醋酸洗必泰沖洗劑的制備及質(zhì)量控制

王宗春，劉 紅(武漢大學(xué)人民醫(yī)院藥學(xué)部，武漢 430060;湖北大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院)

醋酸洗必泰為消毒防腐藥，通過(guò)吸附在細(xì)菌胞漿膜使細(xì)胞內(nèi)容物漏出而起到抑菌和殺菌作用，對(duì)葡萄球菌、變異鏈球菌、唾液鏈球菌、白色念珠菌、大腸桿菌、厭氧丙酸菌等呈高度敏感，《湖北省醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑規(guī)范》［1］收載了該藥物的洗劑。為了擴(kuò)大醋酸洗必泰的臨床用途，本文配制了其沖洗劑，以用于皮膚及黏膜的消毒、創(chuàng)面感染、陰道感染和子宮頸糜爛的沖洗，并考察了其質(zhì)量控制方法，重點(diǎn)對(duì)鱟試劑方法用于其細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的可行性進(jìn)行研究，報(bào)道如下。

1 儀器與材料

1.1 儀器

UV-2201型紫外分光光度計(jì)(日本島津);TG328A型電子分析天平(上海天平儀器廠);PHS-25C型數(shù)顯酸度計(jì)(上海越磁電子科技有限公司);SW-80A型旋渦混合器(上海醫(yī)科大學(xué)儀器廠);微量移液器(100-1 000 μl)(賽黙飛世爾科技有限公司);恒溫水浴箱(上海卓爵儀器設(shè)備有限公司);細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用具(湛江安度斯生物有限公司)。

1.2 藥品與試劑

醋酸洗必泰(錦州九泰藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號(hào)120901);細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，每支10 EU，批號(hào)2012-10);鱟試劑(TAL，廈門鱟試劑實(shí)驗(yàn)廠，規(guī)格 0.10 ml，批號(hào)121007，靈敏度0.50 EU/ml);鱟試劑(湛江安度斯生物有限公司，規(guī)格0.10 ml，批號(hào)121226，靈敏度0.50 EU/ml);細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水(BET水，廈門鱟試劑實(shí)驗(yàn)廠，每支2 ml，批號(hào)121018)，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 處方與配制工藝

2.1.1 處方 參照《湖北省醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑規(guī)范》2011年版醋酸洗必泰洗劑制備方法，處方為醋酸洗必泰 0.50 g，注射用水加至 1 000 ml。

2.1.2 配制工藝 稱取醋酸洗必泰0.50 g，溶解于約800 ml熱注射用水中，加入0.20%(W/V)活性碳，加熱煮沸20 min，冷卻至50℃左右，濾過(guò)脫碳，自濾器上添加注射用水至1 000 ml，攪拌均勻，灌裝于100 ml玻璃瓶，軋蓋，流通蒸汽滅菌100℃，30 min，檢查，貼簽，即得。共配制3批，批號(hào)分別為20130105、20130114、20130121。

2.2 一般質(zhì)量控制

2.2.1 性狀 本品為無(wú)色的澄明溶液，味苦。

2.2.2 醋酸洗必泰鑒別 方法一:取本品5 ml，加重鉻酸鉀試液1滴，產(chǎn)生黃色沉淀，加稀硝酸數(shù)滴，沉淀即溶解;方法二:取本品5 ml，加硫酸銅試液2滴，加熱，產(chǎn)生淡紫色的絮狀物。

2.2.3 檢查 符合沖洗劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定。

2.2.4 含量測(cè)定 參照《湖北省醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑規(guī)范》2011年版醋酸洗必泰洗劑含量測(cè)定方法，精密量取本品2 ml，置100 ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，照分光光度法(《中國(guó)藥典》2010年版二部附錄ⅣA)，在254 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，按 C22H30C2N10·2C2H4O2的吸收系數(shù)(E1%1 cm)為447計(jì)算，3批樣品的含量測(cè)定結(jié)果分別為 0.50 mg/ml，0.49 mg/ml，0.50 mg/ml，均在標(biāo)示量(0.50 mg/ml)的 95.0%-105.0%范圍內(nèi)，含量檢測(cè)合格。

