葉生愛,邢寶萍
(蘭州工業(yè)學(xué)院,甘肅蘭州730050)
沙棘油對運(yùn)動訓(xùn)練大鼠紅細(xì)胞的保護(hù)作用研究
葉生愛,邢寶萍
(蘭州工業(yè)學(xué)院,甘肅蘭州730050)
從運(yùn)動機(jī)體紅細(xì)胞自由基代謝與DNA損傷程度角度出發(fā),進(jìn)行沙棘油對運(yùn)動大鼠紅細(xì)胞的保護(hù)作用研究。結(jié)果表明沙棘油能明顯提高運(yùn)動大鼠紅細(xì)胞超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性,降低紅細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化終產(chǎn)物丙二醛(MDA)含量,保護(hù)紅細(xì)胞及其DNA免受脂質(zhì)過氧化損傷,增強(qiáng)運(yùn)動能力。
沙棘油;紅細(xì)胞;氧化損傷;運(yùn)動訓(xùn)練
研究證實(shí),劇烈運(yùn)動可促使活性氧產(chǎn)生,體內(nèi)脂質(zhì)過氧化增強(qiáng),丙二醛(MDA)水平升高而導(dǎo)致運(yùn)動能力下降,產(chǎn)生運(yùn)動性疲勞。本文從紅細(xì)胞角度研究自由基對運(yùn)動機(jī)體的損傷和沙棘油對機(jī)體的保護(hù)作用。
沙棘果實(shí)和葉中富含多種維生素、黃酮、甾醇、類脂、氨基酸和微量元素等藥用成分和營養(yǎng)物質(zhì),沙棘果實(shí)是我國古代藏、蒙醫(yī)治病的常用藥物,具有抗癌抑瘤、增加免疫力的功能,能祛痰利肺,協(xié)調(diào)肝、胃、脾、腎和心臟功能,能活血化瘀、消炎生肌,也能防輻射、抗衰老。此外,沙棘還能阻斷過氧化作用,消除體內(nèi)過氧化產(chǎn)生的自由基[1]。
1.1 實(shí)驗(yàn)對象與分組
8 周齡SD雄性大鼠32只,體重(200±20)g,由蘭州大學(xué)醫(yī)學(xué)院動物實(shí)驗(yàn)中心提供。將大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3天后,隨機(jī)分為4組:安靜+生理鹽水對照組(對照1組)、安靜+沙棘油組(實(shí)驗(yàn)1組)、遞增負(fù)荷訓(xùn)練+生理鹽水對照組(對照2組)、遞增負(fù)荷訓(xùn)練+沙棘油組(實(shí)驗(yàn)2組),每組8只。
1.2 訓(xùn)練方式及給藥
適應(yīng)性飼養(yǎng)3天后,對照1組、實(shí)驗(yàn)1組不進(jìn)行遞增負(fù)荷的運(yùn)動訓(xùn)練;對照2組、實(shí)驗(yàn)2組安排在水池中進(jìn)行游泳訓(xùn)練,水溫控制在(30±1)℃,水深60 cm,密度6只/m2。動物飼養(yǎng)室內(nèi)溫20~26℃,濕度為44%~70%,照明隨自然變化。對照1組、實(shí)驗(yàn)1組安靜籠飼養(yǎng),自由飲食、攝水。對照2組、實(shí)驗(yàn)2組每天下午訓(xùn)練一次,每周訓(xùn)練5天,訓(xùn)練4周;開始每天訓(xùn)練30分鐘,適應(yīng)1周,第二周第一天訓(xùn)練30分鐘,以后每天加5分鐘,第三周第一天訓(xùn)練50分鐘,以后每天加5分鐘,第四周第一天訓(xùn)練70分鐘,以后每天加5分鐘,第五天訓(xùn)練結(jié)束后于次日4組負(fù)重(體重的6%)游泳至力竭(力竭標(biāo)準(zhǔn)為大鼠沉入水中超過10 s),用電子秒表記錄游泳時間。對照組每天按2.5m l/kg劑量灌胃生理鹽水,實(shí)驗(yàn)組每天按2.5ml/kg劑量灌胃沙棘油。沙棘油由甘肅省輕工業(yè)科學(xué)研究所提供。
