新疆庫爾勒豬源鏈球菌分離培養(yǎng)及藥敏試驗

呂轉(zhuǎn)平剡根強（石河子大學(xué)動物科技學(xué)院 新疆 石河子 832003 ②巴音郭楞職業(yè)技術(shù)學(xué)院 新疆 庫爾勒）

新疆庫爾勒豬源鏈球菌分離培養(yǎng)及藥敏試驗

呂轉(zhuǎn)平①②剡根強①（①石河子大學(xué)動物科技學(xué)院 新疆 石河子 832003 ②巴音郭楞職業(yè)技術(shù)學(xué)院 新疆 庫爾勒）

本試驗利用常規(guī)的紙片法將20株臨床分離的鏈球菌菌株對11種日常藥物進行藥敏試驗，結(jié)果顯示，日常所使用的藥品中存在很多類對豬鏈球菌病的作用不明顯，豬鏈球菌菌株對其具有很強的抗性。試驗中所分離的菌株對恩諾沙星、青霉素鉀以及慶大霉素都存在超強的抗藥性，耐藥率已經(jīng)達到100%，氨芐西林的耐藥性雖然沒有達到100%，但是也表現(xiàn)出了極強的耐藥性；豬鏈球菌對卡那霉素、環(huán)丙沙星、頭孢噻呋和氟本尼考的敏感度較高，尤其是對環(huán)丙沙星的敏感度已經(jīng)達到100%，說明這幾種藥品對豬鏈球菌病的防治能夠起到一定的作用；豬鏈球菌對阿奇霉素、土霉素和磺胺嘧啶呈現(xiàn)出中度耐藥性。

豬鏈球菌 藥敏試驗 抗藥性 敏感

豬鏈球菌病是由多種不同群的鏈球菌所引起的一種傳染性疾病，最常見的有關(guān)節(jié)炎型、淋巴結(jié)膿腫型和敗血型等幾種類型。近些年豬鏈球菌病在我國發(fā)生較為普遍，對我國的養(yǎng)殖業(yè)經(jīng)構(gòu)成了嚴重威脅。隨著該病情的不斷蔓延，治療此病的多種藥物也開始走向市場，但是經(jīng)過實驗和實踐使用發(fā)現(xiàn)臨床效果不佳，多種藥物沒有達到預(yù)期效果。青霉素是治療豬鏈球菌病的常見藥物之一，但是對于革蘭氏陽性菌的治療效果并不顯著，這可能與致病性鏈球菌的抗藥性有關(guān)。甘孟侯(1985-1991)利用雞源葡萄球菌進行藥敏試驗，結(jié)果表明，菌株對青霉素的抗藥性由最初的52%上升到100%；鏈霉素的抗藥性由36%上升至50.8%；四環(huán)素的耐藥性由71.2%上升至85%。1967～1975年美國就曾報道沙門氏菌總的耐藥率由最初的22%上升到55%。通過這兩組數(shù)據(jù)可以看出，菌體的耐藥性是逐漸增強的，這就致使一些抗生素藥類在臨床上的效用不大，最終會導(dǎo)致豬鏈球菌病的流行，提高了豬的死亡率。因此，要加強對細菌耐藥性的監(jiān)查工作，掌握細菌的抗藥情況。本論文希望能夠通過對藥物的藥敏實驗來篩選出對豬鏈球菌病具有敏感反應(yīng)的藥物，為臨床治療提高相關(guān)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗藥品和藥敏紙片

1.1.1 藥敏紙片 YZB/國1748-2006《抗生素藥敏紙片》北京天壇藥物生物技術(shù)開發(fā)公司。

1.1.2 試驗藥品 環(huán)丙沙星、恩諾沙星、青霉素鉀、氨芐西林(北京端木圣達生物技術(shù)有限公司)，阿奇霉素、頭孢噻呋、氟本尼考、卡那霉素(楊凌正大獸藥生物科技有限公司)，慶大霉素、土霉素、磺胺嘧啶(廣東利潤生物制藥有限公司)，共11種。

1.2 病例確診

1.2.1 病料來源 選自庫爾勒7個規(guī)?；B(yǎng)豬場20頭病豬。

1.2.2 臨床癥狀 20頭病例體溫都存在顯著升高現(xiàn)象，精神萎靡，食欲不振，四肢無力，行走不便，呼吸急促，并且在四肢、頸部、耳廓以及腹下皮膚都出現(xiàn)血點。個別豬伴有腹瀉和尿血現(xiàn)象。

1.2.3 病理剖析 在病死豬的腹下、頸下和四肢末端皮膚出現(xiàn)紫色出血斑點，急性型死亡的豬從口鼻中流出顏色發(fā)暗的血液。剖檢還可以清晰看到胸腔內(nèi)存有大量的紅色和渾濁的液體，含有黃色纖維素物質(zhì)，并且心包液增量。心機外膜與心包膜連在一起，心機柔軟并顏色變淡。機體的右心室擴張，心耳、心冠狀溝和右心室內(nèi)膜有充血現(xiàn)象和出現(xiàn)斑點，脾臟增大，顏色變灰或暗紅色。機體淋巴結(jié)水腫伴有出血狀?；疾￡P(guān)節(jié)存有漿液纖維素性炎癥。

