丹參對(duì)人口腔黏膜白斑中MMP-2及MMP-9表達(dá)的影響

李 育

(重慶市開(kāi)縣人民醫(yī)院口腔科，重慶開(kāi)縣 405400)

口腔黏膜白斑病(OLK)是以口腔黏膜過(guò)度角化進(jìn)而形成灰白色或乳白色斑狀病變的一種常見(jiàn)疾病，好發(fā)于頰、舌、唇的黏膜上，有時(shí)也可發(fā)生在硬腭和牙齦?；颊咴缙谕ǔ２o(wú)明顯自覺(jué)癥狀，表現(xiàn)為大小不一、光滑、稍突出黏膜表面的乳白色斑，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)可逐漸增大變厚、變粗糙。其發(fā)病原因和機(jī)制尚不明確，但近年來(lái)的研究認(rèn)為與嗜煙、嗜酒、局部有長(zhǎng)期的機(jī)械性刺激(如不適合的假牙、殘留牙冠牙根等)以及維生素A缺乏、內(nèi)分泌功能紊亂、霉菌感染等導(dǎo)致口腔黏膜上皮正常角化等有關(guān)［1-3］。目前OLK已成為公認(rèn)的癌前病變之一，其癌變率約為3% ～5%，而常用的手術(shù)、冷凍或口服維生素治療雖然可以明顯改善患者的臨床癥狀，但并不能作為控制其癌變的有效手段。大量的研究表明［4-5］，丹參中的有效成分具有顯著的抗癌作用，因此我院自2013年開(kāi)始給予OLK患者口服丹參片治療，通過(guò)比較治療前后口腔黏膜白斑中MMP-2及MMP-9水平的變化對(duì)丹參在控制患者癌變進(jìn)展的有效性進(jìn)行探討。相關(guān)研究?jī)?nèi)容和結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料 選取2013年2月—2014年3月我院收治的112例口腔黏膜白斑患者以及100例同期口腔檢查正常者為研究對(duì)象，分別列為病理組和正常組。病理組112例患者均由病理檢驗(yàn)確診，并按醫(yī)囑進(jìn)行治療，自愿參與本次研究、完成隨訪和臨床檢測(cè)，排除伴有其他腫瘤以及嚴(yán)重內(nèi)科疾病患者。其中男性62例，女性50例，年齡20～58歲，平均年齡(43.48±6.72)歲，病程1～12個(gè)月，平均病程(5.12±3.05)個(gè)月，其中均質(zhì)型82例，顆粒型17例，其他類型13例;正常組100例患者中，男性57例，女性43例，年齡18～60歲，平均年齡(46.12±7.15)歲。兩組患者在性別、年齡方面并無(wú)明顯差異，具有可比性(P＞0.05)。

1.2 方法

1.2.1 研究方法 病理組患者確診后給予口服丹參片治療，一次3片，一天3次，連續(xù)治療2個(gè)月，采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)正常組口腔檢查當(dāng)天以及病理組患者治療前、治療2個(gè)月后、結(jié)束治療1個(gè)月后和結(jié)束治療3個(gè)月后口腔黏膜白斑中MMP-2及MMP-9表達(dá)，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行比較分析。病理組患者于治療2個(gè)月后對(duì)其臨床療效進(jìn)行評(píng)價(jià)。臨床療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)［6］:患者口腔黏膜白斑以及臨床癥狀完全消失為痊愈;患者口腔黏膜白斑面積減小≥2/3，且臨床癥狀顯著改善為顯效;患者口腔黏膜白斑面積減小1/3～2/3為有效;若患者口腔黏膜白斑面積減小＜1/3或無(wú)明顯變化者為無(wú)效。