1.3 取材
游泳大鼠力竭后即刻斷頭取血,肝素抗凝,測各項指標(biāo)。
1.4 測試指標(biāo)及方法
(1)超氧化物歧化酶(SOD)測定采用黃嘌呤氧化酶法,丙二醛測定采用硫代巴比妥酸法,谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)測定采用DTNB法。均按南京建成生物工程研究所提供的測試盒說明書操作。
(2)紅細(xì)胞DNA損傷采用彗星分析法,即在熒光顯微鏡下,每片隨機(jī)觀察約100個紅細(xì)胞,依據(jù)DNA在“彗星細(xì)胞”尾部的量判定DNA損傷程度。在西北師范大學(xué)生命科學(xué)院實(shí)驗(yàn)室測試。
1.5 數(shù)據(jù)處理
采用Microsoft Excel軟件對所測數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理,對各指標(biāo)與對照組之間的差異進(jìn)行組間t檢驗(yàn),顯著性水平定為P<0.05。
2.1 沙棘油對大鼠力竭游泳時間的影響(見表1)
表1 沙棘油對大鼠力竭游泳時間的影響(±s,h)
表1 沙棘油對大鼠力竭游泳時間的影響(±s,h)
注:*表示與對照1組比較P<0.05,#表示與實(shí)驗(yàn)1組比較P<0.05,Δ表示與對照2組比較P<0.05
組別動物數(shù)力竭游泳時間對照1組8 4.15±0.68#Δ實(shí)驗(yàn)1組8 4.94±0.53*Δ對照2組8 5.11±0.55*#實(shí)驗(yàn)2組8 5.68±0.49#Δ
表1顯示,與對照組比較,實(shí)驗(yàn)組力竭游泳時間明顯延長,且有顯著性差異(P<0.05);與對照1組、實(shí)驗(yàn)1組比較,對照2組、實(shí)驗(yàn)2組力竭游泳時間明顯延長,且有顯著性差異(P<0.05)。
2.2 沙棘油對大鼠紅細(xì)胞中SOD、CSH-Px活性及MDA含量的影響(見表2)
表2 沙棘油對大鼠紅細(xì)胞中SOD、CSH-Px活性及MDA含量的影響(±s)
表2 沙棘油對大鼠紅細(xì)胞中SOD、CSH-Px活性及MDA含量的影響(±s)
注:*表示與對照1組比較P<0.05,#表示與實(shí)驗(yàn)1組比較P<0.05,Δ表示與對照2組比較P<0.05
組別SOD(U/g·Hb)MDA(nmol/ml)GSH-PX(U/ml)對照1組1517.27±218.68*2.89±0.23*40.33±1.21*Δ實(shí)驗(yàn)1組1 765.42±242.01*2.76±0.19*43.80±1.54*Δ對照2組1684.65±189.47*2.70±0.26*46.21±0.70*Δ實(shí)驗(yàn)2組1 838.56±210.45Δ2.24±0.32Δ48.80±1.32#Δ
2.2.1 對紅細(xì)胞SOD活性的影響從表2可以看出,兩個對照組相比,SOD活性無顯著差異;而1組與2組相比,SOD活性均無顯著性差異,但實(shí)驗(yàn)2組高于實(shí)驗(yàn)1組。
2.2.2 對紅細(xì)胞MDA含量的影響表2顯示,實(shí)驗(yàn)組與對照組MDA含量均有顯著性差異(P<0.05);對照組雖有下降趨勢,但無顯著性差異;與1組比較,對照2組無顯著性差異,但有下降趨勢,實(shí)驗(yàn)2組有顯著性差異。
2.2.3 對紅細(xì)胞GSH-Px活性的影響表2顯示,與對照組比較,實(shí)驗(yàn)組均有顯著性差異(P<0.05);與1組比較,2組GSH-Px活性有顯著性差異(P<0.05)。
2.3 沙棘油對運(yùn)動訓(xùn)練大鼠紅細(xì)胞中DNA的作用(見表3)
表3 運(yùn)動對大鼠紅細(xì)胞DNA損傷實(shí)驗(yàn)結(jié)果(±s)