2.3 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的可行性研究

2.3.1 鱟試劑靈敏度復(fù)核 按照細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法鱟試劑靈敏度復(fù)核項(xiàng)對(duì)2批鱟試劑的標(biāo)示靈敏度進(jìn)行復(fù)核［2］，2批鱟試劑靈敏度的測(cè)定值 λc均在0.5λ -2.0λ(λ 為靈敏度標(biāo)示值)范圍之內(nèi)，靈敏度符合規(guī)定，可用于實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 鱟試劑靈敏度復(fù)核結(jié)果Table 1 The sensitivity test results of tachypleus amebocyte lysate

2.3.2 細(xì)菌內(nèi)毒素限值(L)的確定 中國(guó)藥典2010年版二部附錄ⅠS(洗劑，沖洗劑，灌腸劑)規(guī)定每1 ml沖洗劑中含細(xì)菌內(nèi)毒素應(yīng)小于0.50 EU，即醋酸洗必泰沖洗劑的細(xì)菌內(nèi)毒素限值(L)為0.50 EU/ml。

2.3.3 樣品最大有效稀釋倍數(shù)(MVD)的確定 樣品最大有效稀釋倍數(shù)MVD=L/λ，其中λ為鱟試劑靈敏度，L為細(xì)菌內(nèi)毒素限值(0.50 EU/ml)，目前市售鱟試劑的靈敏度 λ 常為 0.50，0.25，0.125，0.06，0.03 EU/ml，對(duì)應(yīng)的樣品 MVD 為 1(原液)，2，4，8，16。

2.3.4 干擾預(yù)試驗(yàn) 為了初步評(píng)價(jià)樣品濃度對(duì)鱟試劑與細(xì)菌內(nèi)毒素之間凝集反應(yīng)的干擾程度及干擾性質(zhì)，以便篩選出對(duì)檢查無(wú)干擾的樣品濃度范圍及相應(yīng)的鱟試劑靈敏度，避免鱟試劑的浪費(fèi)，選擇批號(hào)為20130105的樣品進(jìn)行干擾預(yù)試驗(yàn)。用BET水稀釋醋酸洗必泰沖洗劑至1(原液)，2，4，8，16倍的溶液，用酸度計(jì)測(cè)定pH值，均在6.30-6.60范圍內(nèi)，符合細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的pH值要求，不需要調(diào)節(jié)pH值，記為供試品陰性對(duì)照(NPC)系列。同時(shí)配制含有1.0 EU/ml(2λ)細(xì)菌內(nèi)毒素的上述稀釋倍數(shù)系列溶液，記為供試品陽(yáng)性對(duì)照(PPC)系列［3，4］。

取靈敏度為0.5 EU/ml的兩個(gè)廠家的鱟試劑與上述NPC和PPC系列溶液進(jìn)行反應(yīng)，每一稀釋倍數(shù)重復(fù)兩管，設(shè)立陽(yáng)性對(duì)照(PC)和陰性對(duì)照(NC)。

結(jié)果顯示質(zhì)量濃度為0.5 mg/ml及以下的醋酸洗必泰沖洗液對(duì)鱟試劑與細(xì)菌內(nèi)毒素之間的凝集反應(yīng)既無(wú)增強(qiáng)作用，也無(wú)抑制作用。

2.3.5 正式干擾試驗(yàn) 根據(jù)干擾預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，可以直接選擇3個(gè)批號(hào)的樣品原液，用λ為0.50 EU/ml的鱟試劑進(jìn)行以下正式干擾試驗(yàn)。用供試品原液及BET水分別配制細(xì)菌內(nèi)毒素最終濃度為1.00，0.50，0.25，0.125 EU/ml的系列溶液，取 0.10 ml加入到已復(fù)溶的兩個(gè)不同廠家生產(chǎn)的鱟試劑(靈敏度λ為0.50 EU/ml)管內(nèi)，每個(gè)濃度平行做4管，另取供試品溶液做2支陰性對(duì)照管，進(jìn)行干擾確證試驗(yàn)［5，6］。