1.2.2 檢測(cè)方法 病理組患者去病變處口腔黏膜，正常組患者則取左側(cè)口腔頰黏膜，所取組織黏膜均交由本院病理實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)。將采集的患者口腔黏膜組織用10%福爾馬林液固定，經(jīng)Leica EG116包埋機(jī)(德國(guó)徠卡公司生產(chǎn))石蠟包埋后切片，采用3%雙氧水孵育10 min后，運(yùn)用1%檸檬酸高壓抗原熱修復(fù)2 min，再經(jīng)5%正常牛血清孵育15 min后滴加一抗，在室溫下孵育60 min，滴加Max Vision試劑(福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司生產(chǎn))繼續(xù)室溫孵育20 min，給予DAB顯色，蘇木精染色，脫水后封片。所有組織切片均由固定兩名病理科主治醫(yī)師運(yùn)用Olympus-206024型顯微鏡(日本Olympus公司生產(chǎn))下進(jìn)行獨(dú)立雙盲觀察，判斷組織中MMP-2及MMP-9的陽(yáng)性表達(dá)情況。每張切片隨機(jī)選擇10個(gè)400倍視野計(jì)算細(xì)胞總數(shù)和細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)率，其染色陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)為細(xì)胞漿或胞膜呈現(xiàn)棕黃至棕褐色，并按半定量方法對(duì)其鏡下表現(xiàn)進(jìn)行評(píng)分，根據(jù)評(píng)分和細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)率對(duì)MMP-2及MMP-9的表達(dá)強(qiáng)度進(jìn)行判斷。細(xì)胞著色評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)［7］:0分為無(wú)著色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色;細(xì)胞陽(yáng)性率評(píng)分標(biāo)準(zhǔn):1% ～25%為1分，26% ～50%為2分，51% ～75%為3分，＞75%為4分。細(xì)胞著色評(píng)分與細(xì)胞陽(yáng)性率評(píng)分結(jié)果相加為總分，總分0～2分為陰性表達(dá)，≥3分則為陽(yáng)性表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 將所得結(jié)果錄入SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理及分析。其中計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，兩組間的比較采用成組t檢驗(yàn);其它計(jì)數(shù)類資料，采用例數(shù)和百分比表示，兩組間的比較采用χ2檢驗(yàn)，各時(shí)間點(diǎn)間的比較則為配對(duì)卡方檢驗(yàn)。以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者組織中MMP-2及MMP-9表達(dá)情況比較將正常組人口腔檢查當(dāng)天口腔黏膜組織以及病理組患者治療前、治療2個(gè)月后、結(jié)束治療1個(gè)月后和結(jié)束治療3個(gè)月后口腔黏膜白斑中的MMP-2及MMP-9表達(dá)情況進(jìn)行比較，其結(jié)果見(jiàn)表1。

表1結(jié)果顯示，病理組患者治療前其病灶組織MMP-2和MMP-9陽(yáng)性表達(dá)分別為67.9%和58.9%，相比正常組明顯增加(P＜0.05);而病理組患者治療2個(gè)月后其病灶組織MMP-2和MMP-9陽(yáng)性表達(dá)均較治療前有明顯降低，分別為54.5%和45.5%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05);結(jié)束治療后隨訪病理組患者口腔黏膜MMP-2和MMP-9陽(yáng)性表達(dá)相比治療2個(gè)月后有所降低，但差異并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

表1 兩組患者組織中MMP-2及MMP-9表達(dá)情況比較/例

2.2 病理組患者治療后臨床療效比較 對(duì)病理組患者治療2個(gè)月后、結(jié)束治療1個(gè)月以及結(jié)束治療3個(gè)月的臨床療效進(jìn)行比較分析，其結(jié)果見(jiàn)表2。結(jié)果顯示，患者治療2個(gè)月后其臨床總有效率可達(dá)97.3%，較結(jié)束治療后1個(gè)月有明顯增長(zhǎng)(P＜0.05)，而患者在結(jié)束治療3個(gè)月后回訪其臨床治療效果相比結(jié)束治療1個(gè)月并無(wú)明顯變化(P＞0.05)。

2.3 治療結(jié)束后一年隨訪結(jié)果 112例患者治療結(jié)束后一年隨訪人數(shù)104例，其中5例失聯(lián)，3例因其他非腫瘤疾病死亡。經(jīng)調(diào)查顯示，104例患者治療結(jié)束一年后僅有2例患者病發(fā)口腔頰癌，癌變率為1.9%，皆因口腔黏膜白斑癌變所致。

3 討論

基質(zhì)金屬蛋白酶(Matrix Metalloproteinase，MMP)是一組對(duì)鈣離子、鋅離子等金屬離子具有依賴性內(nèi)肽酶，因其幾乎能降解細(xì)胞外基質(zhì)中的各種蛋白成分，并能對(duì)腫瘤細(xì)胞侵襲的組織學(xué)屏障形成破壞，在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移中具有關(guān)鍵性的作用，由此MMP被認(rèn)為是腫瘤浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移過(guò)程中主要的蛋白水解酶，同時(shí)也是目前臨床研究認(rèn)為與腫瘤侵襲與轉(zhuǎn)移關(guān)系最為密切的一類蛋白水解酶，近年來(lái)已成為相關(guān)腫瘤疾病侵襲、轉(zhuǎn)移等研究的熱點(diǎn)。MMPs家族現(xiàn)已分離鑒別出26個(gè)成員，編號(hào)分別為MMP1～26。根據(jù)作用底物以及片斷同源性的不同被分為膠原酶、明膠酶、基質(zhì)降解素、基質(zhì)溶解素、furin活化的 MMP和其他分泌型 MMP。MMP-2和MMP-9則是膠原酶的成員，也是目前臨床對(duì)于MMPs與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移研究較為集中的兩項(xiàng)指標(biāo)［7-9］。

