蘇籽油與大麻籽油，與二者的不皂化物相比，同樣是甾醇類物質含量最豐富［6－7］，但是番茄籽油不皂化物中生育酚種類多，含有α－、β－、γ－3種生育酚。檢測出了膽甾醇，同F JEller等［8］分析番茄籽油植物甾醇類結果相符，但沒有檢測出M Malecka［5］報道的菜籽甾醇、菜油甾醇及Δ5－燕麥甾醇。角鯊烯，是一種開鏈的三萜類物質，與甾醇、生育酚一樣，存在于植物油中，且具有極強抗氧化力和生物活性，能降低體內膽固醇、防治心血管疾病和延緩衰老等功效，目前研究發(fā)現橄欖油中角鯊烯含量最高［9］。

另外，還檢測出了植酮、無羈萜和法尼醇。植酮具有輕微的脂肪氣息，是一種揮發(fā)性成分［10］。無羈萜屬于萜類，曾在烏桕葉中發(fā)現過［11］。法尼醇又名麝子油醇，是一種直連倍半萜物質，存在于巴西檀木、黃葵子、依蘭依蘭、金合歡、秘魯香脂、玫瑰草、晚香玉、茉莉及橙花的香精油中，主要用作香料，加強類似型花香。

2.2 番茄籽油不皂化物薄層分離

薄層層析（TLC），即薄層色譜，是平面色譜的一種。試樣中的各組分在固定相與流動相之間借助毛細作用發(fā)生多次吸附－溶解作用，使不同物質上升距離不同而分離開來。該法簡單、快速、操作方便，已應用于不皂化物分離［12－13］。

以正己烷與氯仿為展開劑，比例為7∶3，對番茄籽油不皂化物進行初步薄層分離，結果見圖2。從紫外［14］、可見光譜可顯示初步分離結果，1～6號組分在紫外區(qū)200～290 nm之間的光譜，及在可見光區(qū)400～550 nm之間光譜分別見圖3、圖4。

圖2顯示：番茄籽油不皂化物經薄層分離之后得到6條色帶。最適Rf值在0.2～0.8之間，結果顯示1～4號結果較好。1、3、5號條帶顏色不受紫外燈影響。2號和4號色帶在紫外燈下顯現藍色，4號色帶偏淡，可能是因為組分量比較少。6號色帶離點樣帶非常近，在紫外燈下，顯色，因其原本有顏色，所以條帶顯示偏紫色。

圖3中，1～6號紫外光譜顯示，番茄籽油不皂化物通過薄層分離出來的6條帶在200～290 nm間波形不同，且最大吸收峰不同，依次為：232、224、218、255、225.5和218.5 nm。

圖3 1～6號條帶紫外圖譜

圖4顯示：1、3、5、6號在 400～550 nm有吸收，其中3號最強，2號和4號基本無吸收，這與圖2顯示結果相符。1、3、5、6號最大吸收峰分別為450、467.5、454.5和449.5 nm。

圖4 1～6號條帶可見光譜

綜合圖3和圖4，結果說明：以正己烷與氯仿（7∶3）為展開劑，采用薄層層析分離番茄籽油不皂化物，達到初步分離番茄籽油不皂化物組分。

3 結論

番茄籽油不皂化物通過GC－MS分離出42個峰，鑒定出29種物質，其中β－谷甾醇含量最高，為15.68%。

以正己烷與氯仿（7∶3）為展開劑，通過薄層層析，得到的6條色帶，該6種分離物在紫外光譜中最大吸收峰均不同，在可見光區(qū)有吸收峰的1、3、5、6號條帶最大吸收峰也不同，即達到初步分離番茄籽油不皂化物。

［1］王愛霞，劉洪海，王忠民，等.番茄籽油的理化特性及脂肪酸組成的GC／MS分析［J］.糧食加工與食品機械，2006（3）：52－53

［2］劉河山.托美托番茄吃干榨盡大幅提高附加值［N］.昌吉日報，2011－1－19（002）

［3］Lars M，Assunta C，Rossella S，et al.Antioxidant capacity of tomato seed oil in solution and its redox properties in cultured macrophages［J］.Journal of Agricultural and Food Chemistry，2013，61：346－354

