養(yǎng)殖場有機廢棄物處理機處理病害生豬的生物安全評估

曾中華

（漳州市動物疫病預防控制中心，福建漳州 363000）

養(yǎng)殖場有機廢棄物處理機處理病害生豬的生物安全評估

曾中華

（漳州市動物疫病預防控制中心，福建漳州 363000）

為做好畜禽養(yǎng)殖場有機廢棄物處理機處理病害生豬的生物安全評估，對處理前原料、處理后成品和冷凝水開展4種病毒、2種細菌和蛔蟲卵檢測，評估處理機的生物安全水平。結果表明，在原料中檢出核酸陽性豬瘟病毒1批次、藍耳病病毒13批次、偽狂犬病毒3批次、圓環(huán)病毒12批次；在經處理過的材料中未檢出上述4種病毒和沙門氏桿菌，每克成品中的大腸桿菌最大可能數(shù)小于3個，蛔蟲卵死亡率超過97%，符合有機肥行業(yè)標準；在冷凝水中未檢出上述4種病毒、沙門氏桿菌和蛔蟲卵，每毫升冷凝水中大腸桿菌最大可能數(shù)小于3個。綜合分析，畜禽養(yǎng)殖場有機廢棄物處理機（TY-FCW-26型）處理病害生豬，生物安全有保障，能夠實現(xiàn)無害化處理和資源化利用。

病害生豬；畜禽養(yǎng)殖場有機廢棄物處理機；病毒；細菌；蛔蟲卵

病死豬的無害化處理已引起社會的廣泛關注。為構建病死豬無害化處理和監(jiān)管的長效機制，防止動物疫病擴散蔓延，保障畜牧業(yè)健康發(fā)展，保障豬肉產品質量和公共衛(wèi)生安全，福建漳州市動物疫病預防控制中心與漳州市天洋機械有限公司聯(lián)合研制出畜禽養(yǎng)殖場有機廢棄物處理機（TY-FCW-26型），并構建了病害生豬和病害生豬產品處理技術和管理模式。病害生豬及其產品經畜禽養(yǎng)殖場有機廢棄物處理機切割、粉碎、加溫、發(fā)酵、滅菌、烘干等“六道”工序處理，24h后生產出高檔有機肥料，實現(xiàn)了資源循環(huán)利用，成為漳州市無害化處理的主要模式。本研究隨機選擇4家使用單位，每家選擇2臺處理機，每臺2批次，對處理前原料、處理后成品和冷凝水的部分細菌、病毒和蛔蟲卵進行檢測，評估處理機的生物安全水平。

1 儀器與材料

病害生豬：薌城區(qū)天寶鎮(zhèn)正元農村專業(yè)合作社、龍海市益民農業(yè)科技有限公司、南靖縣禾益畜禽廢棄物集中處理場、南靖縣牧益畜禽無害化處理場等4家使用單位提供；畜禽養(yǎng)殖場有機廢棄物處理機：漳州市天洋機械有限公司生產，型號TY-FCW-26型；熒光定量PCR擴增儀：凱杰生物技術有限公司生產；光學顯微鏡：奧林巴斯（中國）有限公司生產；大腸桿菌標準菌株：中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所提供；豬繁殖與呼吸綜合征病毒RT-PCR檢測試劑盒（批號：PRRS20140217P）、豬瘟病毒通用型RT-PCR檢測試劑盒（批號：CSF20140114P）、豬偽狂犬病毒PCR檢測試劑盒（批號：PR20140218P）、豬圓環(huán)病毒檢測試劑盒（批號：PC20140121P）：北京世紀元亨動物防疫技術有限公司生產。

2 實驗方法

2.1 模擬試驗

選取4頭體重25kg以上的病害生豬，采集頜下淋巴結、腹股溝淋巴結、脾臟、扁桃體等組織，置于已滅菌的采樣杯中；將剖檢的4頭病害生豬和另外1000kg病害生豬及500kg谷糠，加入處理機料槽內，啟動處理機，按國家標準GB/T 6679-2003《固體化工產品采樣通則》于運行后4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24h各采樣500g，混合均勻后自然晾干，置于已滅菌的采樣袋中，冷鏈送往實驗室檢測。