腫瘤的侵襲的轉(zhuǎn)移過(guò)程實(shí)際是癌細(xì)胞脫離原發(fā)癌組織后逐漸向其他組織侵襲和轉(zhuǎn)移的過(guò)程，在此過(guò)程中癌細(xì)胞須穿過(guò)細(xì)胞外基質(zhì)、血管壁基底膜等的組織學(xué)屏障，其中基底膜中的Ⅳ型膠原是具有獨(dú)特螺旋結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)，大部分的蛋白酶并無(wú)法對(duì)Ⅳ型膠原起到降解作用，而作為膠原酶的MMP-2和MMP-9則是目前研究認(rèn)為唯一能降解細(xì)胞外機(jī)制和基底膜中IV型膠原三螺旋結(jié)構(gòu)的酶，并可對(duì)基底膜的完整性起到破壞作用。因此MMP-2和MMP-9在組織中的表達(dá)是對(duì)組織結(jié)構(gòu)完整性以及是否具有屏障作用的判斷指標(biāo)。

表2 病理組112例患者治療后臨床療效比較/例(%)

口腔黏膜白斑是公認(rèn)的癌前病變，其癌變率約在3%～5%左右，正常口腔黏膜組織發(fā)展到口腔黏膜白斑進(jìn)而發(fā)生癌變是口腔腫瘤發(fā)生發(fā)展的主要途徑，其發(fā)病機(jī)制尚不明確，臨床大多采用手術(shù)、冷凍或口服維生素等治療改善臨床癥狀，但對(duì)于控制其癌變的作用卻不盡人意［10-11］。近年來(lái)的大量研究結(jié)果表明，丹參中的丹參酮可對(duì)多種腫瘤細(xì)胞如乳腺癌細(xì)胞、肝癌細(xì)胞、宮頸癌細(xì)胞、前列腺癌細(xì)胞、結(jié)腸癌細(xì)胞以及白血病細(xì)胞等的增殖起到抑制作用，誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡，進(jìn)而起到控制腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的作用［4-5］。而對(duì)于丹參是否可以有效治療口腔黏膜白斑這一癌前病變并控制其癌變進(jìn)展則少有研究。由此，鑒于MMP-2和MMP-9在腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移中的特異性作用以及丹參在各種腫瘤疾病治療中的有效性，我院從2013年開(kāi)始對(duì)口腔黏膜白斑病患者給予口服丹參片治療，并觀察治療過(guò)程中口腔黏膜組織中MMP-2和MMP-9表達(dá)的變化，對(duì)丹參在治療口腔黏膜白斑病以及抑制口腔黏膜癌變的作用進(jìn)行探討。結(jié)果顯示，病發(fā)口腔黏膜白斑的患者其口腔黏膜組織中MMP-2和MMP-9的陽(yáng)性表達(dá)率較正常人群明顯增高，提示在此狀態(tài)下患者口腔黏膜組織基底膜及其組織屏障可能均已遭到破壞，一旦被癌細(xì)胞侵襲則極易發(fā)生癌變。而患者在經(jīng)口服丹參片治療2個(gè)月后可見(jiàn)其MMP-2和MMP-9相比治療前有明顯下降，臨床有效率達(dá)到97.3%，且結(jié)束治療后一年內(nèi)的癌變發(fā)生率僅為1.9%，由此表明丹參治療可通過(guò)降低口腔黏膜組織中MMP-2和MMP-9的陽(yáng)性表達(dá)起到修復(fù)組織細(xì)胞、改善口腔黏膜白斑病患者臨床癥狀，同時(shí)對(duì)抑制其癌變的進(jìn)展其到積極的作用。

因此，我們認(rèn)為丹參治療可有效改善口腔黏膜白斑病患者的臨床癥狀，并對(duì)抑制其近期癌變進(jìn)展有積極的作用，遠(yuǎn)期抑制作用尚需進(jìn)一步隨訪觀察。

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