表3 運(yùn)動對大鼠紅細(xì)胞DNA損傷實(shí)驗(yàn)結(jié)果(±s)
注:*表示與對照1組比較P<0.05,#表示與實(shí)驗(yàn)1組比較P<0.05,Δ表示與對照2組比較P<0.05
組別計數(shù)細(xì)胞(個)彗星樣紅細(xì)胞出現(xiàn)率(%)對照1組100 28.48±1.77*Δ實(shí)驗(yàn)1組100 20.85±1.34*Δ對照2組100 26.37±5.32*Δ實(shí)驗(yàn)2組100 18.64±4.36#Δ
表3顯示,與對照組相比較:實(shí)驗(yàn)1組與實(shí)驗(yàn)2組均有顯著性差異(P<0.05)。與1組比較,對照2組與實(shí)驗(yàn)2組均有顯著性差異(P<0.05)。
3.1 沙棘油對大鼠力竭游泳時間的影響
大鼠力竭游泳時間是機(jī)體抗應(yīng)激能力、抗疲勞能力等的綜合體現(xiàn)。研究結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)2組的力竭游泳時間明顯長于對照2組(P<0.05),可以推測沙棘油具有一定的抗疲勞作用。這主要是由于沙棘油含有黃酮類、VE、VC、SOD等抗氧化劑,這些成分能有效清除運(yùn)動過程中產(chǎn)生的自由基,保護(hù)紅細(xì)胞膜系統(tǒng)的完整性,防止脂質(zhì)過氧化反應(yīng)等。
3.2 沙棘油對運(yùn)動訓(xùn)練大鼠紅細(xì)胞SOD、GSH-Px活性的影響
長時間劇烈運(yùn)動需要機(jī)體處于高氧環(huán)境,導(dǎo)致氧自由基生成過多,攻擊紅細(xì)胞膜,使之結(jié)構(gòu)受損。而紅細(xì)胞中的SOD、GSH-Px能快速清除氧自由基,在運(yùn)動中活性明顯增高,對于消除自由基對紅細(xì)胞的損傷、改善紅細(xì)胞的運(yùn)氧能力、延緩運(yùn)動性疲勞的發(fā)生具有重要意義,同時直接影響能量的釋放和細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。于基國[2]認(rèn)為酶活性的改變與訓(xùn)練強(qiáng)度及時間有關(guān)。李磊[3]研究發(fā)現(xiàn),大強(qiáng)度訓(xùn)練使大鼠紅細(xì)胞抗氧化酶產(chǎn)生適應(yīng)性變化,表現(xiàn)為SOD活性明顯增強(qiáng)、GSH-Px活性無顯著變化,改善紅細(xì)胞的運(yùn)氧功能,延緩運(yùn)動性疲勞的發(fā)生。章江洲[4]發(fā)現(xiàn)力竭運(yùn)動引起SOD活性升高可能是機(jī)體對長時間劇烈運(yùn)動產(chǎn)生的自由基的防御反應(yīng)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,大強(qiáng)度耐力訓(xùn)練可使大鼠紅細(xì)胞中SOD、GSH-Px活性升高,這可能是因?yàn)椴煌拿富钚詫\(yùn)動刺激的適應(yīng)能力不同而造成的。服用沙棘油后,不論是實(shí)驗(yàn)1組還是實(shí)驗(yàn)2組,這3種抗氧化酶活性都明顯升高,說明沙棘油可提高紅細(xì)胞的抗氧化酶活性,其原因可能是:沙棘油作為外源性抗氧化劑,可以加快紅細(xì)胞中自由基的清除;運(yùn)動可產(chǎn)生自由基,自由基又可使抗氧化酶活性代償性增強(qiáng);通過其他代償調(diào)節(jié)提高細(xì)胞中SOD、GSH-Px的合成能力。
3.3 沙棘油對運(yùn)動訓(xùn)練大鼠紅細(xì)胞MDA含量的影響