2.2 處理前原料的采集

在4家畜禽養(yǎng)殖場有機廢棄物處理機使用單位，每家選擇2臺處理機，每臺2批次，每批次選取4頭體重25kg以上的病害生豬，采集頜下淋巴結、腹股溝淋巴結、脾臟、扁桃體等組織，置于已滅菌的采樣杯中，冷鏈送往實驗室檢測。

2.3 處理后成品采樣

將每批次剖檢的4頭病害生豬和另外1000kg病害生豬及500kg谷糠，加入處理機料槽內，啟動處理機，設備自動運行24h后停機，按國家標準GB/T 6679-2003《固體化工產品采樣通則》進行采樣，每臺每批次無菌采集出料初始、出料中期、出料后期三個點的處理后成品各500g，混合均勻后自然晾干，置于已滅菌的采樣袋中，冷鏈送往實驗室檢測。

2.4 冷凝水采樣

每臺每批次用滅菌試管無菌采集處理機尾氣的冷凝水20mL，冷鏈送往實驗室檢測。

2.5 病毒、細菌和蟲卵檢測

2.5.1 四種病毒的檢測。按照4種病毒的檢測試劑盒說明書進行檢測。

2.5.2 大腸桿菌MPN計數(shù)。按照國家標準GB/T 19524.1-2004《肥料中糞大腸菌群的測定》進行檢測。

2.5.3 沙門氏菌的檢測。按照農業(yè)標準NY/T 550-2002《動物和動物產品沙門氏菌檢測方法》進行檢測。

2.5.4 蛔蟲卵死亡率的測定。按照國家標準GB/T 19524.2-2004《肥料中蛔蟲卵死亡率的測定》進行檢測。

3 實驗結果

3.1 從調出的溫度記錄看，在24h工作時間內處理機的溫度均在設定的范圍內，可以滿足工作需求。

3.2 處理機運行12h后4種病毒均已完全滅活（具體見表1）。

表1 模擬試驗結果

3.3 16批次的原料中檢出核酸陽性豬瘟病毒1批次、藍耳病病毒13批次、偽狂犬病毒3批次、圓環(huán)病毒12批次 ；成品和冷凝水中未檢出4種病毒（具體見表2、圖1-8）。

表2 原料中4種病毒PCR檢測結果

圖1 PCR電泳圖（樣品編號為16、19、22的樣品檢出藍耳病毒核酸陽性）

圖2 PCR電泳圖（樣品編號為19的樣品檢出豬瘟核酸陽性）

圖3 PCR電泳圖（樣品編號為1、4、13、25、28、31、34、37的樣品檢出圓環(huán)病毒核酸陽性）

圖4 PCR電泳圖（樣品編號為16、19、22的樣品檢出圓環(huán)病毒核酸陽性）

圖5 PCR電泳圖（樣品編號為10的樣品檢出圓環(huán)病毒核酸陽性）

圖6 PCR電泳圖（樣品編號為1、4、25、28、31、34的樣品檢出藍耳病毒核酸陽性）

圖7 PCR電泳圖（樣品編號為7、10、40、43的樣品檢出藍耳病毒核酸陽性）

圖8 PCR電泳圖（樣品編號為16、19、22的樣品檢出偽狂犬病毒核酸陽性）

3.4 16批次成品中，均未檢出沙門氏菌，大腸桿菌MPN數(shù)均小于3個，蛔蟲卵死亡率都超過95%，符合NY 884-2012《生物有機肥》的行業(yè)標準；冷凝水中，16批次均未檢出沙門氏菌與蛔蟲卵（具體見表3）。