表2 結(jié)果顯示，Et/Es在0.5-2之間(Es為用BET水制成的細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液反應(yīng)終點(diǎn)濃度的幾何平均值，Et為用供試品溶液制成的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液反應(yīng)終點(diǎn)濃度的幾何平均值)，按照中國(guó)藥典2010年版(二部)判斷標(biāo)準(zhǔn)，供試品原液對(duì)鱟試劑與細(xì)菌內(nèi)毒素之間的凝集反應(yīng)無(wú)干擾作用，可以使用鱟試劑方法檢查醋酸洗必泰沖洗劑中細(xì)菌內(nèi)毒素，即細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法適用于本品，無(wú)需進(jìn)行熱原檢查［7］。

表2 醋酸洗必泰沖洗劑干擾試驗(yàn)結(jié)果Table 2 Interference test results of chlorhexidine acetate irrigation solution

2.4 穩(wěn)定性考察

將樣品(批號(hào):20130105)在室溫條件下放置12個(gè)月，并分別于 1，3，6，9，12 月取樣，考察沖洗劑的外觀、含量變化，重點(diǎn)進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素限度檢查，并與0月結(jié)果進(jìn)行比較。表3結(jié)果顯示，在室溫留樣條件下放置12個(gè)月，醋酸洗必泰沖洗劑的各項(xiàng)考察指標(biāo)均無(wú)明顯變化，表明醋酸洗必泰沖洗劑穩(wěn)定性良好。

表3 醋酸洗必泰沖洗劑室溫留樣考察結(jié)果Table 3 Storage stability of chlorhexidine acetate irrigation solution at room temperature

3 討論

由于醋酸洗必泰沖洗劑臨床主要用于各種創(chuàng)傷、滲出、糜爛的開(kāi)放性感染性皮膚病及傷口沖洗，在配制過(guò)程中應(yīng)嚴(yán)格按照無(wú)菌操作規(guī)程，對(duì)各種可能污染熱原的途徑進(jìn)行嚴(yán)格控制，并通過(guò)加入活性碳煮沸30 min吸附熱原。

在質(zhì)量控制方面，考慮到?jīng)_洗劑用量大，并且用于創(chuàng)面的沖冼，中國(guó)藥典2010年版二部附錄明確規(guī)定沖洗劑需要進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查(鱟試劑凝膠法)，不能進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的沖洗劑應(yīng)進(jìn)行熱原檢查(家兔法)。家兔法存在試驗(yàn)條件要求較高、操作繁瑣、費(fèi)時(shí)費(fèi)力且影響因素較多，而細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法具有靈敏度高、重現(xiàn)性好、簡(jiǎn)便易行等優(yōu)點(diǎn)，但是細(xì)菌內(nèi)毒素檢查是否可行的前提是供試品在滿足限量檢查要求的濃度下對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查不產(chǎn)生干擾。

如果樣品在高濃度(低稀釋倍數(shù))時(shí)對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)不產(chǎn)生干擾，則在低濃度(高稀釋倍數(shù))時(shí)也不產(chǎn)生干擾。因此，理論上可以選擇靈敏度λ為0.50-0.03 EU/ml的鱟試劑，將樣品稀釋到相應(yīng)的倍數(shù)(1-16倍)進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查。但在實(shí)際檢驗(yàn)過(guò)程中，為了盡量減少操作步驟(稀釋)和降低對(duì)鱟試劑靈敏度的要求，可以選擇靈敏度λ為0.50 EU/ml的鱟試劑，對(duì)醋酸洗必泰沖洗劑原液直接進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查。

［1］湖北省食品藥品監(jiān)督管理局.湖北省醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑規(guī)范2011年版［M］.武漢:湖北省科學(xué)技術(shù)出版社，2011:355-356.

［2］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2010年版(二部)［M］.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:附錄88-91.

［3］馬建麗，樸晉華，陳新文，等.注射用復(fù)方甘草酸苷細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法的研究［J］.山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，41(12):1047-1049.

［4］ 秦美蓉，王平，陳潤(rùn)樺，等.藥用輔料山梨醇(供注射用)的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法［J］.中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2014，31(2):207-209.

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