MDA是機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)發(fā)生過氧化反應(yīng)的重要代謝產(chǎn)物,其對細(xì)胞具有嚴(yán)重的毒性作用。紅細(xì)胞含量也可在一定程度上反映體內(nèi)自由基產(chǎn)生和清除情況,因?yàn)橹|(zhì)過氧化起因于結(jié)合或游離狀態(tài)的不飽和脂肪酸與自由基的相互作用[5]。實(shí)驗(yàn)研究表明,運(yùn)動狀態(tài)下組織MDA含量低于安靜狀態(tài)。
本實(shí)驗(yàn)研究表明,實(shí)驗(yàn)1組、實(shí)驗(yàn)2組紅細(xì)胞MDA含量分別低于對照1組、對照2組,說明沙棘油對大鼠體內(nèi)脂質(zhì)過氧化有非常明顯的抑制作用。其機(jī)制是:沙棘油含有的黃酮、二菇酚類等成分,具有很強(qiáng)的抗氧化作用;沙棘油增強(qiáng)了紅細(xì)胞中SOD、GSH-Px等抗氧化酶的活性,加快了自由基的清除。
3.4 沙棘油對運(yùn)動訓(xùn)練大鼠紅細(xì)胞DNA損傷的保護(hù)作用
彗星實(shí)驗(yàn)(Comet Assay)[6,7]即單細(xì)胞凝膠電泳(single cell gel electrophoresis,SCGE)實(shí)驗(yàn),是一種靈敏的DNA損傷檢測方法。各種因素誘發(fā)DNA損傷產(chǎn)生斷鏈時,會影響DNA高級結(jié)構(gòu),使其超螺旋松散破壞。在細(xì)胞裂解液作用下,細(xì)胞膜、核膜及其他膜結(jié)構(gòu)受到破壞,細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、RNA及其他成分均可進(jìn)入凝膠而擴(kuò)散到裂解液中,而核DNA分子量很大,不能進(jìn)入凝膠,只能留在原位。在堿處理和堿性電泳作用下DNA解螺旋,使DNA的斷鏈和堿易變性DNA片斷從嚴(yán)密的超螺旋結(jié)構(gòu)中釋放出來。由于這些DNA斷鏈分子量小且堿易變性DNA為單鏈,所以在電泳電場中就可以離開核DNA,在凝膠分子篩中向陽極移動,產(chǎn)生一個尾狀帶,而未損傷的DNA部分保持球形,并停留在原位,二者形成彗星狀圖像。因此,可根據(jù)彗星樣細(xì)胞發(fā)生率(拖尾率)和彗星尾長(拖尾尾長),定量檢測單個細(xì)胞中的核DNA損傷程度,進(jìn)而了解整個細(xì)胞、組織、器官內(nèi)DNA損傷程度。運(yùn)動造成的細(xì)胞DNA損傷與運(yùn)動強(qiáng)度、運(yùn)動方式等有關(guān)[8],我們利用單細(xì)胞凝膠電泳技術(shù)對運(yùn)動大鼠紅細(xì)胞內(nèi)的DNA損傷情況進(jìn)行觀察,發(fā)現(xiàn)力竭運(yùn)動后對照2組紅細(xì)胞中DNA的損傷程度明顯低于對照1組,實(shí)驗(yàn)1組明顯低于對照組,可能是由于沙棘油含大量黃酮、VC、VE等對抗自由基抗氧化作用的物質(zhì),從而使紅細(xì)胞盡可能避免自由基的損傷。
(1)沙棘油可以明顯提高大鼠游泳至力竭的時間,說明沙棘油對促進(jìn)運(yùn)動能力的提高具有積極意義。
(2)服用沙棘油可明顯提高大鼠紅細(xì)胞SOD和GSH-Px活性,降低MDA含量,說明沙棘油對增強(qiáng)紅細(xì)胞抗氧化系統(tǒng)的能力、減少自由基對機(jī)體的損傷具有重要作用,同時對延緩運(yùn)動性疲勞的發(fā)生和發(fā)展具有積極作用。
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G424.31
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1671-1246(2015)01-0118-03