［4］Lazos E S，Tsaknis J，Lalas L.Characteristics and composition of tomato seed oil［J］.Grasas Aceites，1998，49：440－445

［5］Maklecka M.Antioxidant properties of the unsaponifiable matter isolated from tomato seeds，oat grains and wheat germ oil［J］.Food Chemistry，2002，79（3）：327－330

［6］楊曉靜，王立眾，李和.紫蘇子油不皂化物的分離與分析［J］.中國油料作物學報，2006，28（2）：207－209

［7］黎文生，阮棟梁，丁雅韻，等.大麻籽油不皂化物的分離與分析［J］.中國油料作物學報，2002，24（3）：55－57

［8］Eller F J，Moser JK，Kenar JA，et al.Extraction and annlysis of tomato seed oil［J］.Journal of the American Oil，2010，87（7）：755－762

［9］毛多斌，賈春曉，孫曉麗，等.幾種功能性植物油中角鯊烯和維生素 E分析［J］.中國糧油學報，2007，22（2）：79－82

［10］牛麗影，吳曉琴，張英.香榧籽油的脂肪酸及不皂化物組成分析［J］.中國糧油學報，2011，26（6）：52－55

［11］王富乾，張錦文，姚廣民，等.烏桕葉化學成分研究［J］.中國藥學雜志，2013，48（22）：1098－1911

［12］楊曉靜，李和.桃仁油不皂化物與脂肪酸成分的分離與分析［J］.農業(yè)與技術，2005，25（1）：84－86，90

［13］Augusta C，Francesca B，Gerardo P，etal.Characterization of a potential nutraceutical ingredient：pomegranate（Punica granatum L.）seed oil unsaponifiable fraction［J］.Plant Foods for Human.Nutrition（Formerly Qualitas Plantarum），2010，65（3）：277－283

［14］Farines M，Soulier J，Rancurel A，et al.Leborgne.Influence of avocado oil processing on the nature of some unsaponifiable consitiuents［J］.Journal of the American Oil Chemists Society，1995，72（4）：473－476.

Separation and Analysis of Unsaponifiable Matters in Tomato Seed Oil

Luo Jiaxing1Zhang Bin1Deng Danwen1Bai Xue1Xiao Yipo1Ma Bingfeng2
（Sino－German Food Engineering Center of Nanchang University1，Nanchang 330047）（Jiangxi Provinvial Product Quality Supervision Testing College2，Nanchang 330047）

The unsaponifiablematters in tomato seed oil have been studied by GC－MS in the paper，and the unsaponifiablematters have been separated through Thin－layer Chromatography（TLC）.The results showed that42 peakswere isolated from tomato seed oil unsaponifiablematters by GC－MS，and 29 compounds were finally identified.Themain componentswere as follows：β－sitosterol，stigmasterol，cholesterol，cycloartanol，lanosterol，γ－tocopherol，（3β，5α）－cholest－7－en－3－ol，γ－sitosterol，ergosterol，nonacosane and squalene.β－sitosterol was themaximum componentwith the content of15.68%.Tomato seed oil unsaponifiablesmatters dissolved in hexane，then deposed on silica gel 60 F254，eluted with hexane－chloroform（7∶3）；after solvent evaporation，6 colored tapeswere evidenced under ultraviolet light.The 6 isolateswere extracted from the plate，and then were scanned through UV－visible.The results showed that the 6 isolates had differentmaximum absorption peaks.

tomato seed oil，unsaponifiablematters，analysis，thin－layer chromatography，UV－visible

TS222＋.1

A

1003－0174（2015）11－0125－05

2014－05－05

羅家星，女，1987年出生，碩士，糧食、油脂及植物蛋白工程

張彬，男，1956年出生，教授，油脂加工