活動期炎癥性腸病患者英夫利西單抗治療前后的外周血淋巴細胞亞群狀況研究

歐雁方

(四川省德陽市旌陽區(qū)婦幼保健院檢驗科，四川德陽 618000)

炎癥性腸病(IBD)指累及直腸、回腸、結(jié)腸的腸道炎性疾病，包括潰瘍性結(jié)腸炎(UC)和克羅恩病(CD)［1－3］。IBD 的發(fā)病機制尚未明確，多數(shù)學(xué)者認為腸道黏膜免疫系統(tǒng)異常是IBD發(fā)病的主要原因［4－7］，且受遺傳、環(huán)境、感染等多因素影響。IBD患者主要表現(xiàn)為腹痛、腹瀉、血便、貧血等［8－10］，嚴重影響了患者的生活和工作。英夫利西單抗(IFX)是一種新型生物制劑，可減少糖皮質(zhì)激素的使用，促進IBD患者黏膜愈合。本研究通過對活動期炎癥性腸病患者給予IFX治療，觀察患者的炎性反應(yīng)及藥物療效，探討英夫利西單抗對活動期炎癥性腸病患者外周血淋巴細胞亞群的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2010年6月—2014年5月我院收治的活動期炎癥性腸病患者23例為研究對象，男9 例，女14 例，平均年齡(38.9 ±10.3)歲，其中UC患者15例，CD患者8例。選取同期到我院接受體檢的23例正常者作為健康組。入選標準:(1)符合中華醫(yī)學(xué)會消化病學(xué)分會制定的炎癥性腸病診斷標準［11］;(2)炎癥性腸病處于活動期;(3)所有參與者均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 治療方法 所有患者靜脈輸注5 mg·kg－1注射用英夫利西單抗(Cilag AG公司生產(chǎn)，每支100 mg)，首次給藥后的第2、6周再次給予同劑量藥物。采集健康組參與者的空腹靜脈血、UC組及CD組患者治療前后48 h內(nèi)的空腹靜脈血。

1.2.2 檢測方法 淋巴細胞亞群測定:使用EDTA抗凝管采集兩組患者的靜脈血，反向加樣法在Tru-COUNT管中加入50μL抗凝全血，即吸取血樣時加樣槍打到第2檔，放時打到第1檔。取20μL熒光抗體試劑(上海譜振生物科技公司提供)置于Tru-COUNT管中，室溫下避光放置20 min。加入450 μL FACS溶血素(1×)，充分混勻后室溫下避光放置20 min。利用FACSCanto II clinical軟件(流式細胞儀配套軟件，可進行一管式淋巴細胞亞群全套分析)分析外周血淋巴細胞亞群絕對計數(shù)，包括CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK(CD16+、CD56+)。

C反應(yīng)蛋白(CRP)測定:將1 mL緩沖液加入比濁管中，再加入20μL抗凝全血，混勻后將比濁管置入檢測孔，40s后加入反應(yīng)試劑(CRP試劑盒由上海信然生物技術(shù)公司提供)，充分混勻后測定CRP水平。

血沉(ESR)測定:采用Monitor－20全自動血沉儀(意大利vital生產(chǎn))測定ESR水平。

1.3 療效評定 UC組藥物療效評定［12］:臨床緩解:Mayo評分較治療前降低2分以上，癥狀基本消失;好轉(zhuǎn):Mayo評分較治療前降低2分以上，癥狀部分消失;無效:Mayo評分較治療前降低不足2分。CD組藥物療效評定［13］:臨床緩解:CDAI＜150分;好轉(zhuǎn):CDAI較治療前降低70分;無效:CDAI評分較治療前降低不足70分。UC患者與CD患者的活動度分別采用Mayo評分和CDAI評分進行評價。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 運用SPSS18.0軟件分別進行觀測資料的統(tǒng)計分析。其中的等級計數(shù)資料部分，組間比較為秩和檢驗。其它計量資料，多組間的比較為單因素方差分析+多重比較，組內(nèi)前后比較為配對t檢驗。檢驗水準設(shè)定為α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 藥物療效 UC組 15例，臨床緩解 5例(33.33%)，好 轉(zhuǎn) 3 例 (20.00%)，無 效 7 例(46.67%)，總有效率為53.33%;CD 組8 例，臨床緩解 1 例(12.50%)，好轉(zhuǎn) 5 例(62.50%)，無效 2例(25.00%)，總有效率為75.00%。見表1。

表1 藥物療效/n(%)

2.2 三組受試者治療后外周血淋巴細胞亞群比較治療前后 UC組的 CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK均低于健康組，治療后上述指標有所升高，且CD3+、CD4+與健康組的組間差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＞0.05)。治療前，CD 組患者的CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、NK與健康組的組間差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，治療后，患者 CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK明顯升高，且 CD3+、CD4+、CD8+、NK與健康組的組間差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。見表2。

表2 三組受試者治療前后外周血淋巴細胞亞群比較

2.3 14例治療有效和9例治療無效患者治療后的外周血淋巴細胞亞群比較 兩組患者的CD4+無明顯差異，治療有效組患者的CD3+、CD4+/CD8+、NK較無效組更高，CD8+明顯較低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0.05)。見表3。