1.2.4 染色鏡檢 對所取的發(fā)病部位觸片并革蘭氏染色后進行鏡檢，鏡檢發(fā)現(xiàn)革蘭氏陽性球菌，多呈單個或者成對排列，同時也存在幾個相連的短鏈。

1.2.5 細菌培養(yǎng) 無菌狀態(tài)下取豬的心臟、脾臟、肺臟、淋巴結(jié)和腫大的關(guān)節(jié)組織，之后接種到普通的血液瓊脂板上和馬丁瓊脂平板上，在37℃恒溫下培養(yǎng)20～24h。在血液瓊脂平板上可以看到無色的、光滑的、邊緣整齊的、直徑為0.5～1.0mm的細小菌落，周邊形成無色透明的溶血環(huán)。之后從血液瓊脂平板和馬丁瓊脂平板上選擇典型菌落進行涂片，觀察可見單個的、成對的、短鏈的和極少長鏈的鏈球菌。

1.2.6 生化試驗 通過利用典型菌落進行生化實驗發(fā)現(xiàn)，可發(fā)酵葡萄糖、乳糖以及蔗糖，都不能在0.13%的美蘭牛乳和6.6%的氯化鈉肉湯中生長，但是能夠水解淀粉，這些特性符合豬鏈球菌的特質(zhì)。

1.2.7 藥敏試驗 按照常規(guī)紙片法進行操作。在無菌狀態(tài)下來挑取鏈球菌菌落，在對其搖勻之后涂在馬丁血清瓊脂平板上，之后將實驗所需要的11種藥敏紙片按照1.5cm的距離放在培養(yǎng)基的表面，并且溫度需要保持在37℃培養(yǎng)18～24h之后取出，觀察是否存在抑菌圈或者抑

菌圈的大小。

2 試驗結(jié)果

藥敏試驗的判定以抑菌圈的大小為標準。試驗中藥敏紙片的周圍會形成抑菌圈，當(dāng)抑菌圈的直徑在15mm以上(包含15mm)說明該藥品是高敏感；當(dāng)抑菌圈的直徑在10～15mm之間，說明藥品具有中毒敏感；當(dāng)抑菌圈的直徑在10mm以內(nèi)，則該藥品表現(xiàn)為低敏感性亦耐藥性。具體藥敏試驗結(jié)果如附表。

附表 藥品藥敏實驗結(jié)果 (株、%)

3 討論與小結(jié)

（1）從附表中可以看出，日常所使用的藥品中存在很多類對豬鏈球菌病的作用不明顯，豬鏈球菌菌株對其具有很強的抗性。試驗中所分離的菌株對恩諾沙星、青霉素鉀以及慶大霉素都存在超強的抗藥性，耐藥率已經(jīng)達到100%，氨芐西林的耐藥性雖然沒有達到100%，但是也表現(xiàn)出了極強的耐藥性；豬鏈球菌對卡那霉素、環(huán)丙沙星、頭孢噻呋和氟本尼考的敏感度較高，尤其是對環(huán)丙沙星的敏感度已經(jīng)達到100%，說明這幾種藥品對豬鏈球菌病的防治能夠起到一定的作用；豬鏈球菌對阿奇霉素、土霉素和磺胺嘧啶呈現(xiàn)出中度耐藥性。（2）通過試驗可以看出，日常用藥中有很多類對豬鏈球菌是沒有作用的，菌株對其存在耐藥性。而菌株能夠產(chǎn)生耐藥性一定程度上是與藥物的不合理利用有關(guān)。其他實驗報告曾指出，我國對藥物的利用具有隨意性和不合理性，缺乏科學(xué)用藥的意識，濫用現(xiàn)象較為嚴重。筆者對庫爾勒地區(qū)多家養(yǎng)殖場進行調(diào)研發(fā)現(xiàn)，部分養(yǎng)殖場一直使用常用藥物作為防病添加劑。這些養(yǎng)殖場對某些藥物的使用儼然成為一種習(xí)慣。比如最常用的青霉素，在養(yǎng)殖場中作為萬能藥來使用，豬的消化問題、腸道的問題的首選藥物之一。（3）豬鏈球菌對藥物產(chǎn)生耐藥性與市場環(huán)境也存在關(guān)聯(lián)性。藥品商家的違法行為致使大量假藥流入市場，而這部分藥品對豬鏈球菌并沒有起到殺滅作用，如果不經(jīng)過化驗，養(yǎng)殖場很難知道假藥的存在，慢慢其危害性就會顯露出來，豬鏈球菌的發(fā)展擴散，最后導(dǎo)致豬的死亡，因此也會加劇養(yǎng)殖業(yè)的經(jīng)濟損失，嚴重阻礙養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。

[1] 歐陽素貞, 王雙山等. 豬鏈球菌分離株的分群鑒定及藥敏試驗[J].安陽工業(yè)學(xué)院學(xué)報, 2006(01): l.

[2] 乎顯生, 李靜姬. 1株豬源性鏈球菌的分離鑒定及藥敏試驗[J]. 中國公共衛(wèi)生, 2006(22): l-2.

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