對試驗結果進行單因素方差分析，成品、冷凝水與原料之間的因變量陽性率均有顯著性差異（0.01＜P＜0.05）。

對試驗結果進行單因素方差分析，成品與冷凝水之間的大腸桿菌MPN數(shù)差異不顯著（P＞0.05）；鏡檢總卵數(shù)與鏡檢活卵數(shù)之間的蛔蟲卵死亡率差異極顯著（P＜0.01）。

表3 成品中2種細菌與蛔蟲卵死亡率檢測結果

4 分析討論

4.1 畜禽養(yǎng)殖場有機廢棄物處理機結合可換式動刀定刀切割粉碎攪拌技術、高溫發(fā)酵菌分解技術、電加熱導熱油技術、氣水分離技術、微波滅菌干燥技術，達到了徹底殺滅有害病原微生物、加熱均勻、節(jié)能省電、廢氣廢水零排放要求，實現(xiàn)了病害生豬及其產品的機械化、工廠化、無害化處理與資源化利用的目的，具有創(chuàng)新性、先進性和新穎性。

4.2 每批次選取4頭體重25kg以上的病害生豬，采集頜下淋巴結、腹股溝淋巴結、脾臟、扁桃體等組織檢測4種生豬常見病毒，檢測結果雖然無法代表本批次病害生豬攜帶病毒情況，但不影響對實驗結果的判斷。

4.3 4種病毒的PCR檢測結果中，16批次原料中有15批次檢出病毒核酸陽性，而在成品和冷凝水中均未檢測出4種病毒，說明畜禽養(yǎng)殖場有機廢棄物處理機能夠完全殺滅病害生豬攜帶的4種病毒，達到了無害化處理的目的。

4.4 2種細菌與蛔蟲卵死亡率檢測結果中，未檢測出沙門氏菌，大腸桿菌MPN數(shù)小于3個，蛔蟲

卵死亡率均大于95%，說明畜禽養(yǎng)殖場有機廢棄物處理機能夠殺滅病害生豬中絕大部分的大腸桿菌與蛔蟲卵，成品達到有機肥行業(yè)標準。

5 結論

畜禽養(yǎng)殖場有機廢棄物處理機（TY-FCW-26型）能夠有效殺滅豬瘟病毒、圓環(huán)病毒、偽狂犬病毒、藍耳病毒及大腸桿菌、沙門氏菌和蛔蟲卵，生物安全水平高，處理后的成品符合高檔有機肥料行業(yè)標準，實現(xiàn)了病害生豬及其產品無害化處理和資源化處理。

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Biosafety Assessment of Organic Waste Processor for Treatment of Materials from Diseased Swine in Livestock Farms

Zeng Zhonghua
（Zhangzhou Animal Disease Prevention and Control Center，Zhangzhou，F(xiàn)ujian 363000）

To assess biosafety of the organic waste processor for treatment of materials from diseased swine in livestock farms，samples of pre-process and processed materials and condensed water were detected for 4 viruses，2 bacteria and ascarid eggs. The results showed that CSFV-RNA，PRRSV-RNA，PRV-RNA and PCV-RNA were detected respectively in 1，13，3 and 12 batches of the pre-processed materials；none of the said 4 virus-RNAs and no Salmonella were detected in all the processed materials；MPN of E. coli was less than 3/g processed material and ascarid egg mortality was greater than 97%，which meet the organic fertilizer standard; none of the said 4 virus-RNAs，no Salmonella and ascarid egg were detected in condensed water and MPN of E. coli was less than 3/mL condensed water. Comprehensive analysis suggested that biosafety of the organic waste processor（Type TY-FCW-26）for treatment of materials from diseased swine in livestock farms could be guaranteed，and biosafety disposal and resource utilization could be expectedly realized.

diseased swine；organic waste processor；virus；bacteria；ascaris egg

S851.23 文獻識別碼：A

1005-944X（2015）06-0018-05

2013年漳州市第一批科技計劃項目（ZZ2013070）