表3 治療有效和治療無效患者治療后的外周血淋巴細胞亞群比較

2.4 IBD患者治療前后炎癥反應(yīng)及活動度比較治療前，患者 CRP 為(24.96 ±18.73)mg·L－1，ESR 為(27.83 ±10.14)mm·h－1，Mayo 為(12.73±2.09)分，CDAI為(287.34 ±65.98)分;治療后，患者 CRP 為(7.43 ±5.08)mg·L－1，ESR 為(12.76 ±6.42)mm·h－1，Mayo為(6.94 ±2.87)分，CDAI為(127.92 ±60.44)分。治療后，上述指標均有明顯改善，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。見表 4。

表4 IBD患者治療前后炎癥反應(yīng)及活動度比較

3 討論

IBD指腸道炎癥性疾病，其發(fā)病機制尚不十分明確，目前，腸道免疫調(diào)節(jié)機制紊亂被認為是IBD發(fā)病的直接原因［14］。IBD主要依靠藥物治療，包括氨基水楊酸制劑、免疫抑制劑及糖皮質(zhì)激素［15］。該病的治療理論上應(yīng)根據(jù)患者的分期進行，根據(jù)患者病情的嚴重程度，選取不同的藥物。患者在活動期應(yīng)主要以緩解癥狀、控制炎癥為主，在緩解期則應(yīng)繼續(xù)用藥以維持緩解，避免復(fù)發(fā)。糖皮質(zhì)激素是控制活動期IBD病情最有效的治療藥物，但部分患者可能出現(xiàn)糖皮質(zhì)激素依賴或抵抗［16］。外周血淋巴細胞亞群的功能及水平變化是IBD研究中的重要指標。目前，IBD外周血淋巴細胞亞群水平的研究仍局限于動物模型，臨床患者的相關(guān)研究較少［17］。本次研究以英夫利西單抗為治療藥物，探討藥物治療對活動期IBD患者的外周血淋巴細胞亞群的影響。

研究結(jié)果顯示，UC組總有效率為53.33%，CD組總有效率為75.00%。提示IFX在活動期IBD的治療上具有一定成效。本次研究中，我們著重對IBD患者及健康組入選者的靜脈血淋巴細胞亞群進行了測定。CD3+主要參與T細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)［18］，UC組和CD組CD3+水平均低于健康組，給予IFX治療后CD3+升高，接近正常水平。CD4+在免疫系統(tǒng)中扮演重要角色，IBD患者的CD4+水平低于健康組，提示IBD患者的免疫系統(tǒng)受到了嚴重損害，甚至可能引發(fā)感染。UC組治療前后的CD4+并無明顯變化，可能是因為CD4+的多個亞群，如Th1、Th17等數(shù)量增減抵消，導(dǎo)致CD4+整體水平變化不明顯。CD8+能夠識別抗原，通過發(fā)揮毒性殺傷作用將靶細胞溶解，殺傷病毒感染細胞。UC組和CD組患者的CD8+水平較高，可引發(fā)炎癥，造成腸道組織損傷。治療后患者的CD8+水平降低幅度較小，與健康組仍有明顯差異(P ＜0.05)，這與田雨等［19］的研究結(jié)果相似。為了進一步明確IFX對IBD患者CD8+的影響，還需要對CD8+亞群進行檢測，進行更深入研究。CD4+/CD8+是反映T淋巴細胞功能的重要指標，IBD患者的低CD4+/CD8+水平表明機體免疫機制紊亂。治療后患者的CD4+/CD8+比值明顯升高，提示IFX可通過調(diào)節(jié)相關(guān)細胞因子，改善IBD患者的免疫功能。NK細胞具有自然殺傷活性，能夠發(fā)揮調(diào)節(jié)免疫、殺傷靶細胞的作用［20］，是機體抗感染、抗腫瘤的重要免疫因素。IBD患者的NK水平明顯低于正常值，治療后得到改善，可見IFX可通過增強機體免疫功能發(fā)揮治療IBD的作用。研究中發(fā)現(xiàn)治療有效組患者的CD3+、CD4+/CD8+、NK較無效組更高，CD8+明顯較低。朱維銘等［21］認為，IFX作為TNF-α單抗，可選擇性地清除攻擊腸道黏膜的TNF-α，是IFX發(fā)揮作用的主要機制。治療結(jié)束后，我們對IBD患者的炎性反應(yīng)及活動度進行了評價，結(jié)果顯示，治療前，患者CRP為(24.96±18.73)mg·L－1，ESR 為(27.83 ±10.14)mm·h－1，Mayo為(12.73 ±2.09)分，CDAI為(287.34 ±65.98)分;治療后，患者 CRP 為(7.43 ±5.08)mg·L－1，ESR 為(12.76 ± 6.42)mm·h－1，Mayo 為(6.94 ±2.87)分，CDAI為(127.92 ±60.44)分。治療后，上述指標均有明顯改善，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。治療后IBD患者的炎性反應(yīng)降低，活動能力明顯升高，表明IFX在IBD的治療上具有明顯優(yōu)勢。本研究的部分結(jié)果與其他實驗有所出入，可能與淋巴細胞的影響因素有關(guān)。由于樣本容量較小，研究數(shù)據(jù)難免存在誤差，我們期待更嚴謹?shù)膶嶒炑芯?，為IFX對IBD外周血淋巴細胞亞群的影響機制提供權(quán)威的參考依據(jù)。

本組病例顯示，IFX治療后IBD患者的CD8+水平降低，CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK 均有所升高，接近正常水平。我們認為，今后在IFX對活動性IBD患者的外周血淋巴細胞亞群影響方面的研究可著重對CD4+及CD8+的各個亞群進行深入分析，以期明確IFX的具體作用機制。

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